HJ 1472-2026 水质 9种微囊藻毒素的测定 液相色谱-三重四极杆质谱法

ICS13.060.50CCSZ10中华人民共和国国家生态环境标准HJ14722026水质9种微囊藻毒素的测定液相色谱-三重四极杆质谱法Waterquality—Determinationof9microcystins—Liquidchromatography-triplequadrupolemassspectrometry本电子版为正式标准文件，由生态环境部环境标准研究所审校排版。2026-05-15发布2026-08-15实施生态环境部发布I前言 12规范性引用文件 13方法原理 14干扰和消除 15试剂和材料 16仪器和设备 27样品 38分析步骤 49结果计算与表示 6 811质量保证和质量控制 附录A（规范性附录）方法的检出限和测定下限 附录B（资料性附录）质谱多反应监测条件 附录C（资料性附录）方法的准确度 为贯彻《中华人民共和国生态环境法典》和《生态环境监测条例》等法律法规的规定，防治生态环境污染，改善生态环境质量，规范水中微囊藻毒素的测定方法，制定本标准。本标准规定了测定地表水、地下水和海水中9种微囊藻毒素的液相色谱-三重四极杆质谱法。本标准为首次发布。本标准的附录A为规范性附录，附录B～附录C为资料性附录。本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。本标准主要起草单位：重庆市生态环境监测中心。本标准验证单位：浙江省生态环境监测中心、江苏省环境监测中心、国家环境分析测试中心、天津市生态环境监测中心、青海省生态环境监测中心、海南省生态环境监测中心。本标准生态环境部2026年5月15日批准。本标准由生态环境部解释。1水质9种微囊藻毒素的测定液相色谱-三重四极杆质谱法警告：实验过程中使用的试剂和标准溶液为有毒有害物质，溶液配制和样品前处理应在通风橱内操作；按要求佩戴防护器具，避免吸入呼吸道或接触皮肤和衣物。本标准规定了测定水中9种微囊藻毒素的液相色谱-三重四极杆质谱法。本标准适用于地表水、地下水和海水中微囊藻毒素-RR、微囊藻毒素-YR、微囊藻毒素-HtyR、微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-WR、微囊藻毒素-LA、微囊藻毒素-LY、微囊藻毒素-LW和微囊藻毒素-LF共9种微囊藻毒素的测定。直接进样法：进样体积为20.0μL时，方法检出限为0.2μg/L～0.4μg/L，测定下限为0.8μg/L~1.6μg/L，详见附录A。直接进样法不适用于海水样品测定。固相萃取法：取样体积为200mL，定容体积为1.0mL，进样体积为10.0μL时，方法检出限为0.01μg/L～0.02μg/L，测定下限为0.04μg/L～0.08μg/L，详见附录A。2规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用标准，仅注日期的版本适用于本标准。凡是未注日期的引用标准，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。其他文件被新文件废止、修改、修订的，新文件适用于本标准。GB17378.3海洋监测规范第3部分：样品采集、贮存与运输HJ91.2地表水环境质量监测技术规范HJ164地下水环境监测技术规范HJ442.3近岸海域环境监测技术规范第三部分近岸海域水质监测3方法原理样品中微囊藻毒素经冻融后，直接进样或经固相萃取法富集，用液相色谱-三重四极杆质谱仪分离检测，根据保留时间与特征离子丰度比定性，内标法定量。4干扰和消除样品存在基质干扰时，可通过稀释样品、减少取样量或优化色谱条件等方式降低或消除干扰。5试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含目标化合物的纯水。25.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.4氨水（NH3·H2Ow∈[25%，28%]。将甲醇（5.1）和水按3:1的体积比混合均匀。将甲醇（5.1）和水按3:7的体积比混合均匀。将甲酸（5.3）和甲醇（5.1）按1:999的体积比混合均匀。将甲酸（5.3）和水按1:999的体积比混合均匀。5.109种微囊藻毒素标准贮备液：ρ=5.0mg/L～25.0mg/L。购买市售有证标准溶液，溶剂为甲醇或乙腈，按照标准溶液证书要求保存。5.119种微囊藻毒素标准使用液：ρ=1.0mg/L。移取适量微囊藻毒素标准贮备液（5.10用甲醇（5.1）配制，使各目标化合物浓度均为1.0mg/L，于-18℃以下冷冻、密封、避光可保存60d。5.12内标贮备液：ρ=100mg/L。推荐选用节球藻毒素，当环境中存在时，也可选用亮氨酸脑啡肽或13C2-环孢菌素A-d4或其他性质相近的物质为内标。购买市售有证标准溶液，溶剂为甲醇或乙腈，按照标准溶液证书要求保存。5.13内标使用液：ρ=1mg/L～10mg/L。移取适量内标贮备液（5.12用甲醇（5.1）配制成内标使用液，使节球藻毒素浓度为5.0mg/L，若选用亮氨酸脑啡肽或者13C2-环孢菌素A-d4为内标时，亮氨酸脑啡肽浓度为1mg/L，13C2-环孢菌素A-d4浓度为10.0mg/L，于-18℃以下冷冻、密封、避光可保存90d。5.14滤膜：孔径为0.45μm，玻璃纤维滤膜材质。5.15固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，500mg/6mL，或其他等效固相萃取柱或膜。5.16针式过滤器：孔径为0.22μm，亲水性聚丙烯或聚醚砜材质。5.17冷冻管：10mL或其他规格，具塞冷冻管，聚丙烯、聚乙烯或其他等效材质。5.18氮气：纯度≥99.99%。6仪器和设备6.1采样瓶：1L，棕色玻璃瓶，具塞磨口或具聚四氟乙烯衬垫螺旋盖。6.2液相色谱-三重四极杆质谱仪：液相色谱仪具备梯度洗脱功能，三重四极杆质谱仪配备电喷雾离子源（ESI），具备多反应监测功能。6.3色谱柱：填料粒径为3μm，柱长为150mm，内径为2.1mm的C18色谱柱或其他等效色谱柱。6.4固相萃取装置：自动或手动（带真空泵），流速可调节。6.5浓缩装置：温度可控，氮吹浓缩仪或其他性能相当的设备。6.6超声波清洗器：功率≥100W。6.7冰箱：温度可设至-18℃或以下。36.8水浴锅。6.9收集瓶：250mL，棕色玻璃瓶。6.10样品瓶：2.0mL，棕色玻璃瓶，具聚四氟乙烯衬垫螺旋盖。6.11一般实验室常用仪器和设备。7样品7.1样品采集和保存中，用甲酸（5.3）或氨水（5.4）调节pH值至6～9，密封、避光，4℃以下冷藏保存，5d内完成直接进样分析或固相萃取，萃取液应在4℃以下冷藏、密封、避光保存，28d内完成分析。注：若需测定溶解态的微囊藻毒素，采样时需在现场用滤膜（5.14）过滤，滤液用甲酸（5.3）或氨水（5.4）调节7.2试样的制备7.2.1直接进样法取5.0mL混匀后的样品，装入冷冻管（5.17置于冰箱（6.7）中-18℃以下冷冻50min，取出冷冻管（5.17放入水浴锅（6.8）中，50℃下水浴解冻15min，再重复上述冻融操作2次。混匀后用针式过滤器（5.16）过滤，取1.0mL过滤后的样品，加入10.0μL内标使用液（5.13）置于样品瓶（6.10）中，待测。7.2.2固相萃取法7.2.2.1样品预处理取200mL混匀后的样品，用滤膜（5.14）过滤，收集滤液Ⅰ至收集瓶（6.9）中。滤膜装入冷冻管（5.17置于冰箱（6.7）中，-18℃以下冷冻50min，取出冷冻管（5.17放入水浴锅（6.8）中，50℃水浴解冻15min；再重复上述冻融操作2次。冷冻管（5.17）中加入4mL甲醇溶液Ⅰ（5.5置于超声波清洗器（6.6）中超声10min后，用针式过滤器（5.16）过滤，收集滤液聂，重复2次。合并滤液Ⅰ和滤液聂，待用。7.2.2.2固相萃取将固相萃取柱（5.15）固定在固相萃取装置（6.4）上，依次用10mL甲醇（5.1）和10mL水活化，保持柱头浸润。将预处理后的样品以5mL/min～10mL/min的流速通过固相萃取柱（5.15）。用5mL甲醇溶液聂（5.6）以1mL/min～5mL/min速率淋洗小柱，弃去淋洗液。再以真空抽吸或氮吹的方式使小柱干燥。用10mL的甲酸-甲醇混合溶液（5.8）以1mL/min～3mL/min速率洗脱，收集洗脱液。洗脱液在40℃下经浓缩装置（6.5）浓缩至近干。用甲醇溶液Ⅲ（5.7）定容至1.0mL，加入20.0μL内标使用液（5.13混匀后用针式过滤器（5.16）过滤，置于样品瓶（6.10）中，待测。47.3空白试样的制备用实验用水代替样品，按照与试样的制备（7.2）相同的步骤制备空白试样。8分析步骤8.1仪器参考条件8.1.1液相色谱参考条件流动相A：甲酸溶液（5.9流动相B：乙腈（5.2柱温：35℃；流速：0.4mL/min；进样体积：直接进样法为20.0μL，固相萃取法为10.0μL；梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序018008.1.2质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI正离子模式；监测方式：多反应监测（MRM质谱多反应监测条件见附录B.1。8.1.3仪器调谐按照仪器使用说明书调谐仪器并确认仪器性能，仪器性能正常后测定样品。8.2校准8.2.1标准系列的配制直接进样法：取适量标准使用液（5.11用水配制至少5个浓度点的标准系列，质量浓度分别为1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L和50.0μg/L（此为参考浓度分别取1.0mL制备好的标准系列溶液于样品瓶（6.10）中，加入10.0μL内标使用液（5.13混匀，待测。固相萃取法：取适量标准使用液（5.11用甲醇溶液Ⅲ（5.7）配制至少5个浓度点的标准系列，质量浓度分别为10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L、200μg/L和400μg/L，分别取1.0mL制备好的标准系列溶液于样品瓶（6.10）中，加入20.0μL内标使用液（5.13混匀，待测。8.2.2标准系列的测定按照仪器参考条件（8.1由低浓度到高浓度依次进样分析。目标化合物及内标物的总离子色谱图见图1。500时间（min）1000000800000600000400000200000413568271200000）；）；5——微囊藻毒素-HtyR；6——微囊藻毒素-LR；7——微囊藻毒素-WR；8——微囊藻毒素图1目标化合物和内标物的总离子色谱图(ρ=20μg/L）8.2.3用最小二乘法绘制标准曲线以标准系列溶液中目标化合物的质量浓度为横坐标，目标化合物峰面积与内标物峰面积比值和内标物浓度的乘积为纵坐标，建立标准曲线。8.2.4平均相对响应因子计算目标化合物i的相对响应因子按照公式（1）计算：式中：RRFij——标准系列中第j点目标化合物i的相对响应因子；s,ijA——标准系列中第j点目标化合物is,ijAis,ij——标准系列中第j点目标化合物i对应内标物定量离子的峰面积；ris,ij——标准系列中第j点目标化合物i对应内标物的质量浓度，μg/L；rij——标准系列中第j点目标化合物i的质量浓度，μg/L。目标化合物i的平均相对响应因子按照公式（2）计算：6式中：RRFi——目标化合物i的平均相对响应因子；RRFij——标准系列中第j点目标化合物i的相对响应因子；n——标准系列点数。8.3试样测试按照与标准系列测定（8.2.2）相同的仪器条件测定试样（7.2）。当试样浓度超出标准曲线线性范围时，应重新取样，直接进样法样品用水稀释，固相萃取法样品减少取样量，按照（7.2）重新制备试样并测定。8.4空白试验按照与试样测定（8.3）相同的步骤测定空白试样（7.3）。9结果计算与表示9.1定性分析根据保留时间与离子丰度比定性分析。在相同的实验条件下，试样中目标化合物保留时间与标准溶液中目标化合物保留时间比较，相差±0.2min以内；样品中各目标化合物定性离子的相对丰度（Ksam,i）与浓度接近的标准溶液中对应定性离子的相对丰度（Kstd,i）进行比较，所得偏差在表2规定的最大允许偏差范围内，则可判定样品中存在该目标化合物。Ksam,i和Kstd,i分别按照公式（3）和公式（4）计算：式中：Ksam,i——试样中目标化合物i定性离子的相对丰度，%；Asam2,i——试样中目标化合物i定性离子的峰面积；Asaml,i——试样中目标化合物i定量离子的峰面积。式中：Kstd,i——标准溶液中目标化合物i定性离子的相对丰度，%；Astd2,i——标准溶液中目标化合物i定性离子的峰面积；Astdl,i——标准溶液中目标化合物i定量离子的峰面积。表2相对离子丰度的最大允许偏差KstdKstd,i＞50%Kstd,i≤l0%79.2定量分析9.2.1最小二乘法计算9.2.1.1直接进样法样品中目标化合物i的质量浓度按照公式（5）计算：ri=rc,i×D（5）式中：ρi——样品中目标化合物i的质量浓度，μg/L；ρc,i——从标准曲线上计算得到的试样中目标化合物i的质量浓度，μg/L；D——稀释倍数。9.2.1.2固相萃取法样品中目标化合物i的质量浓度按照公式（6）计算：（6）式中：ρi——样品中目标化合物i的质量浓度，μg/L；ρc,i——从标准曲线上计算得到的试样中目标化合物i的质量浓度，μg/L；V——试样定容体积，mL；cV——取样体积，mL。9.2.2平均相对响应因子法计算9.2.2.1直接进样法样品中目标化合物i的质量浓度按照公式（7）计算：式中：ρi——样品中目标化合物i的质量浓度，μg/L；Ac,i——试样中目标化合物i定量离子的峰面积；A——试样中目标化合物i对应内标物定量离子的峰面积；is,iρis,i——试样中目标化合物i对应内标物的质量浓度，μg/L；RRFi——目标化合物i的平均相对响应因子；D——稀释倍数。9.2.2.2固相萃取法样品中目标化合物i的质量浓度按照公式（8）计算：8式中：ρi——样品中目标化合物i的质量浓度，μg/L；Ac,i——试样中目标化合物i定量离子的峰面积；Ais,i——试样中目标化合物i对应内标物定量离子的峰面积；ρis,i——试样中目标化合物i对应内标物的质量浓度，μg/L；RRFi——目标化合物i的平均相对响应因子；Vc——试样定容体积，mL；V——取样体积，mL。9.3结果表示测定结果小数点后位数的保留与方法检出限一致，最多保留3位有效数字。10.1精密度10.1.1直接进样法6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为1.00μg/L、10.0μg/L和45.0μg/L的空白样品重复测定6次：实验室内相对标准偏差分别为4.4%～13%、1.2%～18%和1.0%～20%；实验室间相对标准偏差分别为9.1%～14%、6.4%～15%和8.2%～16%；重复性限分别为0.2μg/L、1.8μg/L～2.5μg/L和4.4μg/L~9.9μg/L；再现性限分别为0.3μg/L～0.4μg/L、2.5μg/L～3.9μg/L和10μg/L～19μg/L。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为1.00μg/L、10.0μg/L和45.0μg/L的地表水样品重复测定6次：实验室内相对标准偏差分别为1.7%～19%、1.9%～19%和0.76%～19%；实验室间相对标准偏差分别为6.4%～18%、7.5%～16%和11%～17%；重复性限分别为0.2μg/L～0.3μg/L、1.6μg/L～2.8μg/L和7.2μg/L～13μg/L；再现性限分别为0.3μg/L～0.5μg/L、2.4μg/L～4.6μg/L和13μg/L～22μg/L。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为1.00μg/L、10.0μg/L和45.0μg/L的地下水样品重复测定6次：实验室内相对标准偏差分别为1.7%～20%、1.1%～18%和3.3%～18%；实验室间相对标准偏差分别为8.0%～17%、6.1%～16%和7.5%～16%；重复性限分别为0.2μg/L～0.3μg/L、1.8μg/L～2.5μg/L和8.1μg/L～15μg/L；再现性限分别为0.3μg/L～0.5μg/L、2.1μg/L～4.4μg/L和10μg/L～20μg/L。精密度结果详见附录C中表C.1。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的空白样品重复测定6次：实验室内相对标准偏差分别为5.2%～11%、2.8%～19%和1.3%～18%；实验室间相对标准偏差分别为4.8%～15%、8.0%～14%和11%～15%；重复性限分别为0.01μg/L、0.03μg/L～0.07μg/L和0.32μg/L～0.42μg/L；再现性限分别为0.01μg/L～0.02μg/L、0.06μg/L～0.11μg/L和0.56μg/L~0.74μg/L。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的地表水样品重复测定6次：实验室内相对标准偏差分别为1.3%～18%、0.75%～20%和4.4%～26%；实验室间相对标准偏差分别为9.0%～24%、7.1%～21%和12%～23%；重复性限分别为0.01μg/L～0.02μg/L、0.03μg/L~0.07μg/L和0.31μg/L～0.57μg/L；再现性限分别为0.01μg/L～0.03μg/L、0.05μg/L～0.14μg/L和0.60μg/L～1.1μg/L。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的地下水样品重复9测定6次：实验室内相对标准偏差分别为3.5%～22%、2.2%～19%和2.7%～25%；实验室间相对标准偏差分别为8.2%～26%、8.6%～21%和11%～19%；重复性限分别为0.01μg/L～0.02μg/L、0.04μg/L~0.09μg/L和0.30μg/L～0.62μg/L；再现性限分别为0.02μg/L～0.03μg/L、0.06μg/L～0.15μg/L和0.56μg/L～0.86μg/L。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的海水样品重复测定6次：实验室内相对标准偏差分别为1.5%～17%、2.1%～20%和1.2%～21%；实验室间相对标准偏差分别为11%～26%、9.5%～23%和11%～23%；重复性限分别为0.01μg/L、0.04μg/L～0.07μg/L和0.19μg/L～0.48μg/L；再现性限分别为0.02μg/L～0.03μg/L、0.07μg/L～0.14μg/L和0.56μg/L~精密度结果详见附录C中表C.2。10.2.1直接进样法6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为1.00μg/L、10.0μg/L和45.0μg/L的空白样品重复测定6次：加标回收率范围分别为67.4%～107%、64.7%～105%和66.7%～116%，加标回收率最终值分别为76.1%±14%～90.2%±26%、80.2%±19%～89.7%±20%和78.4%±18%～94.9%±26%。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为1.00μg/L、10.0μg/L和45.0μg/L的地表水样品重复测定6次：加标回收率范围分别为57.9%～104%、63.4%～109%和63.1%～118%，加标回收率最终值分别为75.4%±20%～90.9%±17%、77.8%±22%～86.7%±28%和77.4%±21%～92.2%±28%。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为1.00μg/L、10.0μg/L和45.0μg/L的地下水样品重复测定6次：加标回收率范围分别为58.4%～102%、59.0%～108%和62.7%～113%，加标回收率最终值分别为74.3%±20%～85.4%±23%、73.9%±18%～83.5%±22%和75.0%±11%～90.0%±27%。正确度结果详见附录C中表C.3。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的空白样品重复测定6次：加标回收率范围分别为58.3%～106%、68.4%～103%和57.7%～97.5%，加标回收率最终值分别为77.0%±23%～83.4%±25%、82.6%±13%～91.7%±18%和74.4%±19%～82.1%±22%。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的地表水样品重复测定6次：加标回收率范围分别为57.4%～117%、58.1%～115%和52.9%～111%，加标回收率最终值分别为80.3%±24%～92.8%±32%、77.7%±30%～87.6%±37%和76.0%±33%～83.5%±38%。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的地下水样品重复测定6次：加标回收率范围分别为57.3%～123%、51.8%～113%和52.7%～103%，加标回收率最终值分别为81.7%±20%～96.2%±32%、83.2%±17%～88.4%±27%和74.6%±28%～83.1%±22%。6家实验室分别对9种微囊藻毒素加标浓度均为0.05μg/L、0.25μg/L和1.80μg/L的海水样品重复测定6次：加标回收率范围分别为55.9%～124%、56.8%～112%和50.1%～118%，加标回收率最终值分别为83.1%±43%～95.8%±25%、79.7%±25%～96.9%±29%和74.