基因表达载体构建.ppt

1、1，2基因表达载体的构建、思考和讨论：1，1基因载体的基本条件是什么？基因工程可以用作载体的结构是什么？最常用的载体是什么？3请说明大肠杆菌的质粒结构。从苏云金芽孢杆菌细胞的DNA分子中提取的Bt毒素蛋白基因能直接进入普通棉花细胞吗？如果将目标基因人工注射到普通棉花细胞中，该基因会在棉花细胞中稳定存在、复制和表达吗？如果你是一名基因工程操作员，如果目标基因进入棉花细胞并能在棉花细胞中遗传和表达，你应该采取什么措施？你能说出原因吗？3，(1)基因表达载体的构建，2请定义：基因表达载体构建的含义是什么？1基因工程操作中构建基因表达载体的目的是什么？将目标基因、启动子和终止子科学地置于修饰和重建的载

2、体上。确保靶基因在受体细胞中的稳定存在、复制、遗传和表达，并使其发挥作用。基因表达载体的基本成分是什么？(1)结构基因是提取的靶基因的核苷酸序列，其负责编码靶蛋白。(2)启动子位于编码蛋白质结构的基因的第一个特别构建的DNA片段，即核糖核酸聚合酶的识别位点和结合位点。(3)终止子位于编码蛋白质结构的基因的末端，蛋白质结构是具有特殊结构的DNA片段，具有终止基因转录的功能。(4)复制起点可以自我复制，以确保靶基因在受体精子细胞中的复制、遗传和表达。(5)遗传标记基因检测受体细胞是否含有靶基因，从而筛选出含有靶基因的细胞。5、请用质粒作为载体构建基因表达载体、基因表达载体、启动子、复制起点、终止子

3、、插入靶基因、遗传标记基因、4的模式图。构建基因表达载体的方法，(2)用相同的限制性内切酶切割靶DNA。(1)使用限制性酶，例如EcoRI限制性酶，在基因插入位点切割质粒，从而在质粒中出现切割，暴露两个粘性末端。(3)根据靶基因表达的特点和位置，用限制性内切酶切割相应的控制元件受体细胞的启动子和终止子。(4)启动子和终止子通过限制性酶与靶基因连接形成一个整体。(5)将目标基因插入质粒切口，将基因和质粒与大肠杆菌DNA连接酶缝合，成功构建重组DNA分子。建议模拟大肠杆菌基因表达载体的构建，并写出具体步骤。8，3。将目标基因导入受体细胞。基因导入受体细胞的标志是什么？1靶基因和载体在受体细胞中共同

4、复制、遗传和表达。或者将目标基因插入细胞染色体上的DNA分子，并与受体细胞的DNA分子一起复制、遗传和表达。事实上，外源目标基因成为受体细胞的一部分，这被称为转化。将目标基因导入受体细胞的基本原则是什么？通常从细菌或病毒感染细胞和寄生的方式中学习。(1)将目的基因导入植物细胞农杆菌是一种生活在土壤中的微生物，在自然条件下容易感染双子叶植物和裸子植物，但对大多数单子叶植物没有传染性。感染原理：当植物体受到损伤时，伤口中的细胞分泌大量的酚类化合物，吸引土壤杆菌向这些细胞移动。此时，农杆菌中钛质粒上的T-DNA分子可以转移到受体细胞中，并整合到受体细胞的染色的DNA分子中。1、农杆菌转化方法，11、目的，12、(2)将目的基因导入动物细胞，2个例子，通过基因工程、显微注射技术培养转基因动物的最常见和有效的方法，(1)纯化含有目的基因的表达载体；(2)取出雌性动物的受精卵细胞。(3)用显微注射仪将目的基因注入受精卵细胞；(4)将含有目的基因的受精卵移植到雌性动物的子宫或输卵管中，发育成具有新性状的动物。世界上第一只转基因“超级老鼠”，其大小是普通老鼠的1.8倍，通过显微注射成功。(3)将目标基因导入微生物细胞并将目标基因导入大肠杆菌。最常用的转化方法是：(1)用Ca2处理大肠杆菌细胞，使细胞处于能够吸收环境中的DNA分子的生理状态，称为感受态细胞。2基因质粒的重组