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文档简介

1、基因工程制取第一代干扰素,制药一班第一小组,将目的基因克隆到大肠杆菌中的重要操作步骤:,目的基因的分离,克隆载体,目的基因与克隆载体的体外重组,重组体导入大肠杆菌K12,受体菌的培养及筛选,从受体菌中获取目的基因,表达载体,重组质粒,导入大肠杆菌,受体菌的筛选,表达性、稳定性等检测,工程菌,一、目的基因的分离,2.mRNA 的分离 (注意事项) 将生产干扰素的人白细胞的mRNA分级分离然后进行凝胶电泳切取相对分子质量为256bp的部分,1、总 RNA 的提取 RNA 提取方法:Trizol法,1.目的基因的获取为什么用mRNA而不是DNA?,mRNA的分离:,3、mRNA反转录成cDNA,cD

2、NA第一链的合成(Reverse Transcription)。 选用GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒使用Oligo(dT)引物(因为Oligo(dT)与mRNA的Poly(A)尾巴可以发生特异性结合,所以用Oligo(dT)特异结合到mRNA上Poly(A)尾端,以此可以特异地将mRNA从总RNA中分离出来。属于亲和层析技术。) (1)在0.5ml微量离心管中,加入总RNA 1-5g,补充适量的DEPC H2O使总体积达11l。在管中加10M Oligo(

3、dT)12-18 1l,轻轻混匀、离心。 (2)70加热10min,立即将微量离心管插入冰浴中至少1min。 然后加入下列试剂的混合物: 10PCR buffer 2l 25mm MgCl2 2l 10mM dNTPmix 1l 0.1M DTT 2l 轻轻混匀,离心。42温育2-5min。 (3)加入Superscript1l ,在42水浴中温育50min。 (4)于70加热15min以终止反应。 (5)将管插入冰中,加入RNase H 1l ,37温育20min,降解残留的RNA。-20保存备用。,4、PCR扩增目的基因,PCR扩增的操作条件,双链cDNA在94预变性5min,94变性30

4、s,迅速冷却到50,引物退火并结合到靶序列上复性2min,然后快速升温至7075,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸,5、从PCR中分离目的基因,PCR扩增产物电泳 将PCR扩增产物适当浓缩(开盖)后,全部上样与2.5%的琼脂糖(TEA)缓冲液,电压60V,电泳时间2h。通过凝胶成像系统观察分析谱带的形状,切取512pb处的目标片段,双蒸水洗涤三次,离心得目的基因。 测序:Sanger双脱氧链终止法,1972年,斯坦福大学的P. Labban和P. Kaiser提出。,同聚物加尾 法,6、人工加尾形成 “粘性末端”,DNA末端转移酶能在没有模板的情况下给DNA的3-OH端加上

5、脱氧核苷酸。,原理:,分别给载体和插入片断加上互补的核苷酸。,加尾碱基互补,二、目的基因与克隆载体进行体外重组,(2)具有两种抗菌素抗性基因(四环素、氨苄青霉素抗性基因)可供作转化子的选择记号,能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子,便于分子克隆的筛选。,(3)含有高效的自主复制成分,质粒的复制和宿主的繁殖不相关,在抑制细菌蛋白质合 成时,细菌染色体DNA 停止复制,但质粒可以继续利用细菌原有的酶系统进行复制。,(4)限制性内切酶单一切口,在质粒复制子以外的部位具有一种或多种限制性内切酶的单一切口,便于外源基因的插入。,(1)具有较小的分子量,

6、避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂,pBR322质粒这种小分子量的特点,不仅易于自身DNA的纯化,而且可容纳较大的外源DNA片段,1、选择质粒pBR322作为载体的原因:,图为:质粒pBR322,2、基因与克隆载体的连接,将 cDNA 重组到载体上 合成的 cDNA 与载体 DNA 进行连接一般有 3 种方法:, 借助于末端转移酶的 3 -OH 端合成均聚物的能力,双链 cDNA 和线性化载体 DNA 的 3 -OH 端分别加上均聚核苷酸链;, 双链 cDNA 和线性化载体 DNA 分别用 Klenow 片段进行末端补平,然后用 T4 DNA 连接酶进行齐头连接,形成重组体;, 通过粘性末端

7、连接。,EcoR I,BamH I,EcoR I,BamH I,(1)对质粒进行双酶切,为验证双酶切是否成功,可做如下对照: A 酶切反应时加各单酶分别切,两管,用同一种BUFFER,跑胶,看单切的两管是否成线性.如两管均成线性可初步判断双酶切成功.,大肠杆菌k12 几百ng-几ug EcoR I 0.5ul BamH I 0.5ul buffer 在Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 酶切3个小时,(2)质粒与目的基因的连接,1、取2l(50 -400ng)载体和7倍摩尔量的插入片段混合好以后置于45度水浴5min马上置于冰上冷却

8、(插入片段和载体在之前的操作过程中有部分粘性末端已经匹配,如果直接连接可能会有多重插入和多载体自连的情况,45度处理是其粘性末端打开。由于片段与载体混合、预热后马上置于冰上,使得片段与载体最大限度匹配,从而提高连接效率。)。,2、加入2 l 10Ligation Buffer(连接缓冲液,内含ATP),用双蒸水调整总体积为20 ul,混匀。然后加入T4连接酶1ul,轻柔充分混匀(切勿剧烈震荡,可能导致酶部分失活)。16连接2小时,三重组体引入宿主细胞,将cDNA克隆到含有四环素、氨苄青霉素抗性基因(检验1.外源基因基因是否进入宿主细胞2.载体DNA分子中是否插入了外源DNA片段)的质粒pBR3

9、22中,转化到大肠杆菌,重组的载体 DNA 分子在一定条件下转化入大肠杆菌,形成携带质粒的菌株。当不同重组的 DNA 含有不同的 cDNA 基因时,整个转化子含有来自 mRNA 群体的各种 cDNA 基因,这样的转 化子群体构成该 mRNA 全部遗传信息的 cDNA 基因文库。,选择大肠杆菌作为宿主细胞的原因?,1、培养基的配制 (1).配制LB-AMP抗性培养基LB液体培养基:精解蛋白胨10g,酵母抽提物5g, 氯化钠l0g,加去离子水800ml充分搅拌溶解,用1mol/LNaOH调pH7.0,补加去离子水至1000毫升,高压灭菌,4度保存。 (2).LB固体培养基:LB液体培养基中加1.5

10、%琼脂粉,高压灭菌消毒; (3).Amp母液:用无菌水或生理盐水配制成100mg/ml即100 ug/ul溶液,置-20保存;AMP500mg/支,一支用5ml稀释即得。然后分5支分装(浓度100mg/ml即100 ug/ul)。 (4).含Amp的LB固体培养基:将配好的LB液体培养基高压灭菌后冷却至60左右,加入Amp储存液,使终浓度为100ug/ml摇匀后铺板(30ml/90mm):即多少毫升培养基加多少微升上述的Amp母液多少毫升培基=加多少微升母液,或减半量则最终浓度为50ug/ml。有指南上写细菌转化后37度复苏时用SOC培基。 (5).0.05mol/L CaCl2溶液:其实氯化

11、钙的摩尔浓度在0.05-0.1mol/L均可。溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。 (6).含15%甘油的0.05mol/L CaCl2: 先配制成0.1mol/L的氯化钙溶液50ml,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。,2、感受态细胞(大肠杆菌k12)的制备 ( CaCl2 法,亦可直接购买)-注意事项,(1)、将培养液分转入1.5ml的离心管中(一管10ml菌液可分装成约6管1.5ml的离心管中),冰上放置10分钟,然后于4下3000g离心10分钟。 (2)、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液200微升轻轻悬浮细胞,冰上放置30分钟后,4下30

12、00g离心10分钟。 (3)、弃去上清,加入200微升预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。,3、转化-注意事项: a、全量(20 l)加入至100 l 感受态细胞中,冰中放置30分钟。 b、42加热45秒钟后,再在冰中放置1分钟。 c、加入890 l AMP阴性培养基,37振荡培养60分钟。取100l铺板 (注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来 ,另,铺板前后注意用吹风机吹干 )。,四、从大肠杆菌k12获取目的基因,1、大肠杆菌K12培养 2、扩增杂交质粒 3、利用质粒PBR322特性通过四环素和氨苄青霉素

13、筛选阳性菌 4、提取重组质粒 5、利用DNA探针获取目的基因 6、 目的基因与表达载体PBV220结合构成重组质粒 7、重组质粒导入大肠杆菌 8、工程菌的筛选,质粒稳定性检测,大肠杆菌K12的培养,培养基:LB液体培养基酵母膏5g, 蛋白胨10g, NaCl10g, 加蒸馏水至1000mL, pH7.0, 经121灭菌20min备用, 生理盐水: 0. 9gNaCl溶于100mL蒸馏水, 经121灭菌20min备用。 接种培养:用接种环刮取少量细菌于1mL生理盐水中, 震荡均匀, 吸0. 1mL于100mLLB液体培养基中, 在37, 180r.min-1摇床振荡培养。,阳性细菌筛选,原因:由

14、于质粒重组时有3种基本方式,即:目的基因与克隆载体重组,目的基因片段与目的基因片段重组,克隆载体与克隆载体重组;另外重组过程可能会发生基因突变情况 流程:步骤一:将细菌涂布到含氨苄青霉素的培养基上培养,就可得到质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落。 步骤二:步骤一获得的每一个细菌单菌落标记为a、b、c、d等,在每一个单菌落中挑取部分细菌转涂到含有四环素的培养基上,不能生长的是绝大部分含有重组质粒的细菌及少量可能发生突变的非重组质粒的细菌单菌落。原因:因为PBR322含有抗四环素基因,重组质粒中目的基因插在抗四环素基因中,使其结构破坏,失去抗四环素作用。,提取重组质粒,1、对上一步获得含目的基

15、因的大肠杆菌在含有氯霉素的培养基中扩大培养15h。培养时间:前人实验证实大肠杆菌K12生长前6h为迟缓期, 615. 5h为对数增时期, 15. 5 19. 5h为稳定期, 19. 5h后为衰亡期。氯霉素:氯霉素可抑制宿主的蛋白质合成,结果阻止了细菌染色体的复制,然而,松弛型质粒仍可继续复制。 2、细菌的收获和裂解 )用合适转头于4以4000转/分离心15分钟,弃上清,敞开离心管口并倒置离心管使上清全部流尽。 )将细菌沉淀重悬于100ml用冰预冷的STE中。 STE 0.1mol/L NaCl 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 按步骤)所述

16、方法离心,以收集细菌细胞。,3、碱裂解法 )将冼过的500ml 培养物的细菌沉淀物 来自收获细菌的步骤3 重悬于10ml(18ml)溶液中。 溶液: 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(pH8.0) 溶液可成批配制,在10 lbf/in2(6.895x104Pa)高压下蒸气灭菌15分钟,贮存于。 )加1ml(2ml)新配制的溶菌酶溶液10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)。当溶液的pH值低于8.0时,溶菌酶不能有效工作。 )加20ml(40ml)新配制的溶液。 溶液: 0.2mol/L NaOH(临用前

17、用10mol/L贮存液现用现稀释) 1SDS 盖紧瓶盖,缓缓颠倒离心瓶数次,以充分混匀内容物。于室温放置5-10分钟。,)加15nl(20ml)用冰预冷的溶液。 溶液: 5mol/L乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml 所配成的溶液对钾是mol/L,对乙酸根是5mol/L。 封住瓶口,摇动离心瓶数次以混匀内容物,此时应不再出现分明的两个液相。置冰上放10分钟,应形成一白色絮状沉淀。于0放置后所形成的沉淀应包括染体DNA、 高分子量RNA和钾SDS蛋白质膜复合物。 )用合适转头于4以4000转/分离心15分钟,不开刹车而使转头自然停转。如果细菌碎片贴壁不紧,可以5000转/分

18、再度离心20分钟, 然后尽可能将上清全部转到另一瓶中,弃去残留在离心管内的粘稠状液体。未能形成致密沉淀块的原因通常是由于溶液与细菌裂解物混合不充分步骤)。 )上清过滤至一250ml离心瓶中,加0.6体积的异丙醇,充分混匀,于室温放置10分钟。 )用合适转头于室温以500转/分离心15分钟,回收核酸。如于4离心,盐也会了生沉淀。 )小心倒掉上清,敞开瓶口倒置离心瓶使残余上清液流尽,于室温用70乙醇洗涤沉积管壁。倒出乙醇,用与真空装置相联的巴期德吸出附于瓶壁的所有液滴,于室温将瓶倒置放在纸巾上,使最后残余的痕量乙醇挥殆尽。 )用3ml TE(pH8.0)溶解核酸沉淀。 10)纯化。,质粒DNA的纯

19、化,(一)聚乙二醇沉淀法提取质粒 )将核酸溶液所得转入15mlorex 管中, 再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液,充分混匀,用合适转头于下以10 000转/分离心10分钟。LiCl可沉淀高分子RNA。 )将上清转移到另一30mlCorex管内,加等量的异丙醇, 充分混匀, 用SorvallSS34转头(或与其相当的转尖)于室温以10 000转/分离心10分钏, 回收沉淀的核酸。 )小心去掉上清,敞开管口,将管倒置以使最后残留的液滴流尽。于室温用70乙醇洗涤沉淀及管壁,流尽乙醇,用与真空装置相连的巴其德吸管吸去附于管壁的所有液滴,敞开管口并将管侄置,在纸巾上放置几分钟,以使最后残

20、余的痕量乙醇蒸发殆尽。 )用500l含无DNA酶的胰RNA酶(20g/ml )的TE(pH8.0)溶解沉淀,将溶液转到一微量离心管中,于室温放置30分钟。 )加500l含13(w/v)聚乙二醇(PEG 8000)的1.6mol/L NaCl,充分混合,用微量离心机于以12000g离心分钟,以回收质粒。 )吸出上清,用400l TE(pH8.0)溶解质粒DNA沉淀。用酚、酚:氯仿、氯仿各抽次。 )将水相转到另一微量离心管中,加100l 10mol/L乙醇铵,充分混匀,加倍体积(约1ml)乙醇,于室温放置10分钟,于4以12 000g离心5分钟,以回收沉淀的质粒。 )吸去上清,加200l处于4以1

21、2 000g离心2分钟。 )吸去上清,敞开管口,将管置于实验桌上直到最后可见的痕量乙醇蒸发殆尽。 10)用500l TE(pH8.0)溶解沉淀1:100稀释用TE(pH8.0) 后测量OD 260,计算质粒DNA的浓度(1OD26050g质粒DNA/ml), 然后将DNA贮于20。,对重组质粒的检测与目的基因提取,目的基因获取 对获得的质粒进行双酶切,获得目的基因与PBR322质粒片段,通过琼脂糖凝胶电泳,由于目的基因与PBR322质粒片段相对分子量不同,在电泳过程中产生不同的条带,通过与已知基因长度的对比,我们可以选出相应的目的基因,接着利用Qiagen纯化柱回收纯化DNA。具体:用3倍体积

22、的特殊高盐溶液于55融化带有目的基因的DNA片段的琼脂糖凝胶块,将DNA释放到水溶液中。然后将其通过Qiagen纯化柱,经过如图结合洗涤洗脱步骤,直接得到纯化的DNA样品。 利用核酸探针杂交法鉴定目的基因,通过Qiagen纯化柱纯化DNA,目的基因与表达载体的组合与导入,表达载体:PBV220,,将PBV220和目的基因用双酶切法处理,退火后连接,构建重组质粒,利用CaCl2法导入到宿主大肠杆菌中,构建工程菌,在培养基中培养,利用干扰素性质鉴定目的工程菌,分离工程菌,扩大培养,提取出质粒,分析质粒稳定性。,五、工程菌构建流程,多次筛选阳性克隆菌,取出质粒纯化进行测序,选出正确序列的质粒培养,质

23、粒回收试剂盒回收,转化大肠杆菌在MD平板培养 平板中挑单菌落培养基中培养,挑取菌落进行培养,表达系统降解实验,SDSPAGE电泳后转膜 Westen鉴定,ELISA检测表达量,具体过程,根据载体分子所提供的表性特征,直接多次筛选阳性克隆菌。从阳性菌中提取质粒 。(方法同克隆菌筛选,质粒提取一样) 对质粒进行测序:将测序正确的阳性克隆质粒过夜培养用质粒回收试剂盒提取质粒。,电击转化大肠杆菌,使得重组子容易进入大肠杆菌。在MD平板中培养。 挑取MD 平板单菌落于5 mL BMGY 培养基中培养24 h,将菌体离心弃上清,重悬浮菌体至D600nm 为05,接种至BMMY 培养液摇瓶中,每隔12 h

24、加入05甲醇诱导表达并计时, 每隔24 h 取1 mL菌液于5000 r min 离心30 s,分别收集24、48、72、84 h 菌液上清, 用Western 印迹和ELISA 检测,HASIFN2b 的表达量。,Western 印迹鉴定目的蛋白表达量,原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息,ELISA 检测目的蛋白的表达量,取菌株各时间点上清100 L, 包被液为pH96 的Na2CO3NaHCO3缓冲液,4包被过夜, 同时设置空白对照。用PBST 洗板3 次, 每孔加入100L 1

25、 5000 稀释的鼠单克隆抗体IgG1,37孵育1 h,用PBST 洗板3 次;加入100 L 15000 稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG 抗体,37孵育1 h,用PBST 洗3 次,TMB 为显色底物,测定D450nm值。,表达系统中的降解,实验挑取MD 平板菌株单菌落至YPD 培养基中培养,待菌液D600nm值为12 时吸取2mL 菌液转移至盛有60 mL BMGY 培养基的摇瓶中,200 r min、30振荡培养48 h, 将菌液离心,弃上清, 用BSM 培养基悬浮菌体,起始D600nm值为30, 加入菌液1 10体积的重组体,使菌液重组子含量均为500 mg L,将含有菌体和重

26、组子 的试管置30摇床上, 每隔48 h 取100L 菌液上清,用SDSPAGE 检测重组子 的降解程度。,最后若菌体能进行稳定高效表达,MD板上的菌种作为工程菌,工程菌的构建基本完成。,模板mRNA的质量,直接影响到cDNA合成的效率。 由于mRNA分子的结构特点,容易受RNA酶(水解RNA)的攻击而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性,这是实验成败的关键。(RNA酶:含有链内二硫键,使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂。另外,变性后可迅速折叠,目前,尚无RNA酶失活的简易办法。该酶不需要二价阳离子激活,难以被金属离子鳌和剂(EDTA

27、)失活。只好避免污染。) 用强烈变性剂,如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏而从核酸上解离下来。 RNA酶可耐受多种处理(例如煮沸)而不失活,但却会被4 mo1/L硫氰酸胍和-疏基乙醇等还原剂所灭活。因此可联用上述试剂,从组织中提取完整无损的RNA。) 所有的组织中均存在RNA酶,人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染,因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换(使用一次性手套)。,Trizol法提取总RNA:1.适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。2.用Trizol法提取的总RNA,无蛋白和DNA污染。3.

28、RNA可直接用于Northern斑点分析,斑点杂交,Poly(A)+分离,体外翻译,RNase封阻分析和分子克隆。 材料:含人白细胞丰富的组织 设备:研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽 步骤: 1、将组织在液N中磨成粉末后,再以50-100 mg组织加入1mlTrizol液,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10% 。 2、研磨液室温放置5分钟,然后以每1mlTrizol液加入0.2 ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒。 3、12000g 离心10分钟,取上层水相于一新的离心管,按每mlTrizol液加0.5 ml异丙

29、醇的比例加入异丙醇,室温放置10分钟,12000g 离心10分钟。 4.弃去上清液,按每mlTrizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,涡旋混匀,4下7500g离心5分钟。 5.小心弃去上清液,然后室温或真空干燥5-10分钟,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中,必要时可55-60水溶10分钟。RNA可进行mRNA分离,或贮存于70%乙醇并保存于-70。 注意: 1、整个操作要带口罩及一次性手套,并尽可能在低温下操作。 2、加氯仿前的匀浆液可在-70保存一个月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4保存一周,-20保存一年。,1.目的基因的获取为什么用mRNA而不

30、是DNA?,基因组,即某种生物一个细胞内全部的DNA信息。 将这些DNA打断,连接到载体上并转入微生物,使这些微生物细胞内含有某生物的全部基因组。那么这些微生物就组成了基因组文库。 以上两者包含的都是遗传信息。对于某种生物来说,任何一个细胞的遗传信息都是相同的。 cDNA是由细胞内的mRNA通过逆转录的方式获得的,其包含的一个细胞内的表达信息。多细胞生物的不同细胞的表达信息往往是不同的。若将某一个细胞全部的mRNA(又称为这个细胞的转录组)都逆转录成cDNA,再将这些cDNA连接到载体上(基本上不打断)并转入微生物,那么这些微生物就组成了cDNA文库。 简单来说,基因组是分子,基因组文库是表示

31、遗传信息的微生物,cDNA文库是表示表达信息的微生物。,分级分离:(fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀,再用较高的转速,将浮在上清液中的颗粒沉淀下来,从而使各种细胞结构,如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中,所以每级离心得到的第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒,须经反复悬浮和离心加以纯化,分级分离得到的组分,可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。,cDNA:与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链c

32、DNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。,选择大肠杆菌作为宿主细胞的原因:,第一,大肠杆菌是一种常见菌种.人们对其细胞形态及生理生化特性已经了解比较深入,对于培养基配制与运载体导入的具体技术等方面也就更容易把握. 第二,细菌质粒(游离于细菌等微生物细胞质中的小型环状DNA分子)是基因工程常用的运载体(与目的基因结合的工具),而大肠杆菌质粒又是最常用的质粒,因为大肠杆菌质粒上有诸如抗青霉素基因等易于检测的标记基因,并且容易使目的基因在宿主细胞中复制和表达.而最适合大肠杆菌质粒完成使命的场所当然就是它的天然来源大肠杆菌. 第三,大肠杆菌是一种典型兼性厌氧行细菌,由于体积小,表面积与体积的比例很大,并且能利用氧气进行彻底生物氧化释放大量能量,因而能够与外界迅速进行物质和能量交换,并在体内迅速转化.这样一来使大肠杆菌新陈代谢极其迅速,就如同一个效率极高的化工厂,而与真正化工厂相比所需反应条件又很温和,容易达到,其经济效益是显而易见的. 综合以上考虑大肠杆菌常选为宿主菌用于基因工程也就不足为

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