脊髓损伤.ppt课件

1、.,1,脊髓损伤 SPINAL CORD INJURY,.,2,脊髓损伤,脊髓原发性损伤(ASCI) 脊髓继发性损伤 (SSCI),.,3,原发性脊髓损伤,机械压迫，出血，细胞内外电解质改变 一般4 h 内 不可逆,.,4,继发性脊髓损伤,包括水肿、局部缺血、炎症反应，再灌注、钙离子通道改变、脂质过氧化等 生物化学变化中，具自体损伤因素及神经保护因素，在分子细胞水平起主动调节过程 可逆性，可被控制 了解其分子机制，对采取治疗措施有重要意义,.,5,脊髓损伤后病理改变,出血 水肿 神经坏死 轴突碎裂 脱髓鞘 空洞形成,.,6,缺血,乳酸水平明显升高 低灌注量程度与脊髓生理功能改变及诱发电位相关

2、组织氧含量明显减低,.,7,局部缺血,灰、白质血管反应不同，前者在伤后12h 内迅速出现缺血和梗死，白质血流 (SCBF) 与创伤程度有关 引起脊髓坏死或神经功能丧失重要原因 除与血管直接损伤有关外，还与血管活性物质释放引起血管痉挛、血栓形成、血栓素(TXA)有关,.,8,局部缺血,血管内皮损伤与SCBF 同等重要 再灌注后最初数分钟内，细胞死亡有一爆发过程，缺血后40 min, 神经元胞体和轴突有明显免疫组化及病理学损伤，再灌注 4 h，NF 反应阳性，NF 紊乱、稀疏、崩溃、溶解、轴突肿胀、扩大、消失,.,9,水肿,SCI 后，血-脑（脊髓）屏障 (BSCB) 破坏，CNS 正常内皮的选择

3、性渗透性受到影响，内皮的损坏将促进血管性水肿的形成，血管外间隙内聚集富含蛋白的血浆样液体 一定程度细胞毒性水肿，对神经组织引起压迫，维持异常电解质环境 白质水肿降低灌注，促进组织继发损伤,.,10,水肿,伤后立即，水肿局限于脊髓中央部分，逐渐呈离心性向白质扩散 SCI 严重程度与水肿纵向扩展有关，伤后68d 达高峰 水肿可表现为继发形式，血浆超滤液逐渐出现，呈持久血管性水肿 继发性内皮细胞连接的松弛发生毛细管 漏，或超过内皮增加的小泡样输送,.,11,分为两区 ： 第一区：出血，组织不存活，微血管床逐渐丧失灌注的能力 第二区 ：血管床仍保持畅通 治疗在于尽量不使第一区扩大，同时使第二区仍然存活

4、的组织维持灌注,微循环障碍,.,12,微循环障碍,正常脊髓血流量 (SCBF) : 分布呈阶段性 腰膨大 颈膨大 胸腰段 上胸段 中胸段 上颈段 平均 SCBF 为 24.29 5.63 ml/100g/min 灰质与白质血流量比率约为 3.22 : 1 正常脊髓血压在6.7 17.3kPa下可自行调节,.,13,影响SCBF的因素,灌注压 ( perfusion pressure, PP ) 平均动脉压 ( mean arterial pressure, MAP) SCI 后，脊髓自动调节血压机制受到损害 脑脊髓压 (cerebrospinal pressure , CSFP ) SCBP

5、与 MAP呈线性相关 PP = MAP CSFP,.,14,巨噬细胞,SCI 后首先是 PMN 浸润，伤后12 d 开始巨噬细胞浸润， 57 d 达到峰值， SCI 后存活的神经纤维继发脱髓鞘及轴突迟发功能丧失，与巨噬细胞应答时间一致 巨噬细胞具清除细胞碎片、恢复血流及SCI 内环境等保护作用, 但与吞噬细胞活性和刺激瘢痕形成等破坏作用很难分开,.,15,星形胶质细胞,通过调节细胞外电解质平衡和合成CNS 细胞外基质蛋白 （胶原蛋白、纤维粘连蛋白），以维持CNS的完整和内环境的稳定 促进内皮细胞的紧密连接（血脊髓屏障组成部分）直接或间接保护神经细胞 通过控制调控因子和基质蛋白的合成对神经起破坏

6、作用,.,16,脊髓损伤后电镜观察,5 min : 皮质小静脉扩张，红细胞膨胀 1530 min : 血管周围间隙出血，轴突变化 1 h ：染色质溶解，前角细胞缺血 4 h ：中央区出血坏死，灰白质交界处进行性水肿 1 w ：中央区出现囊形变 4 w : 囊腔内有星形胶质细胞或残存脱髓鞘的轴突,.,17,脊髓损伤后细胞凋亡,凋亡是以细胞或细胞核皱缩、染色质密度增加，膜芽出为特征，其过程需要精确的基因转录和一定量蛋白质合成，是一种主动性、不同于坏死的死亡形式 SCI 后，神经元及胶质细胞都产生凋亡，但就分布范围及持续时间来说，后者更具意义,.,18,脊髓损伤后凋亡,应用原位末端标记法 (TUNE

7、L) 与免疫组化结合， 大鼠脊髓横断后，断端两侧白质脱髓鞘区 P53 和 Bax 表达增强，Bcl-2 仅少量表达 ；出现大量 TUNEL 标记阳性细胞；TEM 见少突胶质细胞典型凋亡改变，说明大鼠脊髓横断后白质内胶质细胞出现凋亡,.,19,细胞内外K离子的变化,K+ 从受伤的神经元释放，细胞外 K+ ，神经元丧失传导冲动的能力 细胞外 K + 浓度 20 mmol/L 可使动作电位传导终止 严重SCI后，白质细胞外 K+ 在6 min 内可由4 mmol/L 到 50 mmol/L, 甚至更高 此现象可持续达 2 h,直到细胞外 K+ 浓度降低到 15mmol/L 以下时，抑制方能逆转,.,

8、20,细胞内外Ca离子的变化,细胞内Ca 2+ 后，可激活蛋白溶酶和脂质溶酶，引起细胞损伤和坏死 SCI 后，细胞外 Ca2+ 内流超载，损伤周围组织 Ca 2+ 也流向损伤组织，使组织总 Ca 2+ 和细胞内 Ca 2+ 都过度增高，细胞内 Ca 2+ 超载称为细胞死亡最后公共通路,.,21,Ca2+内流的机制,细胞膜缺损处的泄露，去极化，特异性Ca2+通道的开放 N-甲基D-天冬氨酸(NMDA)依赖性通道的活化 清除功能障碍 （Na+-Ca2+交换减少、Ca2+泵失能等） 细胞内储库释放Ca2+ 脊髓组织坏死的磷脂膜局部自溶或许是SCI区域内细胞外液Ca2+过高的一种主动机制，以获得自身修

9、复或保护的足够时间,.,22,Mg2+的变化,脊髓损伤后，局部组织 Mg2+ 含量下降，其程度与 SCI 损伤程度呈正相关。说明 Mg2+ 的降低参与了 SSCI 早期补充 Mg2+ 可减轻因 Mg2+ 下降造成的 SSCI Mg2+是一种非竟争性 NMDA 受体拮抗剂 ，可阻滞 NMDA 受体的离子通道，并调节 EAAs 的释放，从而拮抗由 EAAs 所致损伤 Mg2+ 对的保护作用有赖于对 Ca2+ 的拮抗作用,.,23,Mg2+的变化,SCI 后 24h 和 48 h，局部组织总 Ca2+ 含量显著增高，Ca2+ 大量细胞内流，导致细胞内 Ca2+ 浓度大大升高 Mg2+ 通过与 Ca2

10、+ 竞争细胞膜上的结合位点而抑制 Ca2+ 内流；通过 Mg2+ - Na+ 交换从而抑制 Ca2+-Na+ 交换，阻止Ca2+_内流 细胞外 Mg2+ 上可通过 Mg2+ - Ca2+ 交换促进 Ca2+ 外流,.,24,脂质过氧化,内源性抗氧化剂减少，自由基 (FR) 生成增加 主要来自遭受损害或破裂的磷脂细胞膜，膜的通透性或完整性受到破坏，甚至引起细胞死亡 FR 抑制 PGI2，使TXA2 合成及血小板凝聚作用增强，微血管闭塞和痉挛，间接造成脊髓缺血,.,25,兴奋性氨基酸 (EXCITORY AMINO ACIDS, EAAs),EAAs 主要包括 谷氨酸及天门冬氨酸，是重要兴奋性神经

11、递质，正常存在于神经末梢的囊泡中 EAAs通过其受体介导，启动一系列神经损伤，最终导致死亡细胞的病理生化反应，称为EAAs神经毒性,.,26,兴奋性氨基酸 (EXCITORY AMINO ACIDS, EAAs),EAAs 有三种具特性的受体 ：kainate, quisqualte 及 NMDAR NMDA 是一种兴奋性极强的 EAA，作用强度为 Asp 的1000倍 NMDAR 可使神经细胞Na+, Ca2+内流，K+外流，造成细胞内Na+, Ca2+浓度升高, K+ 浓度降低,.,27,兴奋性氨基酸 (EXCITORY AMINO ACIDS, EAAs),EAAs 在 SSCI 的神经

12、毒素表现 ： 1. 伤后数小时内因 EAAs 受体过度兴奋，介导神经细胞急性渗透性肿胀，以Na+内流和Cl-及水分被动内流为特征 2. 伤后数小时至数日内, 因NMDAR 过度兴奋引起的神经细胞延迟性损伤, 以Ca2+内流为特征,.,28,NMDAR,NMDAR 主要分布于神经元细胞体和树突的突触后膜 NMDAR 数量的减少可能起一种代偿性神经保护作用 NMDAR 数量的减少并不是神经元原发损伤变性坏死的结果，而是在继发性损伤过程中起了作用,.,29,内源性阿片肽,类阿片受体主要有、 及 三种，纳络酮对受体最具选择性，但大剂量对三种受体的配体均有活性 强腓肽(dynorphin)即 类阿片受体

13、的配体，在SCI最易被累及，SCI后，强腓肽的免疫反应有选择性地增加，与损伤严重程度相关,.,30,内源性阿片肽,纳络酮可逆转颈段脊髓横切后引起的低血压，可改善SCBF 强腓肽在内源性类阿片中是唯一在大鼠腰蛛网膜下腔注射后能产生后肢瘫痪者，部分系非类阿片剂作用,.,31,自由基 ( FREE RADICAL, FR ),FR 是具异常反应的分子，继发于其外轨道不成对电子 氧FR链反应累及 LPO, 生物膜的磷脂及胆固醇成分被FR反应所破坏 正常还原的细胞代谢途径可产生 ：O2，OH-, H2O2 正常通过一些天然抗氧化物可管制FR产生的有害作用,.,32,自由基 ( FREE RADICAL,

14、 FR ),病理性 FR 的产生及其有害作用可引起 SCI 后的缺血 ASCI 后，FR 可引起 LPO 并使细胞膜节裂，表现为过氧化多不饱和脂肪酸(PUSFA) 分解产物增多，胆固醇减少，伴胆固醇氧化产物。鸟苷酸环化酶的活化及相应 cGMP 增加；组织内抗氧化物如坏血酸及生育酚减少；磷脂依耐性膜结合Na+ K+ ATP 酶的抑制等,.,33,甘烷类 ( EICOSANOIDS ),SCI 后，花生四烯酸从膜磷脂释出，很快游离，被环氧化酶代谢形成过氧化类及甘烷类，或经脂氧化酶代谢为羟脂肪酸和白三烯 甘烷类中两个具最强活性，能影响血液阻断及血管完整性的为 : 血栓素( thromboxane,

15、TXA2 ) 前列环素 ( prostacyclin, PGI2 ),.,34,甘烷类 ( EICOSANOIDS ),TXA2 刺激血小板聚集及血管收缩，细胞内 Ca2+ 增加，cAMP 降低 PGI2 作用相反，抑制血小板聚集和使血管扩张，细胞内 Ca2+ 外流，cAMP增加 猫 L2髓节从腹侧打击后 6h，TXB2 5倍， 6KetoPGF1 TXB2/6KetoPGF1 近三倍,.,35,甘烷类 ( EICOSANOIDS ),TXA2 和 PGI2是一对重要前列腺素产物，具有非常强烈相互对立的血管活性 生理情况下，TXA2 和 PGI2的产生和分解保持相对平衡，以维持机体循环功能正常

16、 TXA2/PGI2失衡后，一方面病理性FR增加，加重LPO；另一方面加重血管内皮损害，血管渗透性增加，发生微循环障碍 两者互为因果，形成恶性循环,.,36,花生四烯酸的代谢,细胞破裂时，花生四烯酸丛磷脂结构释放，作为环氧化酶或脂氧化酶底物发挥作用，生成PG, PG-I, TXA2和白三烯 TXA2 和白三烯是强力血管收缩剂和中性粒细胞的趋化因子，在炎症前效应中有广泛作用 这些化合物与脂质过氧化生成密切相关,.,37,内皮素 （ ENDOTHELIN, ET ),ET 是血管内皮细胞产生具强烈收缩血管作用的生物活性多肽， 正常血浆 ET 水平较低，缺血、缺氧条件下， ET 水平明显升高 ET

17、缩血管效应起效慢，持续时间长，微血管较大血管对ET 更敏感 ET 在 CNS 中起神经递质作用，可引起脑血管持久性收缩及蛛网膜下腔出血 ET水平越高，脊髓损害程度越重,.,38,内皮素（ ENDOTHELIN, ET ),ET 在ASCI 的作用机理 ： 1. 引起血管痉挛, 导致脊髓缺血缺氧 2. 作用于受体后, 细饱内游离 Ca2+ , 导 致脊髓缺血, 线粒体功能受损, EAAs , 中性蛋白酶活化, 加剧脊髓损伤 3. 破坏BSCB,.,39,血小板活化因子 ( PLATELET ACTIVATING FACTOR, PAF ),在创伤应激条件下，血小板、血管内皮细胞和神经细胞均能产生

18、大量 PAF，与靶细胞膜上的 PAF 特异性受体结合后即产生生物效应 PAF 可使 Na+、K+、Ca2+、Mg2+ 通道开放，细胞外 Na+、Ca2+ 内流，细胞内 K+ 外流 PAF 加重脊髓损伤后水肿，抑制 Na+K+ATP酶及 Ca2+Mg2+ATP酶的活性，结果是 Na+、Ca2+浓度升高， K+ Mg2+浓度降低,.,40,血小板活化因子 ( PLATELET ACTIVATING FACTOR, PAF ),PAF 是生物活性很强的多功能脂质炎性介质，也是SSCI的启动因子，能介导神经毒性水肿作用 组织损伤可刺激、介导中性粒细胞和血管内皮细胞间的粘附作用，与细胞间粘附分子 ICA

19、M1，内皮细胞和白细胞粘附分子ELAM1及颗粒膜蛋白GMP140有关 PAF 可使血管内皮细胞ICAM1、RNA、ELAM1、mRNA表达,.,41,腺苷 (ADENOSINE ),腺苷是 CNS 内重要抑制性保护递质之一， SCI 后，腺苷含量立即升高，1 h 达高峰， 2 h 降为正常，腺苷含量与损伤程度成正比，大量兴奋性毒性物质释放，损伤细胞释放 K+以及缺血、缺氧均可刺激腺苷的合成与释放 腺苷是 CNS 内一种突触传递及神经元活动的抑制性调节因子，腺苷激活突触前膜 A1 受体，影响 Ca2+ 的内流，以抑制 Ca2+ 依赖的兴奋性递质的释放，腺苷还可激活 A2受体，使血管平滑肌松弛，防

20、止血栓形成,.,42,SCI后生长因子 和细胞因子的变化,TNF-, IL-1, IL-6 : 在脂质过氧化生成过程中起重要作用，促进炎症反应，不利于修复 TGF- ,.,43,SCI后生长因子和细胞因子的变化,TGF- ： 多功能多肽性生长因子 对急、慢性炎症有重要对抗性调节作用 通过抑制质脂过氧化生成能防止缺氧性损伤 通过细胞表面受体调节基因表达，调节细胞外基质合成、细胞分化和增殖 通过刺激NGF生成及抑制细胞增殖，调节星形胶质细胞功能,.,44,NO,NO 对 SCI 同时起保护作用及破坏作用 在CNS内，主要由血管内皮细胞、神经细胞和神经胶质细胞中 NOS 催化精氨酸胍基末端氮原子与氧

21、结合生成 NO 作为一种血管舒张剂， 可舒张血管，增加血流，同时也抑制中性白细胞、血小板和巨噬细胞贴附于血管内皮，避免血栓形成，有助于维持正常血管通透性,.,45,NO,NO 将增强炎症细胞的粘附和从血管内渗出，白细胞渗入组织中的破坏作用，减少促炎症反应细胞因子（ TNF、 IL-1） 防止 LPO 的生成 NO 与 TGF- 可相互作用，促进 TGF- 抗炎症反应 NO 是 CNS 中强有力的信息传递介质，不需细胞表面受体应答而奏效,.,46,继发性脊髓损伤 的药物治疗,.,47,大剂量甲基强的松龙 的应用(METHYLPREDNISOLONE SODIUM SUCCINATE, MP),.

22、,48,MP,抑制LPO 保存生物膜的结构和功能完整性 促进神经功能恢复,.,49,大剂量MP,NASCISI : 首次1000mg，以后 1000mg/d，连续 10d. 与100 相比,感觉与运动功能均无明显差异 NASCISII: 首次 30mg/kg,以后5.4mg/kg/h, 共 23h. 与大剂量纳络酮及安慰剂(5.4g/kg/h, 然后是 3.6mg/kg/h) 相比,结果显示,伤后8 h 内应用大剂量者, 其神经功能改善在统计学上有显著意义,.,50,大剂量MP,NASCISII: 伤后3 8 h内首次 30mg/kg, 分为 24h 及 48h 组,后者在伤后6周、6月和 1

23、年时运动功能显著改善。在 3h 以内接受治疗时，应维持 24h；在伤后 38h 治疗者，应维持 48h,.,51,大剂量MP,需要静脉大剂量给药 早期治疗 （8 h 以内） 神经保护时间曲线与组织药代学平行 神经保护作用独立于糖皮质激素活性,.,52,NMDAR拮抗剂,CPP 3- ( 2-carboxypiparazin-4-yl) propyl-1-phosphonic acid 鞘内注射能有效地减轻神经功能和组织的损害，拮抗Na+,Ca2+通过受体门控通道的内流, 而减轻神经细胞的损伤 Dizocilpine maleate (MK801) : 强有力非竟争性NMDAR拮抗剂，在局灶型脑

24、缺血可使组织损伤减少3090% MK801可改善脊髓损伤或缺血病变,.,53,阿片肽受体拮抗剂,在大鼠后鞘内注射相对无选择性受体拮抗剂 win44, 4413, nalmefene及高选择性受体拮抗剂 norbinaltorplimine ( norbin )，较纳络酮能更好保护肢体运动功能, 而阿片受体拮抗剂ICI154，,129无此作用 特异性拮抗剂norbin 和AndynA113分别从阿片肽受体水平和阿片肽配体水平阻断dynA的作用，药理剂量足以拮抗或中和脊髓全部受体和dynA，4周后显示AndynA113对脊髓的保护作用强于norbin，残留脊髓面积最大,.,54,钙通道阻滞剂,尼莫

25、地平( nimodipine ) 对脑血管有选择性扩张作用，大剂量因引起的血压而无效。加用肾上腺素以维持一定平均全身动脉压（MSAP）非常重要 SCI后，低血压将加重缺血，单纯应用升压药不能恢复SCBF 尼莫地平虽能改善SCBF，能否促进神经功能仍不明确，但对 Ca2+诱导细胞死亡具有保护作用,.,55,自由基清除剂,皮质类固醇能抑制AA的释放，降低LPO的形成，增强Na+K+ATP酶的活性 MP, 环氧化酶抑制剂如消炎痛，甲氯灭酸的结合碱（ meclofenamate），SOD， 维生素C，维生素 E 及尼莫地平可在不同环节打断 FR 反应 Tirilazad 为强有力自由基清除剂及抗氧化剂

26、，特别是 LPO 强有力的抑制剂， Tirilazad 也能降低损伤部位释放的 AA 量,.,56,NO抑制剂,小剂量非特异性NOS 竞争性抑制剂 L NAME ( L NG硝基精氨酸甲酯）可减轻组织损害，但大剂量可使组织破坏加重，神经功能不能恢复，说明 NO在参与SSCI 中， 既具保护作用，又具破坏作用 LNAME 对神经细胞和血管内皮细胞具抑制作用，并呈剂量依赖性,.,57,血小板活化因子拮抗剂,PAF受体拮抗剂BN52021是一种二萜化合物，能抑制3HPAF与血小板、血管内皮细胞、神经细胞特异性结合，有很强竞争专一性 BN52021能减轻脊髓组织水肿，防止血管内皮细胞损害以及因血管通透

27、性增高所致BBB障碍 BN52021对SCBF有重要调节作用，通过阻断PAF受体，间接抑制PLA2及TXA2合成酶的活性，减少AA代谢产物释放 BN52021抑制Ca2+内流、LPO反应及EAAs的产生和释放,.,58,神经节苷脂 ( GANGLIOSIDE, Gg ),Gg 是组织细胞膜上含糖鞘脂的唾液酸， CNS 含量最高 Gg 至少有四种，即GM1、 GD1a、 GD1b 和 GT1b，其中 GM1 最为重要，被认为是继大剂量 MP 后治疗 ASCI 有价值的药物 GM1 能激活 Na+K+ATP 酶，防止神经组织因缺血造成的细胞水肿及神经细胞在缺氧状态下的存活率，并能促进神经细胞轴突、

28、树突发芽和再生 GM1能抑制NOS 的活性，降低NO的合成及因此造成的神经损害,.,59,神经节苷脂 ( GANGLIOSIDE, Gg ),Geisler (1991) : SCI 后，先采用 MP，伤后 72 h 内，静脉注射 GM1 100 mg/d，共1832次，1年随访 ASIA 运动评分较对照组提高，但受到质疑 Geisler （1992）再次进行总结， GM1组应用 Frankel 评分平均提高23级，主要能促进白质神经纤维通过损伤平面 临床观察应用小剂量MP和 GM1比单用 MP好 MP与GM1最佳配伍剂量、给药时间及是否可与 NGF联合应用尚需进一步研究,.,60,脊髓损伤实

29、验性治疗,EXPERIMENTAL TREATMENT OF SPINAL CORD INJURY,.,61,神经元再生,出芽 延长 功能性连接,.,62,影响脊髓再生的因素,环境因素 (ENVIRONMENTAL FACTORS) 内在因素 (INTRINSIC FACTORS),.,63,影响脊髓再生的环境因素,缺乏NTFs的营养、促进作用 缺乏适宜引导通路基质 胶质瘢痕阻碍生长 存在髓鞘相关抑制因子,.,64,影响脊髓再生的内在因素,生长相关蛋白 (GAP 43) 降钙素基因相关肽 (CGRP) 原癌基因 (Bcl 2) NMDA 受体,.,65,脊髓损伤实验性治疗,继发性脊髓损伤治疗

30、神经营养因子 神经组织或细胞移植 基因治疗,.,66,神经营养因子 NEUROTROPHIC FACTORS（NTFs),神经营养因子 ： 神经生长因子 (NGF) 脑源性神经营养因子 (BDNF) 神经营养素3 (NT3) 神经营养素4/5 ( NT4/5) 睫状体神经营养因子（CNTF),.,67,NTFs,低亲和力受体 (LNGFR) 高亲和力受体 (HNGFR),.,68,NTFs,与神经膜、轴膜上受体高选择性结合 调控神经细胞内相关细胞因子及钙离子重新分布 改善损伤部位的微循环 促进神经元纤维再生,.,69,神经组织或细胞移植,周围神经移植 胚胎脊髓移植 雪旺细胞移植 混合移植 其它

31、,.,70,胚胎脊髓移植,胚胎脊髓块移植 (FSC) 胚胎脊髓悬液移植 (FSCS),.,71,胚胎脊髓移植,抑制胶质瘢痕 营养神经组织 诱导作用 传导作用 中继作用 救援作用 替代作用,.,72,雪旺细胞（SCs）移植,产生的NTFs对神经元的存活有协同作用 表面细胞粘附分子（CAM) 与轴突生长锥表面相应分子亲和性结合 分泌细胞外基质（ECM)，如层粘蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)等,.,73,基因治疗 (GENE THERAPY),利用外源基因在靶细胞中的表达，改变神经元内在特性，促进神经元存活、再生，达到功能恢复,.,74,基因转移 （GENE TRANSFER),活体外法(EXV

32、IVO APPROACH)：将经过遗传修饰的特定细胞移植到活体神经组织，表达或分泌特定分子，促使神经功能恢复 在体法（INVIVO APPROACH) ：利用病毒或非病毒载体将外源基因直接导入神经组织而使其表达,.,75,基因转移 （GENE TRANSFER),重组分子的构建 受体细胞的选择 载体的选择,.,76,重组分子的构建,目的基因cDNA 启动子/增强子 载体,.,77,目的基因,通过基因克隆化、人工合成、PCR 扩增及人体基因组降解而获得 通过粘性末端连接法、平头末端直接连接法或同聚物结尾法进行构建,.,78,启动子/增强子,强组成型 （STRONG CONSTITUTIVE） 管家型（HOUSE KEEPING） 组织特异型 （TISSUE SPECIFIC）,.,79,受体细胞选择的条件,易于获取或培养增殖 易于接纳重组分子 易于移植、存活，长期表达外源基因 无免疫原性及形成肿瘤危险,.,80,较常用受体细胞,雪旺细胞 成纤维细胞 成肌