分子诊断技术.ppt

1、分子诊断技术，2，a，典型的核酸分子诊断技术，核酸分子杂交(nucleic acid molleular hybridization)基因芯片(Gene Chip)聚合酶链反应(polymerrase chain)PCR)，3，a，核酸分子杂交的原理，双链核酸加热或碱处理变性后，链可以分解成两个互补的单链核酸。双链在适当的温度和盐浓度下被碱互补配对原理(A-T，C-G)复性，可以成为双链核酸。以已知序列的单链核酸为标记，可以制作核酸探针，与变星的试验对象标本核酸杂交，可以检测标记探针的信号，判断标本是否有补充探针的同源核酸。4，a，核酸分子混合探针的制备，制造探针的目标核酸是：分离，通过切割病

2、毒的特定核酸片段可以获得；使用重组技术将该片段复制到细菌质粒上，扩增和纯化，得到了大量。选择已知病毒的基因序列之一合成寡聚核苷酸，长度约为20个，最常见，太短，容易产生非特异性杂交。5，a，核酸分子混合探针的制造，标记探针的常用示踪放射性核素(32P，35S，3H，125I等)，杂交后通过放射性自开发技术检测放射性物质(生物素，地高辛，酶等)，杂交dot bolt hybridition for HBV DNA quantitation in 5l of patient sera，9，a，凝胶电泳印迹传递混合in situ hybridization(原位杂交，11，a，基因芯片，也称为DNA

3、微阵列，是指固定在固相向量上的高密度DNA微晶格。很快大量的目标基因或寡核苷酸片段以高密度排列在玻璃、硅等载体上，被称为基因芯片。上图显示了大量DNA探针按一定的规律排列在支撑架上，然后每个探针与对应的特定互补序列相结合，释放出荧光。使用这个芯片可以同时获得很多信息。DNA微阵列，12，a，基因芯片技术原理，大规模集成的固相杂交的基本原理，根据核酸分子杂交，即DNA双链碱基互补对，变性和复性原理，上传多个已知序列，用cDNA或基因片段作为探针，在样品中检查某些核酸序列及其互补性，然后分子印迹法、针尖样品、喷墨点样品、光指南现场合成法、15、a、基因芯片技术流程、16、a、基因芯片的应用、基因表

4、达分析基因表达分析时空特征基因差异表达检查结果，新基因的大规模DNA测序基因型、基因突变和多态性分析疾病的诊断，以及遗传病相关基因的定位肿瘤诊断感染PCR)，PCR是80年代中期出现的一种在体外模拟身体DNA复制过程的技术，可以在短时间内将正在测试的特定DNA放大一百万倍以上，成为具有简单、快速、特异特征的分子生物学发展史上的又一个里程碑。PCR不仅检测各种DNA病毒的核酸，还检测逆转录病毒，各种RNA病毒的核酸，在检测各种肝炎病毒时，发挥比分子交配更高的敏感性。18，a，PCR的一般类型，传统PCR (rt-PCR)嵌套PCR nested-PCR，原位PCR(in-situ PCR)多个P

5、CR.不对称PCR免疫PCR定量PCR随机引物PCR简单和引物PCR锚点PCR，19，a，实时荧光定量PCR荧光检测技术，SYBR Green I .是一种绿色激发波长的染料，结合所有dsDNA双螺旋小沟区域。塔斯曼水解探针。由荧光组、荧光猝灭组、与扩增子互补特异性核苷酸序列组成。20，a，实时荧光定量PCR:水解探针方法，退火扩展切割聚合完成，该方法还添加了TaqMan技术，PCR系统中可与目标核酸模板杂交的探针，5 端有荧光报告器，发射的荧光在3 端被荧光猝灭组吸收。随着引物扩张时聚合酶所具有的5-3 核酸外体系的作用，荧光报告组可以从探针中剪切出来，因为与淬火组分离，发光不被浸泡，所以随着模板放大和自由荧光报告器的增加，提高