药物分析维生素类药物分析VA测定

药物分析专题·CONTENTDETERMINATION维生素A药物分析含量测定方法专题汇报时间：2026维生素A·含量测定专题课程导览从结构到方法优选，四章递进把握分析逻辑结构与性质共轭多烯与紫外吸收鉴别与检查专属反应与杂质限度含量测定三点校正法与HPLC方法比较三法对比与适用场景壹贰叁肆结构与性质结构决定性质，性质决定分析方法01药物分析·维生素A维生素A的分子结构与生物活性结构特征β-紫罗酮环

＋

共轭多烯醇侧链脂溶性化合物测定依据侧链多个共轭双键，产生选择性紫外吸收325~328nm选择性紫外吸收波长三种形式与活性差异维生素A1（视黄醇）活性基准维生素A2（3-去氢视黄醇）30%~40%约为A1的活性维生素A3（脱水维生素A）0.4%仅为A1的活性稳定性警示多不饱和结构易被光、热、氧化剂破坏，测定须避光并尽快进行。维生素A含量测定专题04/18药物分析·维生素A紫外吸收特性与杂质干扰吸收基础5个共轭双键326nm最大吸收峰维生素A含5个共轭双键，无水乙醇溶液在

326nm

附近呈单一最大吸收峰，紫外分光光度法由此成为含量测定的首选基础方法。干扰来源异构体氧化降解产物合成中间体稀释用油原料药中常混有上述杂质，这些杂质在紫外区同样有吸收，与主成分信号混叠。杂质吸收与维生素A共处同一紫外区问题实质326nm

处测得的吸光度是主成分与杂质的叠加值，并非维生素A的独有贡献。要准确定量，必须扣除杂质无关吸收。这正是三点校正法的核心思路维生素A含量测定专题05/18鉴别与检查先辨真伪，再控纯度02药物分析·维生素A三氯化锑鉴别反应反

应

本

质Carr-Price反应，维生素A最经典的专属鉴别。操作与现象油溶液经三氯甲烷溶解，与

25%

三氯化锑

三氯甲烷溶液作用，即显蓝色，渐变成紫红色。蓝色紫红色原理维生素A与亲电试剂氯化高锑（Ⅴ）作用，生成不稳定的蓝色碳正离子。关键条件须在无水、无醇条件下进行，水和醇会显著影响显色。无水无醇考点颜色变化次序（蓝→紫红）与反应条件。维生素A含量测定专题07/18药物分析·维生素A紫外光谱与薄层色谱鉴别紫外光谱法直接测定以无水乙醇-盐酸（100:1）溶解供试品326

nm单一吸收峰水浴加热30秒后迅速冷却，脱水生成脱水维生素A，共轭双键增加一个，吸收峰红移红移后测定348

nm367

nm389

nm332

nm较低吸收峰或拐点三个尖锐吸收峰薄层色谱法吸附剂硅胶G展开剂环己烷-乙醚（80:20）显色点样后喷三氯化锑溶液判断比较供试品与对照品的蓝色斑点位置三种鉴别各有侧重，常组合使用维生素A含量测定专题08/18药物分析·维生素A酸值与过氧化值检查维生素A制剂以植物油为稀释剂且分子易氧化，须用两项限度共同把关酸败程度。酸值反映游离脂肪酸含量1取本品

2.0g，乙醇-乙醚溶解2加酚酞指示液3氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定限度：酸值不得过2.0过氧化值反映油脂氧化程度1取本品

1.0g，冰醋酸-三氯甲烷溶解2加碘化钾饱和溶液

1ml，淀粉指示3硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失限度：消耗量不得过1.5ml维生素A含量测定专题09/18含量测定消除干扰，准确定量03药物分析·维生素A三点校正法的原理根基三点校正法建立在两条原理之上。原理一·杂质直线吸收310~340nm

范围内，杂质的无关吸收几乎呈一条直线，且随波长增大吸收度下降。原理二·吸收加和性各波长处的吸光度是维生素A与杂质吸收度的代数和，吸收曲线也是二者的叠加。据此推导校正思路三波长测吸光度在最大吸收波长及其两侧各选一个波长测定吸光度构造校正公式利用杂质吸收近似直线的特性扣除杂质贡献从总吸光度中扣除杂质的影响计算含量得到维生素A的真实吸光度，再计算含量维生素A含量测定专题11/18药物分析·维生素A第一法：等波长差法测定醋酸酯测定波长316nm328nm·最大吸收340nm三波长等波长差选取，其中

328nm

为最大吸收波长。单位换算×1900每1g供试品维生素A单位数=校正吸光度

×19000.344μg每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344μg300nm316nm340nm360nm0.5550.9070.8110.299判定流程先算各波长吸光度与328nm的比值，对照上表标准比值。符合→直接计算吸收峰落在

326~329nm

且比值偏差不超过

±0.02，直接用A328

计算。超差→套用校正公式比值偏差超出

±0.02

时，按左侧校正公式重新计算吸光度。校正公式A328(校正)=3.52(2A328−A316−A340)维生素A含量测定专题·三点校正法（第一法）12/18药物分析·维生素A第二法：等吸收比法经皂化测定何时改用第二法校正吸光度与未校正吸光度偏差超出

-15%～+3%，或吸收峰不在

326～329nm

时改用。测定对象与波长维生素A醇，等吸收比法，于

310nm、325nm、334nm

测定；两侧波长吸光度约为最大吸收波长的

七分之六。校正公式A325(校正)=6.815A325−2.928A3341830换算因子每单位相当于全反式维生素A醇

0.300μg皂化预处理以除去稀释用油与杂质干扰STEP1·加试剂样品加乙醇

30ml

与50%氢氧化钾溶液

3mlSTEP2·回流回流

30分钟STEP3·提取乙醚提取

4次维生素A含量测定专题13/18药物分析·维生素A高效液相色谱法测定HPLC是另一法定含量测定方法，适合复方制剂与杂质复杂的样品。反相HPLC色谱柱C18柱（150mm×4.6mm，5μm）流动相甲醇-水（97:3）流速1.0mL/min检测波长326nm进样量20μL操作简单、系统稳定正相HPLC色谱柱HypersilSiO₂柱（250mm×4.6mm，5μm）流动相正己烷-异丙醇（99.7:0.3）流速0.8mL/min检测波长325nm分离控杂较好，但系统稳定性相对较差定性靠保留时间，定量按峰面积外标法。维生素A含量测定专题14/18方法比较没有最好，只有最合适04药物分析·维生素A三种方法的实测对比紫外三点校正法UV·三点校正95.5%实测含量（同一批样品）RSD1.3%正相高效液相色谱法NP-HPLC112.5%实测含量（同一批样品）RSD3.2%反相高效液相色谱法RP-HPLC102.3%实测含量（同一批样品）RSD1.0%紫外三点校正法：操作简单、精密度好，适合常规质控反相HPLC：精密度最好，适合常规质控正相HPLC：控杂质能力较强，但系统稳定性差、结果偏高方法选择直接影响测定结果，选法前须结合样品基质与杂质情况综合判断。维生素A含量测定专题·同一样品三种方法实测16/18药物分析·维生素A方法优选与适用场景法定双轨：现行《中国药典》通则0721规定，维生素A含量测定可采用紫外-可见分光光度法或高效液相色谱法，两者均为法定方法。紫外三点校正法成本低、无需复杂前处理，适合单一成分制剂。局限：对含类胡萝卜素等显色杂质的样品，校正难以彻底扣除干扰。HPLC法分离选择性高，适合复方制剂、强化食品与基