流式细胞检测课件

1、2015-07-07，流式细胞技术FLOW CYTOMETRY，1，学习通信PPT，What does it mean？FLOW CYTOMETRY:快速测量流动系统中单个细胞或粒子的物理和生化特性的方法。flow cyto meter(FCM)-流式细胞术flow sorter流式细胞分类器，2，学习伪PPT，BD FACS vantage，BD calibbur，流式细胞术，BD流式细胞术，bee fluorescent ly labelled antibody，blue laser (488nm)，6，学习AC PPT，流动系统，功能：将被测试样品的细胞传输到激光照射区。 样品：0.2-

2、150微米粒子每秒能测量数万个细胞。sheath fluid :至10ml/test waste: 1l/HR run 10万至100万cells/test，no sheath fluid waste: 500nm，sp 550nmX-Axis:荧光信号强度。Y-Axis:细胞数。分析位图3354 2参数。x和Y轴：两种荧光信号强度。每个点代表一个细胞。Log Lin:荧光强度的坐标可以是线性或对数。23，学习通信PPT，直方图：可以根据单个因素区分单元子集，70 cells each have a green fluorescence intensity of about 400，notic

3、e the sub population？24，学习交流PPT，血细胞子组(红细胞溶解后)，位图：根据多因素区分细胞子集，25，学习交换PPT，荧光校正，光谱重叠校正：目前使用的荧光染料都是光光谱，两者之间的发射光谱范围有所重叠。为了克服这个误差，可以使用荧光校正电路设置滴定荧光信号校正。26、学习沟通PPT，需要准备什么？1.Why:为什么做流式细胞检查？流式细胞技术是最好的检测方法吗？测试的原理是什么？要测试的物质是什么？2.Where:荧光标记物质在哪里？需要固定细胞吗？穿孔？3.Which:你选择什么荧光标签？方法：样品制备工艺，多少样品？(空白控制，语音控制.) 5 .When:预订

4、(175874947组共享下载申请表)Do it！(为了避免适当的细胞密度和细胞结)，27，学习通讯PPT，应用范围，细胞绝对计算和活性分析细胞增殖细胞周期细胞凋亡细胞毒性实验抗原定量检测线粒体膜电位.28，学习交换PPT，实验控制设计，空白控制ALL:使用未标记的细胞进行并行测量，以确定正在测试的标本的基本荧光域值或检测染色方法是否成功。语音对照：调节每个荧光检测仪的适当放大，以确定测试对象标本的基本荧光域值。用于消除抗体和细胞非特异性结合背景的共同同型对照(相同亚型、相同剂量和相同亚型的免疫球蛋白)。阳性对照：利用已知表达某种抗原的细胞(阳性细胞)进行平行实验，通常用于查明抗体是否正常，或

5、确定实验方法的稳定性和准确性。补偿对比：多色分析时用于多色标记的各种荧光抗体分别标记为样品和单色，通过测量荧光信号的光谱叠加进行调节。单色分析：同型抗体对照组多色分析设置：同型对照，补偿对照，29，学习交流PPT，细胞周期：从1分段完成到下一分段完成为止的一个细胞周期。细胞内DNA含量随细胞周期过程周期性变化。)DNA含量：G1(DNA合成前，2C)，分割间隔S (DNA合成期，2C-4C)，G2(DNA合成后期，4C)分割期 M (DNA为4C)。细胞内DNA的相对含量可以使用核酸标记法进行流式细胞术测定，分析细胞周期每个时间点的相比。但是，在分裂期间(m期)的前期、中期、后期、末期四个期间

6、中，没有定量检测到一般流量。1 .DNA细胞周期分析，应用案例，30，学习通讯PPT，1。DNA细胞周期分析，31，学习通讯PPT，实验步骤和注意事项：1，固定细胞周期：加200ul细胞(附着培养细胞必须先消化成胰蛋白酶)至1.5ml离心管300g速度离心5min，1PBS一次清洗离心分离2、以1PBS清洁固定单元300g旋转离心5min一次。用200ul的Guava细胞周期试剂，将细胞再次作为悬浮液在常温下孵化30分钟，注意避光。3，200颈部细胞筛过滤细胞(如果需要使用PI染色过滤)，显微镜下细胞没有结，Guava流式细胞术检测。1 .DNA细胞周期分析，32，学习通讯PPT，2。早期细胞

7、凋亡检测，33，学习通讯PPT，2。早期细胞凋亡检测结果，正常细胞：Annexin V(-)/7-AAD (-)早期细胞凋亡细胞：Annexin V ()/7-AAD (-)晚期细胞凋亡细胞：annexii准备样品(附着细胞):从培养细胞中丢弃旧的培养液，添加胰蛋白酶消化细胞。收集旧培养基，用离心力提取细胞凋亡或死亡细胞，与之后消化的细胞混合后检测。2.细胞染色：将100ulGuava Nexin(货号：4500-0450)和100ul准备细胞悬浮液放入96-well微孔板的相应孔内，室温找光20min孵化；尽快用流式细胞术取得结果(1h以内)。流式细胞术检测获得数据。注：实验最好包括实验组、

8、阴性对照、阳性对照(细胞凋亡诱导组)。2 .造势细胞凋亡检测结果，35，学习交换PPT，细胞凋亡，细胞凋亡是动态事件，在不同时期显示出不同的细胞凋亡信号。早期磷脂酰丝氨酸(PS)暴露在细胞膜上，与PS结合，Annexin V成为早期检测细胞凋亡的最常见指标。此外，线粒体膜电位变化和细胞色素c的释放也被称为细胞凋亡的早期信号。中期Caspase家族蛋白分布在各凋亡途径上，是中期细胞凋亡的指标。活化辣椒素检测可使用FLICA基质。晚DNA片段是晚细胞凋亡的重要特征。破损的DNA片段用TUNEL方法表示。36，沟通PPT，学习细胞凋亡的途径，Caspase-8外源TNF-alpha/FAS受体response to environmental cues，caspase-9内源性细胞色素c的释放DNA损伤或细胞周期，37，学习通讯PPT，Guava Incyte IC50/EC50自动分析，IC50表示抑制浓度的一半，即抑制细胞生长、病毒复制等50%的药物所需浓度。EC50是半效果浓度，表示50%的