荧光免疫层析技术的原理与进展

1、简介：罗敏，荧光免疫层析的基本原理层析的原理是一种基于混合物中各组分物理性质(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)差异的分离技术。)。色谱系统由固定相和流动相组成。固定相是固体物质或固定在固体物质上的组分。流动相是可流动的物质，例如水或各种溶剂。色谱过程：当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于混合物组分的物理化学性质不同，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时几乎不受阻碍，快速向前移动；与固定相有强烈相互作用的组分缓慢向前移动。从而实现混合物中各组分的分离。免疫层析免疫层析是一种基于层析和抗原抗体特异性免疫反应的新型免疫检测技术。在免疫层析中，固定检测线和控制线的条

2、形纤维层析材料作为固定相，测试液作为流动相，通过毛细管作用使分析物在层析带上移动。特异性免疫反应发生在T线。免疫反应发生在C线。免疫层析技术基本原理示意图，荧光，荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当它们回到基态时，它们以发射光的形式释放能量，这叫做荧光。发射光谱和激发光谱，发射光谱是指样品发射的荧光强度，记录在具有固定激发波长的不同波长上。激发光谱是指固定的检测发射波长，以及不同波长激发样品所记录的相应荧光发射强度。嘿。荧光效率，定义：荧光物质分子将光能转化为荧光的百分比，计算公式：荧光效率=，荧光寿命，定义：荧光物质被激发后衰减到一定程度所需的时间。各种荧光物质的荧光寿命不

3、同。嘿。荧光猝灭，是指：荧光物质的荧光发射在一些物理和化学因素的作用下减弱甚至消退，这称为荧光猝灭。引起荧光猝灭的因素包括紫外线照射、高温、一些硝基化合物、重氮化合物等。在免疫层析中，固定检测线和控制线的条形纤维层析材料作为固定相，测试液作为流动相，通过毛细管作用使分析物在层析带上移动。特异性免疫反应发生在T线。免疫反应发生在C线。免疫层析技术基本原理示意图，竞争法，测试对象中某一抗原与T(检测线)上同一抗原的标记抗体竞争结合的过程。竞争法，夹心法，样品中抗体(抗原)与T线抗原A(抗原A)和荧光标记抗原(抗体)特异性结合的过程，形成抗体A抗原和抗体B在T线的夹心结构。双抗体夹心法、双抗原夹心法

4、、双抗原夹心反应模式阳性检测(左)和阴性检测(右)，利用荧光免疫层析试纸条可以实现待测物的定性或定量检测。金颗粒之间的静电排斥使其在水中保持相对稳定的状态，形成稳定的水溶性胶体，称为胶体金。它还具有高电子密度，能吸附生物大分子而不影响生物分子的活性，因此可用作生物分子的标记物，用于免疫反应中抗原或抗体的标记、定位、定性甚至定量研究。大多数用于色谱试纸的金颗粒直径在20 40纳米之间，呈深红色。胶体金标记蛋白质的过程是蛋白质被动吸附到蛋白质表面的过程胶体金作为标记物具有以下优点： 它可以标记几乎所有的蛋白质分子，工艺简单，效率高，用量少，成本低，并且基本不改变标记蛋白质的活性。且稳定无毒，使用方

5、便，保质期长。不同直径的金纳米粒子可用于多重标记。结果仅需要普通光学仪器或直接目视观察。08天津大学精密仪器与光电工程学院与天津进出口检验检疫局合作开发了一种便携式仪器。竞争法的原则被用于农药残留的定量检测。镧系元素，也称为稀土元素，指元素周期表中原子序数为57 71的所有元素。将两种不同的镧系离子(分别作为光吸收剂和发光体)掺杂到亚微米级陶瓷颗粒(作为主基质)中，构成一种能上转换发光和产生荧光的特殊材料。UCP(上转换磷光体，UCP)粒子。UCP粒子主要含有以下三种成分：氧硫化物(Y2O2S，GdO2S)、氟化物(YF3，GdF3)、硅酸盐(YSi2O5，YSi3O7).吸收体Yb3 Er3

6、 Sm3发射极er3ho3tm3，UCP有独特的优势，如高灵敏度，这已有报道。稳定性高，UCP的发光信号不受检测环境、样品腐蚀或标记自衰减的影响，可长期保存和重复使用。使用方便，安全无毒，适合定量分析和多重分析，易于在一般实验室或现场应用。中国科学院报道了一种用于免疫活性检测的UCP试纸条读取器，它使用半导体激光器作为光源，使用电荷耦合器件作为光电接收器，并使用步进电机驱动装置来控制试纸条的运动。美国军事医学科学院研制出一种UPT 10通道免疫层析试纸盘，可同时检测多种抗体，以确认其是否感染了鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌急性肠道传染病甲胎蛋白肝癌特异性指标。量子点主要指由 族(如)、 族(如InP、

7、InAs、GaSe)、亚族化合物和Si等组成的纳米粒子。量子点具有精确可调的发射波长，通过调节粒子尺寸可以获得不同的发射光谱，因此可以使用不同尺寸的相同量子点粒子。因此，不同尺寸的量子点可以用相同的激发光源同时激发以产生不同的发射光谱，这使得同步检测多个样品成为可能。量子点具有稳定的荧光性质，可以长时间保存，并经过反复激发。良好的生物相容性、物理结合和化学偶联。量子点是一种新的荧光标记。与UCP相比，目前胶体金在免疫层析中很少报道。张国华，赖，等.量子点标记免疫层析试纸条快速检测莱克多巴胺J，2009，以CdSe为标记快速定量检测莱克多巴胺(一种酚胺-肾上腺素能激动剂).胡华军，符涛，等. C

8、dTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究，2010，兴奋剂类药物克伦特罗的检测，又称“克伦特罗”，量子点在免疫层析中的应用。有机纳米粒子，荧光染料有机纳米粒子，如荧光素衍生物，是早期免疫层析中常用的一大类标记物，如异硫氰酸荧光素。标记原理基本上是利用荧光分子中的异硫氰酸酯作为反应基团，与蛋白质分子中的氨基结合，实现蛋白质的标记。同时，荧光素在分子中被用作检测信号，因此有许多早期的应用研究。有机纳米粒子的荧光发射取决于粒子本身的化学发光基团，其不具有无机纳米粒子的波长可以调节的尺寸效应。磁性纳米粒子又称超顺磁性粒子，结合了磁性粒子和纳米材料的优点，具有粒径小、超顺磁性和比表面积大的特点通常，活性基团被引入四氧化三铁的表面，四氧化三铁通过偶联反应与生物分子如酶和抗体结合形成生物标记、超顺磁性、碳纳米管(CNTs)。碳纳米管的结构可以看作是石墨六边形网格结构通过一定的弯曲形成的空间拓扑结构。碳纳米管作为生物分子标记的原理类似于胶体金