沙门氏菌检验

1、沙门氏菌检验,革兰氏阴性杆菌,前增菌,增菌,分离,生化试验,多价血清凝集试验,革兰氏染色,前增菌,固体样品：25g（电子天平） 液体样品：25mL（25mL吸量管） + 225mL缓冲蛋白胨水（BPW，量筒），混匀。 于361培养818h 注意： 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。,稀释瓶或具塞广口瓶,增菌,取阳性前增菌液,1mL + 10mL TTB,1mL + 10mL SC,421,1824h,培养,361,1824h,培养,科玛嘉显色平板,BS琼脂平板,分离,取阳性TTB试管和阳性SC试管,阳性TTB,1环,BS平板，划线,361,4048h,培养,1环,显色平板，划线

2、,361,1824h,培养,阳性SC,1环,BS平板，划线,361,4048h,培养,1环,显色平板，划线,361,1824h,培养,平板划线示意图,开始处,开始处,沙门氏菌在科玛嘉显色平板上的菌落特征： 紫红色菌落,沙门氏菌在BS琼脂平板上的菌落特征： 黑色有金属光泽，棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色，有些菌落呈绿色 ，周围培养基不变色。,生化 试验,在阳性BS或显色平板上挑取可疑菌落。,三糖铁斜面：先划线，后穿刺,接种赖氨酸脱羧酶试验培养基,营养琼脂平板划线,尿素斜面：先划线，后穿刺,连做，接种针不要灭菌,361,1824h,培养,灭菌后，取1环，加入胰蛋白胨水,培养,取阳性胰蛋

3、白胨水（放阳性物品处） 靛基质试剂用滴管取12滴加入阳性胰蛋白胨水中。 结果：多数为阴性,三糖铁斜面培养结果：底层（+）、产H2S（黑色）、产气（有气泡）或不产气,红色：产碱 黄色：产酸 黑色：产硫化氢,尿素斜面培养结果：颜色变黄（产酸）,尿素斜面,三糖铁斜面培养结果：底层（+）、产H2S（黑色）、产气（有气泡）或不产气 赖氨酸脱羧酶试验结果：颜色变化（加深），为阳性 尿素斜面培养结果：颜色变黄（产酸）,革兰氏染色结果： G-（红色，无芽孢，杆菌）,凝集 试验, 从有典型沙门氏菌三糖铁斜面上用接种环取1环,玻片,用记号笔在玻片中间画条线, 滴12滴灭菌生理盐水,滴12滴沙门氏菌多价血清,结果：

4、沙门氏菌多价血清：凝固 灭菌生理盐水：不凝固,另：从有典型沙门氏菌三糖铁斜面取1环，染色。,在无菌室中固定，到微生物实训室染色,涂片 火焰固定结晶紫初染 水洗 碘液媒染 乙醇脱色 水洗 吸干 番红或沙磺复染 水洗 干燥 镜检,染色,涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。 火焰固定：载玻片通过火焰1 2 次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。 水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。,碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20 30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水纸吸干水分。,番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1 2 min。 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。