CN119499180A 脂质多聚复合物及制备方法和在治疗肿瘤骨转移中的应用 （浙江大学）

脂质多聚复合物及制备方法和在治疗肿瘤本发明公开了脂质多聚复合物及制备方法用与GSDMB核酸药物络合形成OPSA和GSDMB核酸到脂质多聚复合物LipoNCs。本发明提出构建基聚复合物LipoNCs实现GSDMB核酸药物的体内高21.一种脂质多聚复合物，其特征在于，包括基于氧化响应高分子STING激动剂OPSA和2.根据权利要求1所述脂质多聚复合物，其特征在于，OPSA和GSDMB核酸药物的纳米复合物包裹脂;乙醇胺DOPE、琥珀酸胆固醇酯CHEMS和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺_甲氧基聚乙二醇20007.如权利要求1或2所述脂质多聚复合物或权利要求3~6任一项所述制备方法制备所得脂质多聚复合物在制备治疗肿瘤骨转移药物9.一种治疗肿瘤骨转移的药物，其特征在于，包括34脂质多聚复合物及制备方法和在治疗肿瘤骨转移中的免疫系统对肿瘤的攻击。细胞焦亡是一种高效而迅速的细胞程序性死亡方式，主要通过炎症小体介导包括半胱天冬酶1（Caspase_1）在内的多种Caspase的激活，造成Gasdermin5治疗的前提。GSDM家族中存在一种特殊蛋;6CHEMS和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺_甲氧基聚乙二醇2000DSP[0012]本发明还提供了所述脂质多聚复合物或所述制备方法制备所得脂质多聚复合物本发明提出构建基于氧化响应高分子STING激动剂（OPSA）的脂质多聚复合物表达的ROS触发LipoNCs解离，释放出高分子STING激动剂和GSDMB核酸药物表达GSDMB；同7图3为实施例1中不同N/P比的OPSANCs的粒径分布和Zeta电位图以及凝胶阻滞电图5为实施例1中OPSANCs在4T1细胞的转染效果、细胞毒性和氧化条件对转染效图9实施例1中LipoNCs通过降低细胞膜流动性诱导细胞穿孔的现象及其机制结PEILipoNCs、OPSALipoNCs处理后4T1细胞表面的扫描电镜结果，PEILipoNCs、OPSALipoNCs处理后加入FITC染料的4T1细胞荧光PEILipoNCs、OPSALipoNCs处理后加入FITC染料的4T1图10为实施例1中LipoNCs通过穿孔辅助诱导细胞焦亡的结果，其中，a为过表达为100μm，放大图标尺为40μm，b为上述各组GSDMB蛋白全长以及其切割片段的免疫印迹结8注射8h和48h后小鼠各脏器以及肿瘤组织的活体成像结果，b为注射8h以及48h后各脏器以LipoNCs@pVector、LipoNCs@pGSDMB各组小鼠脾脏中CD4+T细胞比例，b为各组小鼠脾脏中图13为实施例1中LipoNCs对肿瘤骨转移小鼠的抗肿瘤效果，其中，a为注射PBS、图14为实施例1中LipoNCs对肿瘤骨转移小鼠骨质保护效果，其中，a为注射PBS、小鼠来源的腰1腰4背根神经节细胞轴突长度统计结果，d为各组小鼠来源的腰1腰4背根图16为实施例1中LipoNCs拮抗肿瘤骨转移小鼠肿瘤周围神经异常兴奋性以及抑光归一化统计结果，c为各组小鼠的丙酮冷痛反应时间的统计结果，d为各组小鼠的Von[0021]应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发9[0029]为了初步验证基于氧化响应高分子STING激动剂能作为核酸药物的高效递送载带正电的OPSA可以与带负电的GSDMB核酸药物通过静电自组装形成稳定的纳米复[0031]为了进一步验证该体系的氧化响应特性，将N/P=15的纳米复合物OPSANCs在续的电泳凝胶实验。在琼脂糖凝胶中分别加入10μL未经处理的pGSDMB和10μ浓度。化学发光强度通过蛋白浓度进行归一化，其单位为每毫克蛋白发光强度RLU/mg[0034]为了进一步证明细胞内的ROS对OPSANCs转染的影响，在培养基中添加不同浓度[0036]ii.OPSANCs激活STING的研究：OqPCR、ELISA分别检测STING通路相关蛋白（STING、TBK1、IRF3及其磷酸化蛋白pSTING、DNA转染后能否诱发细胞焦亡，利用WB检测OPSA@pGSDMB转染后GSDMB的表达情况。首先将4T1细胞按每孔3×105个接种于6孔板中，在3过0.25%胰酶消化，FBS终止消化后离心，PBS重悬。重悬后的4T1细胞每100万个胞进行明场显微镜的拍摄，并收集细胞上清液，后续加入RIPA裂解液收集各组4T1细胞蛋且在通过电转模拟CTLs递送GZMA后，转染GSDMB后的4T1细胞表现为明显的细胞肿胀膨大，形成大量小泡（如图7中b细胞培养液上清中LDH和ATP释放显著增多（如图7中c和图7中验所用脂质体。而后通过上述相同的方式获得N/P=15的OPSANCs，获得的脂质体和OPSA进行成像，观察细胞表面上的孔径大小。结果表明，4T1细胞经含有OPSANCs的LipoNCs实验，细胞经过8h孵育后，弃去细胞培养基，通过细胞膜染料NBD_C6_HPC在室温下染色OPSALipoNCs中包裹的OPSA所发生有赖于CTLs通过穿孔素将GZMA有效递送WB结果也证实了GZMA对GSDMB蛋白的剪切（如图10中b说明本发明构建的LipoNCs脂质多动髌韧带位置使得股骨内外侧髁暴露。将5x104个4T1_Luc肿瘤细胞注射到股骨内外侧髁过激活STING通路显著增加小鼠脾脏中CD4+和CD8+T细胞的比例，而GSDMB介导的细胞焦亡进中cLipoNCs@pGSDMB还促进了小鼠脾脏中中央记忆型T细胞（TCM）和效应记忆型T细胞述方式进行小鼠的骨内成瘤造模和分组，分别对Control组、LipoNCs@pVector组和比较各组骨内肿瘤大小。实验结果表明LipoNCs@pGSDMB组能够显著抑制骨内肿瘤的生长，CT对小鼠荷瘤部位骨缺损区域进行扫描并三维重建（如图14中a结果表明LipoNCs@破坏能力。且还对相应部位的背根神经节进行离体培养后染色，腰1_腰4部位的背根神经节通过上述[0048]实验结果表明在KCl刺激情况下LipoNCs@pGSDMB组小鼠钙流上升幅度较低，且后