Coombs操作说明PPT课件

1、.,1,2008-08-08,新生儿溶血症Coobms试验,.,2,Coobms试验,标本要求：婴儿父母，婴儿各1-2 ml 抗凝血。 检测项目：ABO血型，Rh(D)，直抗， 放散，游离试验。 记费标准：200元。,.,3,一实验前准备：,11%标准A，B，O 型红细胞悬液 （三人以上混合，洗涤一次）。 2. 1%不完全抗体筛选细胞（O型红细胞）、 ，0.2M 巯基乙醇应用液。 3打开37Diana孵育器，56水浴箱， 各离心机电源。,.,4,二新生儿及其父母血型卡、 直抗试验1：,1离心抗凝血标本，取压积红细胞1 ul 加 1 ml 生盐配成1%红细胞悬液（可不洗涤）。 2血型卡上写好姓名

2、，8孔中加入患者1%的红细胞悬液50 ul。 3不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。 4观察血型、直抗试验结果。 注： IgG ：兔多克隆抗- IgG AHG：多克隆抗人球蛋白,.,5,二新生儿及其父母血型卡、 直抗试验2：,姓名,离心,观察血型、 直抗试验结果,患者1%的红悬50 ul,.,6,三放散试验1：,1取新生儿压积红细胞200 ul洗涤三次。 2加200 ul生盐混匀在56水浴箱10分钟（中间轻轻振荡几次），2500转/分离心3分钟。 3Coombs卡上做好标记，取上述上清液50 ul加到Coombs卡孔上。,.,7,三放散试验2：,4加入相应1%标准A，B，O 型红细

3、胞悬液50 ul。 原则： 新生儿血型为A 型，加标准A，O 型红悬2孔； 新生儿血型为B 型，加标准B，O 型红悬2孔； 新生儿血型为AB型，加标准A，B，O 型红悬3孔； 新生儿血型为O 型，加标准O 型红悬1孔； 5. 37下孵育15分钟，离心。 6. 观察放散试验结果。,.,8,三放散试验：,上清 50ul,.,9,四游离试验：,1Coombs卡上做好标记，加入50 ul新生儿血浆。 2加入相应1%标准A，B，O 型红细胞悬液50 ul。 原则： 新生儿血型为A 型，加标准A，O 型红悬2孔； 新生儿血型为B 型，加标准B，O 型红悬2孔； 新生儿血型为AB型，加标准A,B,O型红悬3

4、孔； 新生儿血型为O 型，加标准O 型红悬1孔； 4. 37下孵育15分钟，离心。 5. 观察放散试验结果。,.,10,五直接抗人球蛋白试验(Cooms)：,在Coombs卡AHG下做好标记。 加入1%被检红悬50 ul。 3. 不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。 4. 观察血型、直抗试验结果。 注： AHG：多克隆抗人球蛋白,.,11,六IgG抗体效价检测：,1.Coombs卡上做好标记。 2.取200ul 孕妇血浆与200ul巯基乙醇应用液等量混匀，37水浴1小时，破坏IgM抗A/B抗体。 3.2500转/分离心3分钟，取上清100ul，用生理盐水等比稀释至1：512。 4.在Coombs卡4孔上加入稀释好的第5-8孔50 ul，再加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50 ul。 5.37下孵育15分钟，离心。 6.观察放散试验结果。,.,12,七IgG抗体效价检测：,1.Coombs卡上做好标记。 2.主侧：患者血浆50ul 供者红悬50ul。 3.次侧：供者红悬50ul 患者血浆50ul。 4.37下孵育15分钟，离心。 5.观察放散试验结果。,.,13,八抗体筛查：,1.Coombs卡上做好标记。 2.患者血浆50ul 1%不完全抗体筛选细胞各50ul。 3.37下孵育15分钟，离心。 4.观察放散试验结果。,.,14,