病理学技术理论知识考核试题及答案

病理学技术理论知识考核试题及答案一、单项选择题（共20题，每题1分，总计20分）1.病理科常规标本固定最常用的10%中性缓冲福尔马林，其实际甲醛浓度为A.10%B.8%C.4%D.2%2.按照病理技术操作规范，常规活检组织离体后应在30分钟内启动固定，固定时间应不少于A.1小时B.3小时C.6小时D.24小时3.常规石蜡组织处理流程中，脱水环节常用的脱水剂梯度设置正确的是A.30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇→无水乙醇B.70%乙醇→80%乙醇→90%乙醇→95%乙醇→无水乙醇C.无水乙醇→95%乙醇→80%乙醇→70%乙醇→50%乙醇D.50%丙酮→70%丙酮→90%丙酮→无水丙酮4.常规石蜡包埋时，若选用熔点为56~58℃的病理级石蜡，包埋仪的温度设置最适宜的范围是A.52~54℃B.58~60℃C.65~67℃D.70~72℃5.常规HE染色石蜡切片的标准厚度为A.2~3μmB.4~5μmC.8~10μmD.12~15μm6.HE染色中，用于细胞核染色的苏木精属于A.碱性染料，可与嗜碱性的核酸物质结合呈蓝色B.酸性染料，可与嗜酸性的胞质蛋白结合呈红色C.中性染料，可同时染核和胞质D.金属螯合染料，仅染结缔组织7.HE染色分化步骤常用的1%盐酸酒精，其配制比例为A.1ml浓盐酸+99ml70%乙醇B.1ml浓盐酸+99ml无水乙醇C.1ml浓盐酸+99ml蒸馏水D.1ml冰醋酸+99ml95%乙醇8.网状纤维染色最常用的方法是A.HE染色B.Gomori银浸染色C.PAS染色D.油红O染色9.过碘酸-雪夫（PAS）染色不能显示的组织成分是A.糖原B.真菌细胞壁多糖C.肾小球基底膜D.脂肪组织10.Masson三色染色中，胶原纤维的染色结果为A.红色B.蓝色或绿色C.黑色D.棕黄色11.免疫组织化学染色中，检测组织内源性抗原最常用的固定液是A.10%中性缓冲福尔马林B.Zenker固定液C.无水乙醇D.丙酮12.以下抗原修复方法中属于热诱导抗原修复的是A.0.1%胰蛋白酶37℃消化10分钟B.0.4%胃蛋白酶37℃消化30分钟C.pH6.0柠檬酸缓冲液高压修复2分钟D.0.02%蛋白酶K室温消化5分钟13.原位杂交技术检测的靶标是A.组织细胞内的特定蛋白质B.组织细胞内的特定DNA或RNA序列C.组织细胞内的脂质成分D.组织细胞内的多糖成分14.病理巨检记录中，对肿瘤标本不需要常规记录的内容是A.肿瘤的大小、部位、形状B.肿瘤的切面性状、有无坏死出血C.肿瘤距手术切缘的距离D.肿瘤的化疗反应评分15.术中冷冻切片的常规切片厚度为A.1~2μmB.5~7μmC.10~12μmD.15~20μm16.病理科处理新鲜手术标本、感染性标本的生物安全防护等级应为A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-417.用于EGFR、KRAS等基因突变分子检测的石蜡标本，固定时间的适宜范围是A.30分钟以内B.1~2小时C.6~48小时D.72小时以上18.显示新型隐球菌荚膜的特殊染色方法是A.抗酸染色B.黏液卡红染色C.油红O染色D.普鲁士蓝染色19.常规HE染色、DAB显色免疫组化染色的封片应选用A.中性树胶（脂溶性封片剂）B.甘油明胶（水性封片剂）C.生理盐水D.蒸馏水20.石蜡切片制作时，出现切片厚薄交替、纹路明显的最常见原因是A.展片水温过低B.切片刀或组织块固定不牢、微动螺旋间隙过大C.组织固定时间过长D.脱蜡不彻底【参考答案】1.C2.C3.B4.B5.B6.A7.A8.B9.D10.B11.A12.C13.B14.D15.B16.B17.C18.B19.A20.B二、多项选择题（共10题，每题2分，总计20分，多选、少选、错选均不得分）1.组织固定的核心目的包括A.抑制组织自溶与腐败，保持细胞原有的形态结构B.凝固细胞内蛋白质、核酸等成分，减少内容物扩散C.硬化组织，增加组织韧性，便于后续脱水、包埋、切片操作D.增强组织细胞内成分对染料的亲和力，提升染色效果E.杀灭标本内的病原微生物，降低生物安全风险2.影响组织固定效果的主要因素包括A.固定液的种类与pH值B.固定液与组织的体积比例C.环境温度与固定时长D.组织块的厚度与大小E.标本离体后至浸入固定液的间隔时间3.石蜡切片制作流程中，可导致切片碎裂、组织脆硬的原因有A.无水乙醇脱水时间过长，组织过度收缩B.二甲苯透明时间过长，组织过度硬化C.浸蜡温度过高，组织蛋白热变性脆化D.骨组织、钙化组织脱钙不充分E.切片刀刃有缺口、角度不当4.HE染色中导致细胞核染色过浅的原因包括A.苏木精染液长期使用氧化失效，染色能力下降B.1%盐酸酒精分化时间过长C.组织固定不及时、固定不充分，核酸降解流失D.切片脱蜡不彻底，染液无法渗透进入组织E.苏木精染色时间过短5.免疫组化染色中出现弥漫性非特异性背景染色的常见原因有A.一抗工作浓度过高，非特异性吸附增加B.内源性过氧化物酶、生物素未充分封闭C.抗体孵育过程中切片干燥D.每步抗体孵育后洗涤不充分，未结合抗体残留E.DAB显色时间过长，显色过度6.可用于组织内真菌检测的特殊染色方法包括A.过碘酸-雪夫（PAS）染色B.六胺银（GMS）染色C.黏液卡红染色D.抗酸染色E.油红O染色7.术中冷冻切片诊断的适用范围包括A.判断送检病变的良恶性，为手术方案制定提供依据B.评估手术切缘是否存在肿瘤残留C.确认送检组织是否为手术目标组织（如甲状旁腺、输卵管）D.判断送检淋巴结是否存在转移癌E.完成淋巴瘤的精确分型诊断8.病理科生物安全操作规范要求包括A.处理新鲜标本、感染性标本应在生物安全柜内操作B.操作时佩戴一次性手套、医用外科口罩，必要时佩戴护目镜C.废弃病理标本按感染性医疗废物处置，经高压灭菌后转运D.使用后的锐器直接投入防刺穿锐器盒，禁止徒手回套针帽E.新鲜标本可在开放取材台直接处理，无需防护9.分子病理检测的标本质量控制要求包括A.优先选用10%中性缓冲福尔马林固定的石蜡标本，避免强酸、强碱固定液降解核酸B.标本固定时间控制在6~48小时，避免固定过短核酸降解、固定过长核酸交联过度C.检测前评估切片中肿瘤细胞占比，需达到对应检测方法的最低要求（通常≥10%）D.避免标本反复冻融，防止核酸片段化E.任何标本无需评估肿瘤细胞含量均可直接检测10.病理标本全流程核对的节点包括A.标本接收时，核对申请单信息与标本标识、标本数量是否一致B.巨检取材时，核对标本编号、取材部位与申请单记录是否一致C.包埋时，核对取材组织块与包埋盒编号是否一致D.切片时，核对蜡块编号与玻片标识是否一致E.报告发放前，核对切片信息、患者信息与诊断记录是否一致【参考答案】1.ABCDE2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABCDE6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCDE三、判断题（共10题，每题1分，总计10分，正确打√，错误打×）1.组织固定时，只要固定液没过组织表面即可达到固定效果，无需固定液与组织达到特定体积比例。2.常规石蜡切片展片的适宜水温为42~45℃，较石蜡熔点低10℃左右，可保证切片平整无褶皱且不会融化。3.HE染色中，伊红染色后需快速经高浓度乙醇脱水，避免在低浓度乙醇中长时间停留导致伊红褪色。4.免疫组化DAB显色时需严格按照固定时间操作，无需镜下观察显色程度。5.骨组织脱钙完成的判断标准为细针可轻松刺入组织无阻力，脱钙不全会导致切片出现刀痕、无法切出完整切片。6.冷冻切片制作时，组织温度越低、硬度越高，切片质量越好。7.Gomori网状纤维染色结果为网状纤维呈黑色，胶原纤维呈淡红色，细胞核呈灰黑色。8.未经过甲醛固定的新鲜冷冻切片做免疫组化时，无需进行抗原修复即可检测大部分抗原。9.六胺银染色（PASM）可清晰显示肾小球基底膜的轮廓与厚度变化，是肾活检病理常用的特殊染色方法。10.油红O染色属于脂溶性染料染色，需用冰冻切片或碳蜡切片进行染色，不能用石蜡切片，因为脂类会被有机溶剂溶解。【参考答案】1.×2.√3.√4.×5.√6.×7.√8.√9.√10.√四、简答题（共4题，每题10分，总计40分）1.简述10%中性缓冲福尔马林固定液的配制方法及组织固定的操作注意事项。2.简述常规石蜡切片HE染色的标准操作流程及常见染色异常的诱因。3.简述免疫组织化学染色中内源性过氧化物酶封闭的目的、常用方法，以及非特异性染色的防控要点。4.简述术中冷冻切片的操作流程及质量控制核心要求。【参考答案】1.（1）配制方法：取40%甲醛水溶液（市售福尔马林）100ml，加入无水磷酸氢二钠6.5g、磷酸二氢钠4.0g，加蒸馏水定容至1000ml，充分搅拌溶解后测定pH值，调整至7.2~7.4，密封保存备用。（3分）（2）操作注意事项：①固定时机：手术标本离体后30分钟内必须浸入固定液，空腔脏器需剪开铺平，大标本需沿最大面每隔1~2cm做平行切开，避免固定液渗透不及时导致深部组织自溶；②固定液用量：固定液体积需达到组织总体积的10~20倍，保证组织完全悬浮于固定液中，不得贴附于容器壁露出液面；③组织块规格：常规取材组织块厚度不超过0.5cm，面积不超过2cm×1.5cm，胃镜、穿刺等小标本需用滤纸包裹或放入专用标本盒，避免丢失；④固定时长：常规活检组织固定时间为6~48小时，固定不足会导致组织结构破坏、抗原与核酸降解，固定过度会导致蛋白交联过度，影响免疫组化与分子检测结果；⑤特殊标本处理：含钙化、骨组织标本初步固定24小时后及时转入脱钙液脱钙，淋巴结等富含细胞的小标本需避免固定时间过长导致组织脆硬。（7分）2.（1）标准操作流程：①烤片脱蜡：切片置于60℃烤片机烘烤30分钟，依次经二甲苯脱蜡2次、每次10分钟，再经梯度乙醇（无水乙醇2次、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各2分钟）下行至蒸馏水冲洗2分钟；②苏木精染色：浸入苏木精染液染色5~10分钟，自来水冲洗去除多余染液，1%盐酸酒精分化数秒（镜下控制至细胞核清晰、胞质无蓝染），自来水流水冲洗返蓝10分钟；③伊红染色：浸入0.5%伊红Y染液染色2~3分钟，自来水轻洗浮色；④脱水透明：依次经80%乙醇、95%乙醇快速分色，再经无水乙醇2次脱水、每次2分钟，最后经二甲苯2次透明、每次5分钟；⑤封片：用中性树胶加盖玻片封片。（5分）（2）常见异常诱因：①细胞核染色过浅：苏木精染液氧化失效、分化时间过长、固定不充分导致核酸降解、脱蜡不彻底、染色时间过短；②细胞核过染、胞质共染：苏木精染色时间过长、分化不足、返蓝不充分；③伊红染色过浅：伊红染液浓度过低、高浓度乙醇停留时间过长导致褪色、染液pH值偏高；④切片脱落：载玻片未做防脱处理、烤片不足、组织固定不良、操作粗暴；⑤染色不均：脱蜡不彻底、染色过程中切片干片、染液有沉淀。（5分）3.（1）封闭目的：组织细胞内本身存在内源性过氧化物酶（红细胞血红蛋白、粒细胞髓过氧化物酶、肝细胞过氧化物酶等），可直接与DAB显色底物反应产生棕黄色非特异性着色，干扰结果判读，封闭步骤可完全灭活这类内源性酶活性，消除假阳性干扰。（2分）（2）常用方法：石蜡切片常用3%过氧化氢甲醇溶液，室温孵育10~15分钟；含血量丰富的组织可适当延长封闭时间，或采用0.3%过碘酸预处理联合硼氢化钠还原的方法强化封闭效果；冷冻切片可采用3%过氧化氢水溶液封闭，避免甲醇导致细胞收缩。（2分）（3）非特异性染色防控要点：①标本处理：采用标准中性福尔马林固定，避免固定过度或不足，操作过程中严禁切片干片；②抗体优化：通过预实验确定一抗、二抗的最佳工作浓度，优先选择4℃过夜孵育一抗，降低非特异性吸附；③封闭充分：除内源性酶封闭外，采用5%~10%与二抗同源的正常血清或牛血清白蛋白室温封闭20~30分钟，阻断组织电荷位点；④洗涤充分：每步抗体孵育后采用含0.05%吐温20的PBS缓冲液洗涤3次、每次5分钟，彻底清除未结合抗体；⑤显色控制：DAB显色全程镜下监控，达到理想显色强度立即用蒸馏水终止反应，避免显色过度；⑥对照设置：每批染色同步设置阳性对照、阴性对照、空白对照，及时排查非特异性染色来源。（6分）4.（1）操作流程：①标本核对接收：核对患者信息、送检部位、临床申请需求，登记编号，记录标本接收时间；②标本取材：吸干标本表面血液黏液，选取代表性病变区域，组织块厚度2~3mm，避免携带过多脂肪、钙化、坏死组织；③冷冻包埋：将组织置于冷冻托上，滴加OCT包埋剂覆盖组织，放入冷冻切片机冷台冷冻，根据组织类型调整冷冻温度；④切片贴附：待组织硬度适宜时切片，厚度5~7μm，将平整切片贴附于洁净载玻片；⑤固定染色：切片立即浸入95%乙醇或AAF固定液固定1~2分钟，经快速HE染色、脱水透明后封片；⑥诊断报告：医师阅片后发出术中冷冻报告，剩余组织及时转入10%中性福尔马林固定，后续常规石蜡切片对照。（5分）（2）质量控制核心要求：①时效控制：从标本接收到出具诊断报告的时间原则上不超过30分钟，满足临床手术决策需求；②温度控制：常规组织冷冻温度设置为-18~-22℃，脂肪组织需调至-25℃左右，脑组织调整为-16℃左右，温度过高会导致组织偏软、切片皱褶，温度过低会导致组织脆裂、冰晶形成，破坏细胞形态；③取材精准：选取病变典型区域，避免漏取病变，动作轻柔减少钳夹损伤；④染色质量：保证核浆对比清晰，无明显褶皱、折叠、冰晶空泡，细胞形态保存完整；⑤结果溯源：冷冻诊断结果需与后续常规石蜡切片诊断结果对照，诊断符合率需达到98%以上，对诊断把握度不足的病例需明确告知临床，待常规石蜡结果确诊，避免误诊。（5分）五、案例分析题（共1题，总计10分）某病理科技师完成一批胃镜活检标本的HE切片制作后，镜下观察发现三类质量问题：①部分切片细胞核染色浅淡，胞质肿胀，黏膜上皮结构模糊，无法清晰辨认细胞形态；②部分切片内散在多发细小空洞，组织碎裂，无法完整观察黏膜层结构；③部分切片上可见弥漫分布的棕黄色细颗粒状杂质，覆盖组织表面，导致细胞核染色不均，影响观察。请结合病理技术操作规范，逐一分析上述问题的可能诱因，并提出对应的改进措施。【参考答案】1.针对核染色浅淡、胞质肿胀、结构模糊的问题（3分）（1）诱因：最核心的原因为固定不及时或固定不充分，胃镜活检标本体积小，若离体后未立即放入固定液、固定液量不足或固定时间短，会导致黏膜上皮快速自溶，细胞内核酸降解，苏木精结合位点减少，表现为核染色浅、胞质水肿、结构模糊；其次脱水程序异常，如低浓度乙醇停留时间不足、高浓度乙醇浓度不够，导致组织脱水不充分，浸蜡不完全，切片时细胞挤压变形，也会加重结构模糊；若苏木精染液失效、分化过度，会进一步加剧核染色浅的问题。（2）改进措施：胃镜标本离体后由内镜室立即放入装有足量10%中性福尔马林的标本瓶中，固定时间不少于6小时，小标本用滤纸包裹防止流失；根据小活检标本特点设置专用脱水程序，定期检测更换脱水试剂，保证脱水充分；定期过滤、更换苏木精染液，