化妆品中霉菌和酵母菌总数的检验方法2026

附件6化妆品中霉菌和酵母菌总数的检验方法MoldsandYeastsCountinCosmetics1范围本方法规定了化妆品中霉菌和酵母菌总数的检验方法。本方法适用于化妆品中霉菌和酵母菌总数的测定。2定义霉菌和酵母菌总数MoldsandYeastsCount化妆品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的霉菌和酵母菌总数，便于判明样品被霉菌和酵母菌污染的程度及卫生状况。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1培养箱：25±1℃。3.2恒温水浴箱：48±2℃。3.3天平：显示分度值为0.1g。3.4均质器及无菌均质袋或无菌均质杯。3.5旋涡混合器。3.6无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及配套无菌吸头。3.7无菌锥形瓶：250mL、500mL。3.8无菌试管：18mm×150mm。3.9无菌平皿：直径90mm。3.10量筒：200mL。3.11放大镜或菌落计数器。4培养基、稀释液和冲洗液4.1生理盐水：见A.1。4.2卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基：见A.2。4.3pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：见A.3。5操作步骤5.1样品的制备按照微生物检验方法总则4.3制备1:10的检液。5.2样品的稀释取1:10的检液1mL，注入到9mL稀释液（灭菌生理盐水、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的稀释液）中（注意勿使吸管接触液面），充分混匀，制成1:100的检液。依次制备10倍系列稀释检液，每递增稀释一次，更换1次无菌吸管或吸头。5.3平板计数方法5.3.1平板倾注法根据对样品污染状况的估计，选择1～3个适宜稀释度的检液。分别吸取1mL检液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL稀释液加入两个无菌平皿内，作为空白对照。将融化并冷却至46～50℃的卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基倾注到平皿内，每皿15～20mL，使检液与培养基充分混合均匀。待培养基凝固后，翻转平板，倒置于25±1℃培养箱内培养，观察并记录培养至第5d的结果。5.3.2薄膜过滤法为消除样品抑菌性，若性质允许，可采用微生物检验方法总则附录E中薄膜过滤法进行计数，冲洗完成后，将滤膜取出，过滤面朝上贴于卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基平板上，翻转平板，倒置于25±1℃培养箱内培养，观察并记录培养至第5d的结果。以稀释液代替检液，按照薄膜过滤法相应的操作步骤进行空白对照试验。5.4菌落计数5.4.1观察并记录稀释倍数及相应的霉菌和酵母菌数，必要时可用放大镜或菌落计数器辅助观察。计数结果以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。5.4.2选取菌落数在15～150CFU之间、无蔓延菌落生长的平板，根据菌落形态计数霉菌和酵母菌总数。菌落蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。5.5若实验室按照微生物检验方法总则附录E开展方法适用性试验，可采用经适用性试验确认的方法进行霉菌和酵母菌总数的检验。推荐质控菌株信息详见附录B。6结果与报告6.1平板倾注法霉菌和酵母菌总数的计算方法6.1.1若只有一个稀释度的两个平板菌落数在适宜计数范围内，计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，即为每g（mL）样品中所含的霉菌和酵母菌总数。6.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，则按照菌落总数检验方法的相应规定进行计算。6.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于15CFU，则应按稀释度最低的平板进行计数，结果按平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.5若所有稀释度平板均无菌落生长或平均菌落数小于1时，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在15～150CFU之间，其中一部分小于15CFU或大于150CFU时，则以最接近15CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.2薄膜过滤法霉菌和酵母菌总数的计算方法薄膜过滤法适宜计数范围和计算方法同平板倾注法。6.3结果报告6.3.1霉菌和酵母菌总数小于100CFU时，按实有数值以整数报告。6.3.2霉菌和酵母菌总数大于或等于100CFU时，第三位数字按“四舍五入”原则修约后，保留两位有效数字，后面位数用0代替；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，保留两位有效数字。6.3.3若空白对照平板上有菌落生长，则此次检验结果无效。6.3.4按重量取样的检样以CFU/g为单位报告，按体积取样的检样以CFU/mL为单位报告。

附录A（规范性附录）培养基和试剂A.1生理盐水见微生物检验方法总则C.4。A.2卵磷脂-吐温80-孟加拉红培养基成分：蛋白胨 5.0g葡萄糖 10.0g磷酸二氢钾 1.0g硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.5g琼脂 20.0g卵磷脂 1.0g吐温80 7.0g孟加拉红 0.033g氯霉素 0.1g蒸馏水 1000mL制法：将上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，补足蒸馏水至1000mL，分装，121℃高压灭菌15min，避光保存备用。A.3pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液成分：磷酸二氢钾3.56g无水磷酸氢二钠5.77g氯化钠4.30g蛋白胨1.00g蒸馏水1000mL制法：称取上述成分，微温溶解，必要时过滤使澄清，分装，121℃高压灭菌15min，备用。根据检样的特性，可选用生理盐水、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他经验证的适宜溶液作为稀释液或冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

附录B（资料性附录）推荐质控菌株表B.1推荐质控菌株信息表序号a中文名拉丁名CMCC编号bCICC编号cGDMCC编号d1白色念珠菌CandidaalbicansCMCC(F)98001CICC1965GDMCC2.1782黑曲霉Aspergil