血糖测定-邻甲苯胺.ppt

1、a,1,血液中葡萄糖的测定 邻甲苯胺法,a,2,一、实验目的,(1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的测定方法邻甲苯胺法。,a,3,二、 实验原理,血糖及正常血糖水平:,血糖：指血液中的葡萄糖.,正常血糖浓度： 空腹波动在3.896.7mmol/L（70110mg/dl） 餐后2h内应7.8mmol/L（140mg/dl）。,a,4,糖的重要生理功能,a,5,血糖的来源、去路,a,6,a,7,a,8,高血糖症与糖尿病,、高血糖症:空腹血浆血糖（FPG）6.7 mmol/L（130mg/dl）,生理性：包括饮食性（高糖饮食）或情感性（情绪紧张，肾上腺分泌增加）,病理性：见于糖尿病；内分泌腺（甲

2、状腺、肾上腺皮质或髓质、胰岛细胞 功能亢进）；颅内压升高刺激血糖中枢；呕吐、腹泻、高热等引起的脱水。,尿糖：若血糖浓度高于肾糖阈值9.0mmol/L，出现尿糖。,a,9,糖尿病（diabetes mellitus,DM） 定义：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病，系胰岛素相对或绝对不足，或利用缺陷引起。 临床特征：血糖持续升高，甚至出现糖尿。长期患有糖尿病常有脂类、蛋白质代谢紊乱以及眼、肾的微血管病变及神经病变等并发症。严重者还可出现水、电解质紊乱及酸碱平衡紊乱，表现为高脂血症，酮症酸中毒等，重者可致死亡。,a,10,糖尿病的分类,IDDM：也称型糖尿病，好发于青春期，对胰岛素敏感。 NIDDM

3、： 型，常见于中年肥胖病人，病变在于靶细胞膜上的胰岛素受体的数目减少或者缺陷，因而对胰对胰岛素不敏感。 继发性糖尿病：如嗜铬细胞瘤、库欣病等，或其它因素。,a,11,两类原发性糖尿病的特征,特 征 1型 2型 基本病因 遗传+环境 发病机制 自身免疫性疾病 生物活性降低 占DM% 15% 85%（可发展为1型） 发病年龄 通常20岁 40岁 身体肥胖 罕见 多见 血胰岛素 （绝对不足） 或（相对不足） 病情及酮症 较重、常见 较轻、少见 治疗 胰岛素敏感 控制饮食、减肥,a,12,无机化学法 有机化学法 酶法,血糖的测定,a,13,（一）无机化学法（氧化还原法）,方法 类型 原 理 用途及备注

4、 班氏法 半定量 G+Cu+Cu2O 尿糖测定 （Benedict） 磷钼酸法 定量 G+Cu+Cu2O 历史意义 （Folin-Wu）分光 Cu+ 磷（砷）钼酸盐 操作复杂、 需制滤液、 砷钼酸法 同上 蓝色络合物 特异性差、 新铜试剂法 （660nm） 受还原物质影响 结果偏高10% 碱性高铁 同上 G+Fe(CN)6-3 Fe(CN)6-4 历史意义 氰化物法 黄色 无色 Technicon曾用,a,14,（二）有机化学法（缩合法）,方法 类型 原 理 用途及备注 邻甲苯胺 定量 G+邻甲苯胺G基胺 操作简便、 法 （630nm） 无需滤液、 特异性较高， 中小医院使 用普遍，很 少用于

5、自动,a,15,邻甲苯胺法,a,16,（三）酶 法,方法 类型 原 理 用途及备注 己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+ADP 血清尿液脑脊液、 （HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 公认参考方法 动态 GA-6-P + NADPH 操作简便，特异 终点 （340nm） 性和灵敏性均高 手工、自动化分析 葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2 推荐常规方法 化酶（POD） H2O2 + 染料有色染料 偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量 （Trinder） （4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 红色琨类化合物505nm）,a,17,方法 类型 原 理 用途及备注 葡萄糖

6、氧 定量 G+O2 GA+H2O2 与HK法有最佳 化酶氧消 电化学 用O2电极作极谱测定， 相关性 耗法 动态 求O2的消耗量 （CX3生化仪） 终点 葡萄糖脱 定量 G + NAD+GA + NADH 偶有使用 氢酶（GDH）分光 （340nm）可自动化分析 法 动态,a,18,刺血针,a,19,血糖仪,a,20,二、实验原理 葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈兰绿色，其最高吸收峰为630nm波长，颜色深浅与葡萄糖含量成正比。反应式如下:,a,21,a,22,三、实验器材 分光光度计（630nm），比色皿 计算纸（9 cm9 cm） 3

7、. 水浴锅 4. 10ml容量瓶 四、实验试剂 1. 邻甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升 2. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 3. 血清 （100ml）,a,23,血液经抗凝处理后的全部血液为全血；离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆。 如血液不经抗凝处理，让他自行凝固，则在抽血后的一段时间内，血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，血液首先凝固成一个整体，再经过一段时间或用离心机离心，血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开，这些液体称为血清。血清与血浆从表面上看似乎没有什么不同，

8、但其内在的主要区别是血清中不含纤维蛋白原，是未经抗凝处理过的血液凝固后得到的。 血清多用于血液生化、免疫等方面的测定；血浆多用于凝血等方面的测定；全血则多用在血细胞、血常规、血沉等方面的测定。,a,24,五、实验步骤 取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀（则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200，300mg ）； 混匀后，置沸水中 15分钟，立即移入冷水浴中冷却； 以0号管调零，在630nm 处比色（见下表），以各管的 吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线，并根据测定管吸光度查找含量。,a,25,a,26,标准曲线（standard curve）是指通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，而得到的性质的数值曲线。 标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。 常用标准曲线法进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。,a,27,六、注意事项 1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原性物质基本上无影响。 2. 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、冰醋酸浓度、加热时间有关。此