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文档简介

1、实验UV法测定兔血浆中茶碱的血药浓度14级药检2班b组导师:状态,聂旭源尼斯也是1410605425兰蒙基1410605423郑梦瑶1410605412神州1410605504陈明1410605501一、实验目的1、了解氨茶碱血药浓度的紫外检测原理。2、熟悉紫外分光光度计的基本结构和功能。3、UV法为主兔血液中氨茶碱血药浓度的基本过程及回收率计算方法。二、实验原理氨茶碱一般用于临床目的,通过茶碱和乙二胺的缩合,可以从体液中分离茶碱。茶碱是酸碱阳性物质甲基嘌呤剂。常温下溶于水(1: 120)、乙醇(1: 18)、氯仿(1: 86)、氢氧化钠溶液、稀盐酸等溶剂,略微溶解于乙醚,因此有机溶剂可以从血

2、浆中分离出来,产生血浆蛋白的沉淀。茶碱的最大吸收波长为274nm。三、实验设备实验动物:兔子实验仪器:1000毫升吸管、紫外分光光度计、10毫升离心管、离心机、滚动混合器、10毫升离心管、注射器、10毫升容量瓶、注射器、采血针实验试剂:茶碱对照组(38.54毫克100毫升),氯仿、异丙醇、pH5.0磷酸盐缓冲液、盐酸0.1毫升、0.1毫升/l氢氧化钠溶液四、实验阶段1、采血和血液预处理用剪刀剪兔子耳朵中央动脉周围的毛。用酒精棉揉耳朵,直到动脉扩张,血管充血,然后用一次性血管注射针在动脉末端扎血管,使其流血。把血液装在有抗凝剂的试管里。将提取的血从离心机(3000r/min)中离心10分钟。2样

3、品和毛坯准备样品为a管,取茶碱对照组溶液0.5毫升作为样品溶液,添加磷酸盐缓冲液(PH=5)0.6毫升氯仿4.75毫升异丙醇3.65毫升;将其他离心管列为b管,添加除茶碱用蒸馏水代替以外的所有试剂和a管。将两个离心管涡流混合为5min时,3000r/min会离心10min。将下层氯仿液层4ml放入其他离心管,将0.1mol/l氢氧化钠溶液4.0ml,旋流混合,3000r/min离心10min,上层碱溶液4 10ml的容量瓶中,分别稀释0.1mol/l氢氧化钠,放入尺度中摇晃。测量:测定了274nm波长下的吸光度。计算:根据测量结果计算校准回收率。5、数据处理对照组吸光度:0.102范例吸光度:

4、0.022c采样=0.38540.022/0.102=0.0831mg/ml添加茶碱对照物质的量六、分析结论(1)离心后氯仿:异丙醇(95: 5)是乳浊液,因此氯仿:异丙醇几乎相似(1: 1),分层效果更好。(2)离心机的状态很多,离心力不够彻底,分离效果不好,结果不准确。(3)紫外线测量时电压不稳定,再现性很差,测量数据可能不准确。由于上述问题,这次实验结果不正确。六、注意事项1.兔子在采血时要注意相同的伤口,兔子耳朵要比心脏低,采血结束后马上止血。2、离心机总是不令人满意,适当增加转速和时间,在离心力之前记住平整。3.吸收下层氯仿液时,要倾斜离心管,将吸管深入管底,防止附着过多的血浆絮。4、分离血浆时,要把血液放得足够长。否则,

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