层析工艺验证1ppt课件

1、色谱过程验证，简要介绍色谱验证的前提条件、过程风险评估、原料过程特性研究和分析方法、微生物负荷和内毒素控制研发和特性研究文件、色谱柱过程验证一致性批次：生产规模验证、小规模验证、研究和验证文件、后验证活动、持续监控和维护、变更控制、目录、定义：色谱过程验证是为了证明色谱柱分离过程能够按照批准的方案和确定的操作参数一致地实施。以上是一种理想状态，不同项目的活动和顺序是可变的。简介、过程风险评估过程开发和特性研究的早期阶段：风险评估可以将资源集中在最有可能给产品质量带来风险的操作参数或杂质上。流程开发和特性研究的后期阶段：风险评估促进有序工作。扩大规模：审查所有运行参数和范围，评估和确认潜在风险，

2、并识别缺失数据。风险评估结果可能表明需要进行额外的特征研究。在完成过程开发和特性研究之后，以及在建立关键步骤的过程控制知识之后：识别和分类潜在的过程风险，并且如果必要，制定风险降低措施。色谱验证的先决条件，原材料建立原材料质量标准和供应商变更控制程序。在正式的过程验证之前，应确认原材料。色谱填料有一些独特的因素：它通常来自一个单一的来源，很少备用填料可以执行相同的功能，并且没有法律标准，这有一个非常高的影响过程的结果。动物来源的原料不应用于色谱分析。色谱验证的前提条件，过程特性的研究目的：建立过程知识，包括可接受范围、设计空间和失效边缘。在过程特性研究中，需要获得设定范围内的过程操作参数(输入

3、)如何影响过程性能(输出)，然后确定关键操作参数，定义目标设定点和可接受范围。小规模研究主要用于研究过程特征。通过用各种统计方法设计实验，可以用较少的实验获得更多的数据。色谱验证先决条件、过程特性研究在项目开发的早期阶段(如临床第一阶段之前)，只有色谱步骤可以在没有定义最佳操作范围的情况下开发。当产品即将获得许可时，优化生产的操作参数。特性研究的基础：设备和设施的能力、开发的技术、理论知识、过去的经验、供应商建议、文献和生产历史。色谱验证的先决条件，工艺特性的研究。特性研究应集中在影响色谱性能的参数上。例如，在离子交换操作中，应评估负载蛋白质的酸碱度和离子强度、洗涤和洗脱条件以及负载能力的影响

4、。其他操作参数的范围(例如，温度、色谱柱加载条件或清洗条件)对工艺性能的影响可能较小。还应该对它们进行测试，以建立一个稳定的过程。色谱验证的先决条件和过程特性研究的最终选定范围应涵盖设备的已知变化和偏差。参数之间的相互作用可能会对性能产生多种因素的影响，采用实验设计方法可以有效地对其进行测试。色谱验证先决条件，小规模模型如何证明小规模和生产规模之间的等价性？这通常通过在给定参数下运行几次并比较结果来实现。评估影响过程一致性的参数，如产量、洗脱曲线、洗脱体积和/或保留时间。评估代表产品质量的参数，如样品纯度、工艺相关和宿主细胞相关的杂质水平。色谱验证的前提条件，色谱验证的前提条件，例如：疏水色谱

5、，小规模和生产规模之间输入参数的比较，识别和分类这将导致产品效力、质量、宿主细胞杂质水平或过程相关杂质(细胞培养基成分)等的变化。样品的长期储存也会导致产品的变化。围绕设定点波动的动态过程控制也会带来变化。在极端条件下操作(由特性研究确定)，结果会有很大差异。色谱验证先决条件，在定义工艺设计空间时，应考虑以下几点：原料差异、工艺差异、工艺相关杂质、最坏情况工艺能力、色谱验证先决条件和原料差异：为了有效评估正常发酵/细胞培养差异的影响(效价、产品差异、宿主细胞杂质、工艺相关杂质、粘度)，应尽可能测试多批原料。色谱验证的前提条件、工艺差异：某些工艺条件和保存时间会影响产品质量。例如，蛋白A采用亲和

6、层析，低酸碱度洗脱可能导致样品聚合，或离子交换层析过程中高酸碱度可能导致样品大量脱氨基。在这两种情况下，必须证明下游工艺步骤可以在保质期内将这些变量减少到可接受的水平。色谱验证先决条件、过程相关杂质：过程相关杂质可能来自发酵(如核酸和抗生素)或下游过程(如蛋白A配体脱落、缓冲组分)。为了检测这些成分的去除，应该使用上面研究的材料。此外，还可以研究掺杂标准，特别是当分析方法不合适或不够灵敏时。色谱验证先决条件、最坏情况处理能力：指在正常操作范围内处理极端原料或在最大可接受范围内处理正常原料。色谱验证的先决条件，分析方法纯化的目的是除去工艺相关的杂质、产品相关的杂质和污染物。因此，色谱验证研究中使

7、用的分析方法应该能够可靠地检测和量化这些物质在不同缓冲系统中的预期范围。应适当控制这些方法，以确保结果可靠。在特定时期使用的分析方法，如验证研究，应通过证明它们适用于预期目的(如灵敏度、线性、精密度和准确度)来确认。还应验证用于日常检测的分析方法。色谱验证、微生物装载和内毒素控制色谱步骤的前提条件通常不在无菌条件下进行，因此必须适当控制微生物装载。选择包装、清洗溶液、保存条件和工艺设备时，必须考虑生物负载控制。一旦微生物(如孢子菌)繁殖，填充物将很难消毒。因此，在工艺设计中避免引入微生物污染非常重要。额外的控制并不少见。色谱验证先决条件、微生物载量和内毒素控制通常，色谱柱经过灭菌，使用后用抑菌

8、剂保存。产品和平衡溶液的制备和储存应尽量减少微生物的引入。色谱系统的设计应该有利于生物负荷控制，例如，必须避免不必要的仪器、阀门和死体积。在工艺开发过程中，需要确定有效的后消毒程序，在生产规模一致的批次时进行确认，并在日常过程中进行监控。色谱验证先决条件、R&D和特性研究文件经批准的研究文件是过程验证方案的基础。R&D和特色研究活动应根据公司政策进行记录、审查和批准。所有这些文件都必须可以追溯到原始数据。转让文件(例如，从开发商到商业运营商)可以参考这些信息，研究报告必须总结早期的研究成果并描述过程原理。这些研究可以作为研究过程特性的起点。过程特性的研究应根据公司政策，按照质量部批准的方案进行

9、。色谱验证先决条件，ve这些操作参数来自R&D实验、特性研究和早期临床生产经验。一致批量生产的指标和范围通常与商业批量生产的指标和范围相同。它们的主要目的是使过程符合生产环境中可接受的标准。对于一致的批量生产，应在验证方案中定义取样和分析。应在报告中记录、分析数据，并与可接受的标准进行比较。验证报告还应分析与验证方案或批量生产记录的偏差和差异。色谱柱过程验证，一致性批次通常需要进行以下研究：操作参数控制色谱柱性能控制杂质去除微生物负荷和内毒素控制色谱柱清洗和再生保存，色谱柱过程验证，操作参数控制一致性批次生产，操作参数应在设定点运行，并确认它们始终在各自规定的范围内。一般来说，操作范围较窄的设

10、备需要更详细的控制和监控程序。在过程的所有阶段，应评估柱色谱的参数：平衡、装载、洗涤、洗脱、再生、清洁和保存、色谱柱过程的验证以及操作参数的控制。建立色谱柱时，需要确定一些参数，如柱高、柱体积和各种填料的柱效率。其他参数，包括流速、保留时间、操作压力、通过色谱柱的溶液体积、酸碱度、电导率、温度和处理时间，通常在色谱操作过程中进行监控。例如，使用在线检测以分段方式采集样本，决定采集哪部分样本的标准通常是关键的操作参数。并非所有参数都与工艺直接相关，例如，最大操作压力通常受色谱柱限制。色谱柱过程验证、操作参数控制各种溶液，如过程缓冲液、病毒灭活溶液和色谱柱再生/消毒溶液，通常用于下游操作。溶液参数

11、(如酸碱度和电导率)在制备和储存过程中可能会发生变化，但在使用过程中应保持在可接受的范围内。必须根据批量生产记录制备溶液，并有适当的过程控制。色谱柱过程验证、操作参数控制、预先制备浓缩液和计量泵或比例控制阀稀释将使过程更加复杂并需要额外的监控。梯度洗脱过程通常在色谱柱前或混合器后有额外的传感器用于反馈控制，如紫外、酸碱度、电导率或近红外光谱水平。如果工艺要求偏离室温操作，有必要监控热交换器或中间储罐两端的温度。色谱柱过程验证，色谱柱性能监测一致性批量生产比日常生产需要更多的监测和取样。通过分析输出参数(如色谱图、操作记录、完整步骤的确认和收率)来监控色谱柱性能，以确保产品质量和杂质水平在可接受

12、的范围内。色谱柱过程验证，色谱柱性能监控色谱用于各种分离，每种分离都应取样分析，以证明这一步的目的已经达到。分析应证明产品和杂质按预期分离。这对于影响最终产品的安全性、效力和功效的某些杂质尤其重要。因此，有必要证明这些杂质能够被一致地去除。色谱柱过程验证、色谱柱性能监测通常认为，审查色谱图是定性的，有必要定量比较峰形。可以分析几个特征，例如保留时间(或体积)、峰面积(在检测器的线性范围内)和峰对称性。渗透加载法是一种准确、灵敏的柱效测量工具，用于监测色谱柱的性能和填料的完整性。此外，应记录色谱图中的任何异常变化在色谱柱的过程验证和微生物负荷及内毒素控制的验证过程中，应通过测试每一个色谱柱的样品

13、来验证微生物负荷和内毒素控制。验证过程中用于微生物负载和内毒素控制反应色谱的清洗液和保存液的有效性也反映了商用设备的清洗和消毒效果。应该为日常生产设定控制极限(或过程控制)。色谱柱过程验证、小规模验证研究小规模验证研究包括不能采用生产规模的研究(如病毒去除验证)或不想采用生产规模的研究(如包装寿命研究)。这些研究可以在生产规模研究之前、期间和之后进行。色谱柱过程验证、病毒去除研究病毒去除研究应证明色谱步骤去除和灭活病毒的能力。因为生产设备不适合引入病毒，所以病毒去除研究采用能够代表生产过程的小规模模型。对生产过程中病毒去除的研究，加上原料筛选和适当的产品测试，确保从产品传播到患者的病毒降到安全

14、水平。到目前为止，还没有来自细胞系的生物技术产品被用于病毒感染。色谱柱过程验证、病毒去除研究病毒去除验证从研发的早期阶段到临床第三阶段更加严格。所有选定的步骤都在适合病毒复制的培养皿中进行测试。应该仔细设计研究，如果可能的话，应该研究过程中最糟糕的情况。如果能够证明特定步骤能够充分去除病毒，则不需要在纯化过程的每个步骤中评估病毒去除。如果可能，有必要确定色谱峰中病毒的分布，这可以增加工艺知识。色谱柱工艺验证、填料寿命研究、填料寿命研究证明，填料在预期的使用寿命内总能保持可接受的性能。本研究对填料的寿命进行了小规模估算，为大规模生产提供了保证。此外，生产规模应通过验证方案长期确认。另一种确认方法

15、是将色谱柱性能小规模研究的可接受标准纳入日常过程监控程序。色谱柱过程验证、包装寿命研究、生产规模寿命研究通常采用统计过程控制和性能属性监控趋势来验证已验证的操作参数，如最大使用次数和/或最大使用周期。随着反复使用和长期储存，填料的性能会发生变化。色谱柱过程验证、包装寿命研究影响包装寿命的因素有：液体性质(杂质的数量和性质)、过程阶段(捕获VS纯度)、包装类型、过程条件(包括再生和清洗)和储存条件。色谱柱过程验证、色谱柱清洗和色谱填料再生专用于一种产品，但是，批次之间的承载能力应最小化。再生是导致重复使用后包装老化的最重要因素之一。验证研究的设计应考虑介质的再生方法，以确定介质的重复使用极限。在

16、工艺开发阶段，应制定有效的介质清洁程序，以便介质可以重复使用，并提供充分的消毒。色谱柱过程验证，色谱柱清洗和再生介质清洗程序的有效性是通过规模前验证研究建立的，然后通过验证方案或生产规模条件下的连续监测来确认。介质的清洁程序应能有效防止残留物的积累。这将最大限度地减少后续批次的残留物，并保持培养基的性能。根据以下程序，通过空白/模拟洗脱可以证明色谱柱过程验证、有效的介质清洗和最小化的承载能力：清洗和储存色谱柱，照常制备色谱柱，但是，不要装载样品，或者使用平衡溶液代替样品进行装载。执行常规的后续步骤，包括洗脱应确认储存时间。在平衡状态下，应演示储存溶液的移除。填充或未填充介质的储存条件将在介质寿命验证期间进行验证。因为在小规模条件下进行前瞻性和长期储存研究是不切实际的。色谱柱过程验证，过程相关的杂质除了批量测试生产规模的一致性外，小规模的色谱柱寿命研究将被用来证明介质能够一致地去除相关的杂质(如宿主细胞蛋白)。这些数据有效地支持了杂质去除的验证，以取代释放试验的要求。在色谱柱过程验证中，杂质也可能通过与过程相关的杂质色谱介质引入样品(脱落)。这对于那些具有高分子量配体的介质尤其重要，例如蛋白A或单克隆抗体连接的介质基质，它们将有进入后续纯化步骤的风险，但不能在后续超滤过程中被去除，并