分析化学精品课程课件色谱法.ppt

1、2020年6月26日4时32分,第九章 色谱法,9.1 概述 9.2 气相色谱分析理论基础 9.3 气相色谱分离操作条件 的选择 9.4 气相色谱检测器 9.5 气相色谱定性/定量分析 9.6 高效液相色谱法简介 9.7 离子色谱法简介,GC/HPLC/IC,本章基本要求,1.熟悉GC/HPLC/IC的基本组成、结构流程及各部件作用； 2.熟悉分配系数、容量因子的定义及相互关系； 3.掌握塔板理论、速率理论及分离度； 4.掌握气相色谱检测器结构、原理及特点； 5.掌握定量分析方法，了解定性分析方法; 6.了解操作条件的选择原则以及操作条件对分离的影响.,农药有多少种？如何判断是何种农药中毒？,

2、新装修后的家安全否？,VOCs 混标的气相色谱图,气相色谱仪,重要的现代分析工具,气相色谱仪,GC气路系统,高压液相色谱仪,离子色谱仪,9.1 概述,9.1.1 色谱法简介 1.概述 色谱法是一种分离技术; 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在 色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体 （气体或液体），称为流动相。,2.色谱法分类 根据流动相和固定相物理状态分:,(2) 根据分离过程中固定相的形状分: A、柱色谱法:填充柱色谱、毛细管色谱 B、平面色谱:纸色谱、薄层色谱 (3) 根据分离过程的原理分： 吸附色谱、

3、分配色谱、离子色谱、凝胶色谱。,填充柱和毛细管柱分离硝基苯效果比较图,9.1.2 气相色谱法的特点,1. 分离效率高 复杂混合物、有机同系物、异构体及手性异构体。 2. 灵敏度高 可以检测出10-1110-13g的物质。 3. 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。 4. 应用范围广 适用于沸点低于450的各种有机或无机试样的分析。 不足之处： 不适用于高沸点、难挥发、热不稳定物质的分析。,9.1.3 气相色谱分析流程,气相色谱流程：,1. 载气系统：包括气源、气体净化、气体流速的控制和测量； 2. 进样系统：包括进样器、气化室； 3. 色谱柱：柱体、固定相； 4. 检测

4、系统：检测器 5.记录系统：放大器、记录仪、数据处理装置。,9.1.4 分配系数（partition coefficient）,组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度(g / mL)比, 称为分配系数，用K 表示，即:,分配系数 K 的讨论,(1) 一定温度下， K值最小的组分最先流出色谱柱，而 K值越大的组分，出峰越慢； (2) 试样一定时，K 主要取决于固定相性质；即 每个组份在各种固定相上的分配系数 K 不同； (3) 选择适宜的固定相可改善分离效果； (4) 试样中的各组分具有不同的 K 值是分离的基础；

5、(5) 某组分的 K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。,容量因子（capacity factor） k,亦称分配比(partition ratio)或容量比(capacity ratio)。 定义：k 是指在一定温度、压力下组分在两相间达到分配平衡时，它在两相间的质量比。,分配比更能表征分配达到平衡时的分离情况。,K与 k 的关系：,VM：色谱柱中流动相的体积(空隙体积) Vs：色谱柱中固定相的体积。 (1) 在气液色谱中Vs为固定液体积；在气固色谱中为吸附剂表面容量。 (2) : 相比(phase ratio)。 填充柱的值为635，毛细管柱的为501500。,9.2 气相色谱分析理论

6、基础,9.2.1 气相色谱流出曲线及有关术语,色谱流出曲线，如何表征？,1.基线（base line）,峰底、峰高、峰面 2.保留值（retention value）,时间表示的保留值 保留时间(retention time, tR)： 组分从进样到柱后出现浓度最大值时所需的时间。 死时间(dead time, tM)： 不与固定相作用的气体（如空气）从进样到柱后出现浓度最大值时所需的时间。 调整保留时间(adjusted retention time, tR)： tR= tRtM,(2) 用体积表示的保留值,保留体积（retention volume, VR）：VR = tRF0 （ F0为

7、色谱柱出口处的载气流速，m L / min。） 死体积（dead volume, VM）： VM = tM F0 调整保留体积（adjusted retention volume, VR）： V R = VR VM （3） 相对保留值(relative retention value， r21 ) 组分2与组分1调整保留值之比： r21 = tR2 / tR1= VR2 / V R1 相对保留值只与柱温、固定相的性质有关。,3. 区域宽度（色谱峰宽度）,用来衡量色谱峰宽度的参数 有三种表示方法： (1) 标准偏差(standard deviation,) 即0.607h处色谱峰宽的一半。 (2

8、) 半峰宽(peak width at half height,Y1/2) h/2处的宽度 Y1/2 =2.354 (3) 峰基宽度(peak width at peak base,Wb) Wb = 4 ,9.2.2 色谱柱效能,色谱是一种高效分离技术，所依据的理论基础是什么？ 如何评价分离效能？,1. 塔板理论柱分离效能指标,（1）基本假设 在每一小段色谱柱内,组分在两相很快达到平衡,这一小段色谱柱称为一个理论塔板,而相应占有的色谱柱柱长称为理论塔板高H. 整个色谱柱是由一系列按顺序排列的塔板所组成,在柱内各处,塔板高度H为常数,色谱柱柱长为L,则塔板数n=L/H,（2）柱效能:常用理论塔板

9、数、理论塔板 高度、有效塔板数表示,式中tR、Y1/2、Wb以同一单位（cm 或 s）表示。,理论塔板数与色谱参数之间的关系为：,有效塔板数和有效塔板高度:,组分在 tM 时间内不参与柱内分配。 有效塔板数和有效塔板高度：,塔板理论的特点和不足：,(1) 当色谱柱长度一定时，塔板数 n (塔板高度 H )，被测组分在柱内被分配的次数越多，柱效能则越高, 色谱峰越窄。,(2) 不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时,应指明测定所用物质。,(3) 柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组分的分配系数K相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。

10、,(4) 该理论无法解释同一色谱柱在不同的载气流速下柱效不同的实验结果，也无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径。,2. 速率理论影响柱效能的因素,速率方程也称范弟姆特方程式: H = A + B/u + C u H : 理论塔板高度 u : 载气的线速度(cm/s) 减小 A、B、C 三项可提高柱效；三个常数的物理意义 存在着最佳流速； A、B、C三项各与哪些因素有关？,(1) A涡流扩散项,A = 2dp dp：固定相的平均颗粒直径 ：固定相的填充不均匀因子,（动画）,固定相颗粒越小dp，填充的越均匀，A，H，柱效 n。表现在涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻，色谱峰较窄。,(2) B/u

11、 分子扩散项,B = 2 Dg ：弯曲因子, 填充柱色谱,1 Dg：气相中的扩散系数（cm2s-1）,(1) 存在着浓度差，产生纵向扩散; (2) 扩散导致色谱峰变宽，H(n)，分离变差; (3) 该项与流速有关，流速，滞留时间，扩散; (4) 扩散系数：Dg (M载气)-1/2 ； M载气，B值。,(3) C u 传质阻力项,传质阻力包括气相传质阻力Cg和液相传质阻力CL即： C =（Cg + CL）,k为容量因子； Dg 、DL为扩散系数。 减小担体粒度，选择小分子量的气体作载气，可降低传质阻力。,速率理论的要点:,(1)色谱峰扩展、柱效下降的主要原因: 组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩

12、散、浓度梯度、两相分配平衡不能瞬间达到。,(2) 通过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及载气流速可提高柱效。,(3) 速率理论为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响。,(4) 各种因素相互制约，如载气流速增大，分子扩散项的影响减小，但同时传质阻力项的影响增大；柱温升高，有利于传质，但加剧了分子扩散的影响。,3. 分离度（resolution）,色谱分离中的四种情况如图所示：,色谱分离中的四种情况的讨论：, 柱效较高，K(分配系数)较大, 峰较窄，完全分离； K 不很大，柱效较高，峰较窄，基本上完全分离； 柱效较低，K 较大，但峰较宽，分离的不好； K

13、 不很大，且峰又太宽，以致柱效低，分离效果更差。,分离度的表达式：,R = 0.8：两峰的分离程度可达89%； R = 1.0：分离程度98%； R = 1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）。,令Wb(2)=Wb(1)=Wb（相邻两峰的峰底宽近似相等）， 引入相对保留值和塔板数，可导出下式：,例题：,在一定条件下，两个组分的调整保留时间分别为 85 s 和100 s。试计算若达到完全分离需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板高度为0.1 cm，柱长是多少？ 解： r21= 100 / 85 = 1.18 n有效 = 16R2 r21 / (r21 1) 2 = 161.52 (1.18

14、/ 0.18 ) 2 = 1547（块） L有效 = n有效H有效 = 15470.1 = 155 cm 即柱长为1.55米时，两组分可以达到完全分离。,在一定条件下，两个组分的保留时间分别为12.2s和12.8s，塔板数为3600，柱长为1米，计算分离度。要完全分离，所需要的柱长。 解：,分离度：,9.3 气相色谱分离操作条件的选择,9.3.1 载气种类及流速的选择,1. 载气种类的选择 (1)载气流速较小时,分子扩散起主要作用,载气摩尔质量，纵向扩散，柱效。 (2)载气流速较大时，传质阻力项起主要作用，采用较小摩尔质量的载气(如H2),可减小传质阻力,柱效 (3)热导检测器需使用热导系数较

15、大的氢气有利于提高检测灵敏度。在氢焰检测器中，氮气仍是首选载气。,2. 载气流速的选择,由图可见存在最佳流速（uopt）。 实际流速通常稍大于最佳流速，以缩短分析时间。,9.3.2 柱温的选择,控制在固定液的最高和最低使用温度范围之内。,柱温升高，分离度下降，色谱峰变窄变高。柱温，被测组分的挥发度，即被测组分在气相中的浓度，K，tR，低沸点组份峰易产生重叠。,柱温，分离度，分析时间。对于难分离物质对，降低柱温虽可在一定程度内使分离改善，但不可能使之完全分离，这是由于两组分的相对保留值增大的同时，两组分的峰宽也在增加，当后者的增加速度大于前者时，两峰的交叠更为严重。,柱温一般选择在接近或略低于组

16、分平均沸点时的温度。 对于组分复杂，沸程宽的试样，应采用程序升温。,醇系物GC分析 (a)175 C等温 (b)程序升温,9.3.3 柱长和柱内径的选择,增加柱长对提高分离度有利(RL2），但组分的保留时间tR ，且柱阻力，不便操作。 柱长的选用原则是在能满足分离目的的前提下，尽可能选用较短的柱，有利于缩短分析时间。 填充色谱柱的柱长通常为13m。 可根据要求的分离度通过计算确定合适的柱长或实验确定。 柱内径一般为34mm。,9.3.4 进样量和进样器,液体试样采用色谱微量进样器进样，规格有1L，5L，10L等。 进样量应控制在柱容量允许范围及检测器线性检测范围之内。进样要求动作快、时间短。

17、气体试样应采用气体进样阀进样。,9.3.5 气化温度的选择,色谱仪进样口下端有一气化器, 液 体试样进样后， 在此瞬间气化； 气化温度一般较柱温高3070C； 防止气化温度太高造成试样分解。,9.4 气相色谱检测器,9.4.1 检测器一般特性 浓度型检测器： 测量的是载气中通过检测器组分浓度瞬间的变化，检测信号值与组分的浓度成正比。热导检测器； 质量型检测器： 测量的是载气中某组分进入检测器质量流速的变化，即检测信号值与单位时间内进入检测器组分的质量成正比。FID；,广谱型检测器： 对所有物质有响应，热导检测器； 专属型检测器： 对特定物质有高灵敏响应，电子俘获检测器；,响应值（或灵敏度）S

18、：,在一定范围内，信号E与进入检测器的物质量m呈线性关系： E = S m S = E / m S的单位： mV/（mg / cm3） ；（浓度型检测器） mV /（mg / s） ；（质量型检测器） 响应值也可以由色谱峰面积(A)除以试样量求得： S = A / m,9.4.2 热导池检测器,（Thermal Conductivity Detector, TCD）,1. 热导检测器的结构 池体: 热敏元件：钨丝,参考臂：仅允许纯载气通过，连接在进样装置之前。 测量臂：需要携带被分离组分的载气流过，则连接在紧靠近分离柱出口处。,2.检测原理,平衡电桥，图。 不同的气体有不同的热导系数。,钨丝通

19、电，加热与散热达到平衡后，两臂电阻值： R参=R测 ; R1=R2 则： R参R2=R测R1 无电压信号输出； 记录仪走直线(基线)。,进样后:,载气携带试样组分流过测量臂而这时参考臂流过的仍是纯载气，使测量臂的温度改变，引起电阻的变化，测量臂和参考臂的电阻值不等，产生电阻差， R参R测 则： R参R2R测R1,电桥失去平衡，有电压信号输出。 ERtc,3. 影响热导检测器灵敏度的因素, 桥路电流 I ： I ，钨丝的温度 ，钨丝与池体间的温差，有利于热传导，检测器灵敏度提高,检测器的响应值 S I 3。但桥路电流过高，基线不稳。 池体温度：池体温度与钨丝温度相差越大，越有利于热传导，检测器的

20、灵敏度也就越高，但池体温度不能低于分离柱温度，以防止试样组分在检测器中冷凝。 载气种类：载气与试样的热导系数相差越大，在检测器两臂中产生的温差和电阻差也就越大，检测灵敏度越高。,表1 各种气体的热导系数（单位：J/cm C s ）,9.4.3 氢火焰离子化检测器,（Flame Ionigation Detector, FID）,1. 特点 (1) 典型的质量型检测器; (2) 对有机化合物具有很高的灵敏度; (3) 无机气体、水、四氯化碳等灵敏度低或不响应; (4) 氢焰检测器具有结构简单、稳定性好、灵敏度高、响应迅速等特点; (5) 比TCD的灵敏度高3个数量级，检测限可达10-12gg-1

21、,2.氢焰检测器的结构,在发射极和收集极间加有一定的直流电压(100300V)构成一个外加电场。 (2) 氢焰检测器需要用到三种气体：,N2 ：载气携带试样组分； H2 ：燃气； 空气：助燃气。,3. 氢焰检测器的原理,A区：预热区 B层：点燃火焰 C层：热裂解区： 温度最高 D层：反应区,(1)当含有机物 CnHm的载气由喷嘴喷出进入火焰时，在C层发生裂解反应产生自由基 ： CnHm CH (2)产生的自由基在D层火焰中与外面扩散进来的激发态原子氧或分子氧发生如下反应： CH + O CHO+ + e (3)生成的正离子CHO+ 与火焰中大量水分子碰撞而发生分子离子反应： CHO+ + H2

22、O H3O+ + CO,4. 操作条件的选择,(1) 载气流速的选择：N2作载气, 主要考虑分离效能。找到一个最佳的载气流速。 (2)氢气流速：H2流速过低，组分分子离子化数目少，检测器灵敏度低。H2流速过大，基线不稳。 一般N2 : H2（流速）的最佳比在1:11:1.5之间。 (3)空气流速：一般氢气和空气流速的比例是1 : 10。 (4) 极化电压：极化电压一股为100300 V。,9.4.4 其他检测器,1.电子俘获检测器 (Electron Capture Detector, ECD),2.火焰光度检测器 (flame photometric detector,FPD) 化合物中硫、

23、磷在富氢火焰中被还原，激发后，辐射出394、528 nm 左右的光谱，可被检测； 该检测器是对含硫、磷化合物的高选择性检测器；,检测下限10-14 g /mL。,高选择性检测器， 仅对含有卤素、磷、硫、氧等元素的化合物有很高的灵敏度,9.5 气相色谱定性/定量分析,1. 利用纯物质对照的定性鉴定 (1) 利用保留值的定性鉴定法 当固定相和操作条件严格固定不变时，每种物质都有确定的调整保留值（tR或VR），该保留值一般不受共存组分的影响，可用作定性鉴定的指标。 (2) 利用加入纯物质以增加峰高的定性鉴定法 将纯物质加到试样中，如果某组分的峰高增加，则表示该组分可能与加入的纯物质相同。,两种不同组

24、分在同一根色谱柱上可能具有相同的保留值。,定性分析,2.利用相对保留值定性 3.应用经验规律定性 4.利用保留指数定性,5. 与质谱、红外光谱联用的定性鉴定,定量分析,一、峰面积的测量 峰高(h)乘半峰宽(Y 1/2)法： A = 1.065 h Y1/2 2. 峰高乘平均峰宽法：当峰形不对称时采用 A = h (Y 0.15 + Y 0.85 ) / 2 3. 峰高乘保留时间法：窄峰、重叠峰(未完全重叠) A = h b tR 4. 自动积分和微机处理法,二、定量校正因子,试样中各组分质量与其色谱峰面积成正比，即： m i = fi Ai 绝对校正因子：比例系数 f i ，单位面积对应的物质

25、量： f i = m i / Ai 定量校正因子与检测器响应值(灵敏度)成倒数关系： f i = 1 / Si 相对校正因子 f i ：即组分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正因子之比。 f M 或 f W,三、几种常用定量方法,1. 归一化法,(1) 简便、准确； (2) 进样量的准确性和操作条件的变动对结果影响不大； (3) 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况； (4) 各组分f 值很接近（如同系物）时, 式中f 可约去； (5) 峰宽接近时，可用峰高代替峰面积。,2. 外标法,也称为标准曲线法,外标法不使用校正因子，准确性较高; 操作条件变化对结果准确性影响较大; 对进样量的准确性和重复

26、性要求较高; 适用于大批量试样的快速分析。,3. 内标法,试样中组分不能全部出峰或各组分含量悬殊，或者仅需要测定试样中某组分时，可采用此法。,试样配制：准确称取一定量的试样W，加入一定量内标物mS 内标物的要求： (1) 试样中不含有该物质； (2) 与被测组分性质比较接近； (3) 不与试样发生化学反应； (4) 出峰位置应位于被测组分附近, 且无组分峰影响。 加入量接近待测组分的量。,(1) 准确性较高，操作条件和进样量的稍许变动对定量结果的影响不大。 (2) 不适合大批量试样的快速分析。 (3)若将内标法中的试样取样量和内标物加入量固定，则：,高效液相色谱法（high performan

27、ce liquid chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法基础上发展起来的一种新型分离、分析技术。经典液相色谱法由于使用粗颗粒的固定相，填充不均匀，依靠重力使流动相流动，因此分析速度慢，分离效率低。新型高效的固定相、高压输液泵、梯度洗脱技术以及各种高灵敏度的检测器相继发明，高效液相色谱法迅速发展起来。,9.6 高效液相色谱法,HLPC与经典液相色谱和气相的比较,高效液相色谱与经典液相色谱比较,高效液相色谱与气相色谱比较,高效液相色谱法的分类,详细分类图,一、高效液相色谱仪,HPLC仪器结构,1、高压输液系统,包括贮液装置、高压输液泵、过滤器、脱气装置等。 贮液器：存放溶剂。

28、溶剂必须很纯。贮液器应配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。 脱气装置：防止流动相从高压柱内流出时，释放出气泡进入检测器而使噪声剧增，甚至不能正常检测。 高压输液泵：性能好坏直接影响分析结果的可靠性。 要求：流量稳定；输出压力高，最高输出压力为50Mpa；流量范围宽，可在0.0110mlmin范围任选。耐酸、碱、缓冲液腐蚀。压力波动小。,2、分离和进样系统,进样器：进样阀（六通阀）、自动进样装置 梯度洗提：类似于程序升温。 色谱柱：直型不锈钢柱，柱长一般为1030 cm，内径4 5mm，固定相颗粒直径为 3 5 m。为了保护分析柱不受污染，一般在分析柱前加一短柱，约数厘米长，称为保护柱

29、。,3、检测系统,（1）检测器(detector)的主要性能 要求： 灵敏度（sensitivity）高（检测限低） 噪音（noise）低 线性范围（linear range）宽 重复性（repeatability）好 适用范围广（通用型、专属型）,将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器 有紫外光度检测器、荧光检测器、示差折光检测器、电导检测器等。,（2）紫外光度检测器,检测原理： 朗伯比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=bc 特点： 灵敏度较高（10-610-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度洗提，不破坏样

30、品，应用广（分析、制备）。 局限： 只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。,（2）紫外光度检测器,固定波长检测器：254nm 可变波长检测器： 光源：氘灯（和钨灯），200400（800）nm，单色器，流通池（试样），光电管 光路系统和紫外分光光度计相似 光电二极管阵列检测器(photodiode array detector；PDAD)： 也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。 一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光,紫外光度检测器,（3）荧光检测器,荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。某些

31、不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。其最小检测浓度可达0.1ngml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性范围不如紫外检测器宽。 近年来，采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比，因而具有很高的灵敏度，在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。,（3）荧光检测器 (fluorescence detector；FD),检测原理： 化合物受紫外光激发后，发射出荧光； 荧光强度 (F) 与激发光强度 (I0) 及荧光物质浓度 (C) 之间的关系为： F=2.3QKI0Cl Q为量子产率，K为荧光效

32、率，为摩尔吸光系数，l为光径长度。 F=KC,二、高效液相色谱分析方法,定性分析方法 定量分析方法： 外标法、内标法 同GC（自己看）,影响HPLC色谱峰扩展及分离的因素主要是传质阻力。 (一) 减小柱内展宽，提高柱效 l. 固定相：粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力；改进结构，尽可能采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动相传质阻力。 2. 流动相：选用低粘度的流动相，有利于增大组分在溶剂中的扩散系数Dm，减少传质阻力。 3. 流速：从H-U曲线可知，HPLC的最佳流速在流速很小处，减少流速有利于提高柱效，但在实践中为加快分析速度，常采用比最佳流速高数倍的

33、流速。 4. 柱温：适当提高柱温，可降低流动相粘度，减少传质阻力，但柱温升高将使分辨率降低，柱寿命短，易产生气泡，一般在室温下进行。,三、HPLC法中分离条件的选择,(二) 柱外展宽,柱外谱带展宽又称“柱外效应”，系指从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起的色谱峰展宽，柱效下降。可分为： 1柱前展宽 ：主要由进样引起，减小进样器的死体积，用阀门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。 2柱后展宽：主要由接管、检测器流通池体积及检测器响应时间等因素所引起。因此，尽可能用短而内径细的接管，减少流通池体积，改进检测器和记录系统的响应速度等都是克服柱后展宽的途径。,总结：HPLC与GC差别,相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别,1分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测，占有机物的20%。 HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制，分子量大（200-