转基因动物制备的方法的.ppt

1、转基因动物的制造方法、a、2、a、3、a、4、a、5、a、6、a、7、1转基因动物是指通过实验方法将人们需要的外来基因导入动物体内，将该外来基因与动物自身的染色体整合，外来基因随着细胞分裂a、8、转基因动物出生以来，随着研究的深入，近年来发展迅速。 打破自然繁殖中的种间隔离，使基因在种间关系遥远的机体之间流动，实现了动物种间遗传物质的交换和重组，为遗传物质的研究提供了新的手段，丰富了种基因库，扩大了生命科学的视野。 a、9、转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。 近十年来，对分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面作出了巨大贡献。 a、10、

2、Gordon等人首次通过显微注射法将含有HSV和SV40DNA片段的重组质粒DNA导入小鼠受精卵的雄原核内，得到了具有该外源DNA顺序的TGM。 1982年，Palmiter等人使用这种方法得到的所谓“超级巨蛋”，引起了生物学界全体的关注。a、11、迄今为止，人类获得了转基因鱼、老鼠、羊、猪、兔、牛等动物。 从转基因动物中获得的资料涉及医学遗传学、肿瘤学、免疫学等基因研究、生物药物研究、基因治疗开发研究等。 又称a、12、2转基因动物的制备方法、2. 1显微注射法、原核显微注射法，是发展最快、最广泛的转基因方法之一。 利用显微操作技术将外来基因直接注射到实验动物的受精卵中，将注射的外来基因和胚

3、胎基因融合，通过胚胎移植技术将合并了外来基因的受精卵移植到受体子宫内使之发育，分娩的动物体内的细胞都包含外来DNA片段。 以使用a，14，a，15，a，16为例，该方法的实验步骤如下：(1)准备怀孕的母子小鼠(养母)；准备受精卵；基因导入；胚胎移植；幼儿小鼠的鉴定，a，17，a， 18、优点：外来DNA大小几乎没有限制(1-50kb )引入过程的直观整合率高，a，19， 缺点：设备昂贵，环节多，对操作人员有高技术要求，低效率(特别是大家的家畜)对卵子损伤大，胚胎存活率低的基因整合随机基因沉默，通过2. 2精子载体冷冻精子或化学物质处理后与外来DNA一起孵化，将外来DNA和精子通过人工授精，转基

4、因个体获得了目前国际上非常成功的模型，在国内也没有太多相关报道，精子载体法应用较少。 a，21，体外受精法1970年，Steven分离成功小鼠胚胎肿瘤细胞的1981年，Martin Evans从正常小鼠胚胎中分离出ES细胞，a，27，1984年，Bradley注入了胚胎的小鼠ES细胞分化成成体的各种组织，并整合到生殖系统中意义：与里程标、同源重组技术结合，使哺乳类的遗传特性在总体水平上发生变化和修饰成为可能。 1995年，Thomson是从恒河猴中分离出猴子的ES细胞的1998年，Thomson是从人胚中分离出成功人的ES细胞的2000年，Bongso等人是人的ES细胞株a，28，优点：外来基

5、因整合情况的控制性高。 可以在细胞水平上预测外源基因的拷贝数、定位、表达水平和插入的稳定性。 外源基因导入ES细胞的方法多种多样，便于细胞的鉴定和筛选。 a，29，缺点：难以建立和培养ES细胞系，难以保持ES细胞未分化和多向分化的潜力的个体是嵌合体，2. 4逆转录病毒感染法，逆转录病毒是第一个用于基因转移的病毒载体。目的将基因整合到逆转录病毒的RNA载体上，制成高滴度的病毒粒子，人为感染着床前或着床后的胚胎，RNA病毒感染宿主细胞后，逆转录成相应的DNA，合并酶及其末端特殊核酸序列，从而整合表达宿主细胞的基因组，将转基因动物与a，31，显微注射法比较，a，32，优点：受精卵对外来基因阳性率高的

6、外来基因的多拷贝整合操作简单，避免注射法损害卵子的宿主范围广，同时感染大量胚胎，感染率和胚胎存活率高。 a、33、缺点：收纳大小有限的重组逆转录病毒的长末端容易甲基化，影响外源基因的表达。 2. 5体核移植转基因法，近年来新出现的转基因技术。 克隆羊“多莉”的诞生是转基因动物史上的里程碑。 用培养基培养外来基因和供体细胞，将外来基因合并到供体细胞中，将供体细胞核移植到脱核的卵母细胞中重构胚，再将其移植到妊娠母体中，妊娠、产后就能得到转基因克隆动物。a、35、核移植技术，该技术是在对阿米巴原虫用微细玻璃管进行核注射的1938年，Spemann提出将核的全能性和分化后的核移植到卵母细胞的构想，Br

7、iggs和King在卵内注射青蛙胚胎细胞核，构建的重组胚胎是蝌蚪和青蛙Gurdon证实分化的核能恢复全能性的1969年，哺乳动物的核移植研究开始，a、36、1981年，Illmenser和Hoppe将小鼠胚胎内的细胞团的核移植到脱核的受精卵中，克隆了3只小鼠的1986年， Willadsen等人用未分化的胚胎细胞克隆了核移植羊，1987年Robl用胚胎细胞克隆了核移植羊，1997年Wilmut以成年羊的乳腺上皮细胞为核供体，克隆了羊Dolly。 a，37，优点：将体细胞进行基因改造后，用于核移植可以提高转基因效率，不仅具有“ES细胞途径”的所有优点，而且种子的适用面很广，不组合体育种类，可以得

8、到单纯的个体，周期短， a、38、缺点：技术难度高，成功率极低，胚胎死亡率高，无法在普通实验室开展。 2. 6人工酵母染色体(YAC )法，近年来发展起来的新型载体，具有克隆百万碱基对大片段外源DNA的能力，能保证巨大基因的完整性。 主要途径为： 胚胎干细胞进入YAC后，体外筛选，注射阳性胚胎干细胞胚腔YAC原核注射。 a，40，优点：保证大片段DNA的完整性。 保证转基因动物研究中长外因性片段的整合率提高。 目的保证基因上下游侧翼序列的完整性，可以消除或减弱基因整合后的位置效应。 用a，41，YAC媒介法制备转基因动物具有广泛的应用前景。 除了上文提到的几种常用的转基因方法之外，人们还探索了几种其他方法来适应一些特殊的需求。 例如诱变技术(P265 )，这些方法不太成熟，其应用也得到了验证。a、43、参考文献、1耿彩霞、狄冉、贮藏明星.转基因动物的制造方法和应用评述.中国畜产兽医. 2010、37(6).2汉墙、刘东军.核移植技术的发展