血细胞计数板的使用.ppt

1、探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化,探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化是一项有着多方面意义和价值的探究活动。在这个探究活动中用到了4个科学方法：（1）数学模型法；（2）抽样检测法；（3）显微观察法；（4）微生物培养法。此外，学生通过亲自研究一个真实的种群，加深了对种群数量变化知识的理解，并且培养了收集、整理、分析数据的能力。,1.基础回扣（1）酵母菌酵母菌是单细胞真核生物。生长周期短，增殖速度快，还可以用酵母菌作为实验材料研究（探究酵母菌的呼吸方式，判断细胞的死活探究膜的透性）,血球计数板的构造和使用,血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中

2、间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由1625=2516=400个小方格组成,见图.,XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，

3、分400个小格，每小格面积是1/400mm2。,（3）血球计数板血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。计数时，常采用样方法。,放大计数室,1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400mm2。,以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉

4、降到血球计数室内.,血球计数板的使用,(5)计数时,如果使用16格25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.,3.计算公式(1)16格25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100400104稀释倍数(2)2

5、5格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80400104稀释倍数,计数原则：取上不取下，取左不取右,计算公式：每毫升原液中酵母细胞个数1mL每个小方格中酵母细胞平均数40010000稀释倍数,血球计数板的使用方法步骤,1镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；,2加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去；,3计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。,例2、检测员将1mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由2