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文档简介

1、植物细胞工程实验 以烟草叶片的离体再生系统建立为例 黄胜琴,一、实验目的,了解植物离体培养（组织培养）的技术方法。,二、原理,细胞全能性: 每个植物细胞都具有该植物的全部遗传信息，在合适的培养条件下都有发育成完整植株的潜在能力。 植物组织培养: 在无菌条件下将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体培养在人工配制的培养基上，人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术，也叫离体培养。,三、材料与实验用品,1、材料：烟草叶片 2、用品：灭菌锅、电炉、试剂瓶、容量瓶、烧杯、玻棒、移液管、量筒、精密天平、酒精灯、镊子、解剖刀、果酱瓶、牛皮纸 . 3、试剂：培养基、蔗

2、糖、琼脂、NaClO、 70%酒精、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、NAA、6BA 、.,四、方法步骤,1配制培养基:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖+琼脂0.7 NAA母液:先用95%乙醇溶解后，再用热水定容。 6-BA母液:先用1 mol/L NaOH 溶解后，再加水定容。 2.准备好接种工具、吸水纸、牛皮纸（报纸包好）、滤菌器、空果酱瓶、无菌水（每组各1） 3.灭菌：121，15-20min 4.趁热（65）在超净工作台上加入已滤菌的0.1NaClO（无菌状态）于培养基中。,5.接种:,选取外植体,自来水冲洗,75%酒精浸泡30s,aClO 浸泡6min,无菌水冲洗4-5次,无菌吸水纸吸干,分割成边长为0.81cm的正方形,火焰上方接种,盖紧瓶盖,培养,贴标签,整理桌面,接种注意事项,1.接种前75%酒精或0.1%新洁尔灭擦手 2.接种时尽量不要说话(防交叉污染) 3.不要在课室来回走动 4.接种工具要勤在火焰上烧； 5.接种工具在消毒冷却后才能使用； 6.接种工具不能直接放在超净工作台上，应倒立放在工具架上； 7.接种工具若不小心碰到带菌的物

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