实验四 凯氏定氮法测定蛋白质含量

1、实验一凯氏氮法是测定蛋白质含量，凯氏氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。 也就是说，在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品，把有机氮全部变成无机铵盐后，在碱性条件下把铵盐变成氨，用水蒸气馏出并吸收到过剩的酸液中，用标准酸滴定，就可以计算出样品中的氮量。 因为蛋白质的氮含量比较恒定，可以根据其氮含量计算蛋白质含量，所以法是经典的蛋白质定量法，“目的”了解槲皮素氮法的蛋白质含量测定方法、意义和应用，“原理”蛋白质是含氮有机化合物。 蛋白质和硫酸和催化剂一起加热消化，分解蛋白质，分解的氨和硫酸结合生成硫酸铵。 然后，用碱性蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，用盐酸标准溶液滴定，由酸的消耗量计算氮的含量

2、，再乘以相应的换算系数，得到蛋白质的含量。 1、有机物中的铵根在强热、催化剂和浓度H2SO4的作用下消化生成(NH4)2SO4，反应式为：2NH2 H2S04 2H=(NH4)2S04，其中CuSO4为催化剂)，2 .槲皮素氮测定器与碱作用，通过蒸馏释放NH3， 在H3BO3溶液中收集的反应式使用： (NH4 ) 2so4NaOH=NH3，2 H2 ona 2so4n H3 H3 bo3=(NH4 )2b4o 75 H2O，3 .已知浓度的HCl标准溶液进行滴定，由HCl消耗量计算氮含量，并计算出相应的换算系数(NH4)2B4O7 2HCl 5H2O=2NH4Cl 4H3BO3，【操作顺序】基

3、本的顺序是：取样消化蒸馏滴定计算，称量适量的样品(约氮30mg40mg )，转移到干燥的消化道，硫酸铜0.2g、硫酸钾6g及内容物全部碳化，泡沫完全消失后，提高火力，使管内的液体内微沸，保持液体呈蓝绿色透明后，再持续0.5h1h。 取下放冷蒸馏用。 (建议：消化炉温调节时间和温度： 1个阶段选择温度范围为280左右，时间为20分钟左右2个阶段选择温度范围450左右，颜色变成蓝绿色后继续加热到0.5h1h。 1 .样品的消化、NaOH、H2O注入口、用橡胶管放入NaOH、H2O罐，注入液体时按下面板的开关，就可以通过电磁泵自动向消化道内流入液体，由注入几毫升水垢的位置决定。 2、蒸馏、蒸馏过程：

4、 (1)观察蒸发炉内的水位，不得超过不锈钢电极(超过后，必须先排水)。 (2)关闭排水阀，打开加热电源，打开冷却水(水道开关)，打开绿色蒸气开关(只打开任意组)，当观察电流计的电流计上升到4A左右时，关闭蒸气开关。 回到0A后打开蒸汽开关。 反复进行开关(0-10 )，直到电流上升到4A后关闭，从塑料管内喷出蒸汽为止，喷雾30分钟左右。关闭蒸汽开关后，机器成为正常的待机状态。 (3)在3)250ml的三角烧瓶中加入2% H3BO3 50ml和23滴的混合指示剂，在蒸馏塔的受管上盖瓶子，将喷嘴浸渍在H3BO3溶液中。 (4)将需要蒸馏的消化管固定在蒸发器支架上，在面板上按下NaOH、H2O开关，

5、向消化管分别注入蒸馏水(10ml左右)和NaOH溶液(硫酸使用量的5倍，约100ml )，打开蒸汽开关，向试管内注入蒸汽进行蒸馏。 等待接收瓶内的液面达到150ml以上时，降低接收瓶，使接收管离开液面，用少量的H2O清洗出口，持续蒸馏30分钟后，取下接收瓶，等待滴定。 甲基赤醇溶液和溴甲酚绿溶液的指示剂，颜色从红酒变成了绿色。 用0.05mol/LHCL滴定接收瓶内的溶液，记录消耗HCl的ml数，直到滴定成灰色为止。3、滴定，用下式计算蛋白含量： x样品中的蛋白含量，% V1样品是硫酸或盐酸标准液的体积，ml； v2试剂空白表示硫酸或盐酸标准液体积、消耗ml的n-硫酸或盐酸标准溶液当量浓度； 0.0141N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m-样品的质量(体积)、g(ml) f-蛋白质系数是16%的计算乘以6.25得到的蛋白质。 【结果与计算】，式中：测定范围：含氮0.1200mg的测定品种：粮食、饲料、食品、乳制品、饮料、土壤、水、药物、沉淀物、化学品等。 加硫酸钾的作用增加了溶液的沸点，硫酸铜成为