结核分枝杆菌实验室检测方法

1、结核分支杆菌在实验室检查方法：分支杆菌属，有些细长稍弯曲，有时分支杆菌，本属细菌多具有抗酸性，也称为抗酸杆菌(acid-fast bacillus )，细菌体内含有分支杆菌酸，细胞壁中含有大量脂质，是分支杆菌的染色性本属细菌已鉴定为70多种，按生长速度分为结核分支杆菌、非典型分支杆菌、麻风分支杆菌3种，分为缓慢生长的菌、快速生长的菌和不能培养的菌3种，结核分支杆菌群、结核分支杆菌是人和动物结核病的病原体， 包括人结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis )、牛分支杆菌(M.bovis )、非洲分支杆菌(M.africanum )和小鼠分支杆菌(M.microti )，

2、前三种治疗人，其中人型结核分支杆菌感染率最高结核分支杆菌是缓慢生长的分支杆菌，非典型的分支杆菌偶发分支杆菌、龟分支杆菌龟/脓肿、细胞内分支杆菌、鸟分支杆菌、戈登分支杆菌、堪萨斯分支杆菌、偶发分支杆菌、帝国分支杆菌、土分支杆菌、草分支杆菌、无产色分支杆菌、海溃疡分支杆菌、金色分支杆菌， 肌苷酸分支杆菌、蟾蜍分支杆菌等偶发分支杆菌，龟分支杆菌龟亚种、龟分支杆菌脓肿亚种为快速生长型，卵培养基上35日菌落其他非典型分支杆菌缓慢生长型多，是麻风分支杆菌、麻风分支杆菌(M.leprae )麻风的病原体，是抗酸比结核分支杆菌短而粗，两端细，抗酸染色着色均匀，排列成束状或团状，散在很多结核分支杆菌，偶尔聚集。

3、 是典型的细胞内寄生菌，麻风病菌存在的细胞的细胞质为泡状，被称为麻风细胞。 不能在体外培养。 6、世界人口约1/3感染结核分支杆菌，有2000万活动性肺结核患者，每年新发生的病例有900万人，每秒有1人感染结核，每年有300万人死于结核。 随着抗结核药的不断发展和卫生生活状况的改善，结核发病率和死亡率一次大幅度下降的20世纪80年代以后，由于艾滋病和结核分支杆菌耐药性株的出现、免疫抑制剂的应用、毒品、贫困和人口流动等因素，全球结核病流行急剧恶化，结核分支杆菌、生物学形状、 结核分支杆菌为细长、稍弯曲的杆菌时可以看到分支状、芽胞和鞭毛，在老化和抗结核药的作用下出现多种形态，如球状、珠状、丝状，大

4、小为14X0.4m。 细胞壁中含有很多脂质，不易着色，特别是包围肽多卫星层外侧的分支菌酸多，一般是抗酸染色。萩尼染色呈红色，背景为蓝色的荧光染料金胺“o”染色，在荧光显微镜下橙色、8、培养特性、实验室的检测方法、萩尼染色荧光染色罗氏培养分支杆菌的快速培养、抗原抗体检测细胞因子检测、荧光定量PCR芯片杂交、病原学、免疫学、分子生物学、涂膜镜检测、抗酸抗酸染色是迄今为止最快的结核检查方法，测定病情的进展，为控制感染提供参考依据，确认培养物为阳性的葫尼染色法红普通显微镜(高倍)荧光染色黄或橙荧光显微镜(低倍)，联合染色法：敏感性高、特异性好、速度快.抗酸染色界限， 抗酸染色除了对分枝杆菌非特异性之外

5、，还有Nocardia (奴卡)、Rhodococcus (红球菌属)、Legionella micdadei (军团菌)、cryptosporidium (隐孢子虫)、Isospora (等孢子虫) 等抗酸菌的特征，不能区分结核和非结核分支杆菌，一般在1mL痰中有5000-10000只菌时能检测出，但培养能检测出10-100只菌.发光二极管荧光显微镜(LED )，荧光显微镜的成本高，易碎，功耗大只要把二极管换成普通的光学显微镜的目镜就相当于荧光显微镜，组装好的“荧光显微镜”与金胺o染色结合，对结核的痰涂膜检查有一定的应用价值。 田斌等人、发光二极管荧光显微镜在基础实验室诊断结核分支杆菌应用评

6、价。 实用预防医学2012年10月第19卷第10期，分支杆菌培养技术、结核菌培养是目前确诊的金标准。 特别是药物敏感性试验结果在指导临床药品使用和耐药性检查等方面起着重要作用，是鉴定是否是活菌的可靠方法。 1、传统的固体培养法检测结核菌生长需要46周。 而且阳性率也是30%-40%； 特异性差。 各种分枝杆菌可以生长。 确认是否为结核菌，需要结合分支杆菌的菌种鉴定和药物敏感性试验。2，分支杆菌快速液体培养技术BD公司发表的BBCctecmgit960全自动分支杆菌培养，鉴定/药敏系统，操作简便，阳性检测时间平均为9d :鉴定，药敏试验时间平均为4d :阳性检测率比传统的固体培养提高了10%左右

7、。 固体培养和液体培养的优缺点，固体培养：污染少，菌落形态观察容易，培养时间长的液体培养：菌体与培养基充分接触，生长快，但容易被污染，血清学试验、免疫学检测方法，1，结核菌感染的机体能产生相应的致敏淋巴细胞， 对结核杆菌有识别能力，再次遇到通过皮肤注入的少量结核菌素的话，致敏t淋巴细胞会被同一抗原再次刺激，发生局部炎症反应，红硬节呈阳性反应。 活动性结核的诊断灵敏度达到77%，界限：假阴性：儿童结核、老年人结核、免疫不全或免疫功能下降患者(例如合并HIV感染，接受免疫抑制剂治疗的患者)假阳性：接种了AMMMC苗的人也有阳性反应。 干扰素释放试验被认为是近十年来结核诊断史上最重要的成果，该测定方

8、法的原理是，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性t细胞，再次遇到抗原刺激时，迅速激活增殖力，释放干扰素。 现在市面上出售的是QFT-G和T-SPOT.TB，比较两种方法，T-SPOT.TB虽然敏感，但QFT-G虽然特异，但比结核菌素试验更好，还被推荐用于潜在结核诊断。 分子生物学检测方法、近年来核酸扩增技术和杂交分析技术的发展，对分支杆菌的检测、鉴定和药敏实验非常方便，可以将诊断时间从几周减少到几天。研究、应用报道较多的结核基因诊断技术主要有聚合酶链反应(PCR )、核酸探针杂交、DNA序列测定、基因芯片、基因分类等。MDR早期诊断，分支杆菌分子诊断系统(协和医院)，菌种鉴定，筛选，鉴别诊

9、断，实时荧光PCR，基因芯片快速检测平台，22，效率： 1个样品可以同时检测结核分支杆菌和ntm:4周(菌培) 102个菌/反应(NTM )、分支杆菌核酸检测、功能： TB快速筛选； TB/NTM鉴别诊断，23，效率：同时快速检测出17种分支杆菌(包括TB ): 4周(菌种鉴定) 6小时敏感： 103个菌/反应，检查范围：结核、细胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、痹012、淡黄、土、龟-脓分枝杆菌菌种鉴定(DNA微阵列芯片法)，24，通量：两个一线抗结核药(MDR )速度： 8周(药敏) 6小时灵敏度： 103个菌/反应，rpoB (利福平)和katG/inhA (异烟肼)的基因变异结核分支杆菌耐性基因检查试剂盒，5种结核检查方法的效果评价：结核组： 1260例，非结核组： 100例，改良罗氏培养，荧