化学药物结构确认

1、化学药物结构确认研究的技术要求、结构实证的一般过程、通过研究方案制定的样品结构信息的获取综合分析、药物结构的分类， 一般药物手性药物中不含金属元素的有机盐类或复合物金属盐类和配合物半合成药物多形药物中含有结晶水或结晶溶剂的药物合成多肽药物和多糖类药物多成分药物以外，一般药物范围：非手性、单一结构、非多晶型的一般有机药物的研究方法：通常的方法(元素分析、紫外、红外、核磁热分析，粉末X-衍射)的注意事项：对于顺、逆异构化的药物，在证实了一般的构造的基础上，应该增加顺逆构造的研究。 手性药物、药物生物活性完全或主要来自一个对映体两个对映体具有完全相反的生物活性的一个对映体具有严重毒副作用的两个对映体

2、生物活性不同的两个对映体具有完全相同的生物活性，手性药物分类， 单一对映体药物多不对称因素药物的立体异构混合物外消旋体或浓缩对映体，单一对映体药物绝对配置的确定：直接方法：比旋度测定、手性柱色谱、核磁共振、单晶X-衍射、圆二色谱、光学色谱的间接方法：已有立体异构体混合物需要进行各立体异构体比率的实证研究，现有的实验证据和文献中报道立体异构体在药效、药代动力学或毒理等方面有明显不同或相互作用的药物，并需要测定混合物中各成分的配置和比例。 不含金属元素的有机盐类和复合物，研究要点：根据结构实证的需要，提供变成盐前后的两种光谱和实验数据在某一光谱测定上很难解释药物结构的盐和复合物，测定药物酸根和碱的

3、光谱，并与其他试验项目结合，对其结构证实有效金属盐类和配合物在对一般要求的各项进行测试的基础上，以适当的手段反映药物中金属元素的种类，认为存在形式和含量的实证实验。 对于适合或不适合检查金属盐本身的项目，可以考虑在变成盐前用酸分子或配体的相应检查结果来证实。 多形药物、同一药物的不同形式在外观、溶解度、熔点、溶出度、生物有效性等方面可能有显着差异，影响了药物的稳定性、生物利用度和疗效。 特别是难溶性固体药物。 研究要点(1)在对一般要求的各项进行测试的基础上，必须用适当的方法获取药物结晶型数据。 (2)目前，药物晶型的鉴别主要对不同晶型具有不同的理化和光谱特征。 特征性强、区分度高是选择分析方

4、法的基本要求。 (1)单晶x射线衍射中最可靠的方法；(2)粉末x射线衍射中最常用的方法；(3)辅助方法(红外吸收光谱、熔点、热分析、光学显微镜)、复制的多晶型药物；(1)明确药物的晶型和纯度必须确认产品和海外销售药品的结晶型的一致性。 合成多糖类药物，氨基酸种类和序列药物结构中存在半胱氨酸时，对于其状态(氧化状态或还原状态)含有多个半胱氨酸的多肽药物，必须明确二硫化物键的正确结合部位。 明确多成分药物、各成分的组成比例，从结构上证实影响药效和毒性的主要成分。 制作经典的提取方法和其他分离技术，如色谱，分离主要药效成分单体，可根据单体项目的要求进行化学结构的实证。 成分多、含量少、难以得到单体时

5、，可以使用在线分析技术，如气质连用、液质、质质连用、辅助成分结构的验证和定量分析。合格样品的制备，试验样品的要求纯度： 99.0%杂质含量： 0.5%样品的精制方法采用原料药制造工艺中的产品精制方法对样品进行精制。 纯度的测定是用质量标准的方法测定纯度和杂质，与样品进行对照，众所周知，药物是用不同的方法得到的。 很难得到全新的药物和对照品的药物对照品在证实结构时不需要，对照品只会降低我们结构实证研究的工作量和难易度。 元素分析主要应用确定元素组成、分子式技术要点(1)的应用，详细说明使用机器、测定方法及条件。 (2)一般需要测试c、h、n三种元素，特殊情况下需要测试s、p或卤素。 (3)需要2

6、3次并行试验数据，试验结果和理论结果的差通常要求在0.3%以内。 (4)附上测试报告书的复印件。 (5)对于个别的特殊样品，应注意结晶水、吸水或高沸点溶剂的情况。 像季铵盐类药物一样，也可以含有不同量的水和溶剂，很多情况下容易吸水。 高分辨率质谱法(HRMS )主要是在药物本身的结构特征难以进行元素分析时，在保证高纯度时可以采用高分辨率质谱法，以补充元素分析法。 实验要求：将实验结果与理论值进行比较，药物的分子离子峰值一般只允许小数点后第四位。 紫外吸收光谱主要推测了药物结构中可能包含的显色团、助色团的种类和初步连接方式。 技术要点(1)按照药典的规定方法校准和检定仪器。 (2)通常要求中性、

7、0.1NHCL、0.1NNaOH三种溶剂；(3)要求摩尔吸收系数的定量、正确的计算；(4)属于主要的吸收光谱带；(5)数据列表的说明。 红外吸收光谱主要应用于药物中可能存在的化学键、所含官能团及其初步连接方式。 提供药物几何配置、结晶型、立体配置等信息。 技术要求：按照药典规定的方法，校准和检定器选择正确的测定条件和方法：氯化钾片剂法的部分多形药物：研磨和片剂过程中结晶型发生变化膏法液体样品：液膜法、资料制作形式、仪器测定条件仪器校准和检定数据表分析、核磁共振光谱， 常用类型：氢核磁共振谱和碳核磁共振谱氢核磁共振谱：可以提供样品中的氢原子数、周围化学环境、相互关系、空间序列等信息。 技术要求、

8、技术要求(1)必须使用200MHz以上的高分辨率NMR计(2)，明确且详细地说明各测试条件。 (3)需要对分子中所有h原子进行明确的分析和归属。 (4)重要参数必须清楚地表示化学位移、耦合常数、峰形、积分面积等。 (5)重氢实验：必须对含活性氢的药物进行重氢实验，提供活性氢的存在和位置信息。 (6)NOE实验给出了某个官能团在分子中的位置、优势构象和构型。 资料制作形式、仪器溶剂、内标为原子序数结构式数据表的分析、核磁共振光谱、技术要求： (1)对各测试条件需要明确、详细的说明，如仪器型号、规格、溶剂、内标。 (2)当图像复杂时，使用质子噪声解耦合或偏谐振解耦合技术来简化图像。 (3)需要对分

9、子中的所有碳原子进行明确的分析和归属。 资料制作形式、仪器溶剂、内标分析了原子序数结构式的数据表，有碳光谱的注意事项、碳光谱信号数比实际少、原因是信号重叠、一部分季度的碳信号弱或可能隐藏在溶剂信号内的碳光谱信号数可以显示在某化合物中可能存在构象异性，可以区分其他核磁共振光谱、DEPT光谱：碳原子类型的隔着h-cosy:23键相互存在偶联的质子对信息。 HSQC (异核单量子相关光谱)将1H核与其直接连接的13C核连接。 异核多键相关光谱(HMBC )将1H核与远程耦合的13C核相关联。质量分析，主要应用：提供分子离子峰、碎片峰、丰度等信息，可以估计分子量、分子式及部分结构单元。 对于含有同位素

10、的药物，可以利用同位素簇的丰度比，估计药物中某些元素的种类、数量，以及分子式、分解方式等。 技术要求必须尽可能设法得到化合物分子的离子峰值。 如果用EI法没有出现分子离子峰，可以尝试CI、FAB、FI、FD、ESI等其他电离源。 高分辨率质谱没有反映药品的纯度和结晶水、结晶溶剂、残留溶剂。 资料制作形式、仪器测试条件数据表的分解图分析、x射线衍射、粉末x射线衍射(XRPD )主要用于(1)固体单一化合物的识别(2)结晶型确定(3)结晶和非结晶物质判定技术的要点此方法不需要制作单晶，因此实验过程更简单，但应用时粉末的细度单晶x射线衍射主要应用该方法是证实多晶型的最可靠的方法，但由于单晶的培养比较

11、困难，所以在实际操作上很困难。 热分析方法、基本原理用程序控制温度，正确记录待测物质的理化性质和温度的关系，并研究其热过程中晶型的变化、熔融、升华等物理变化和脱水、热分解、氧化、还原等化学变化。 常用方法差示扫描热量法(DSC ) :可以推测检验药的吸附水/溶剂、结晶水/溶剂及熔点等信息。 热重量法(TGA ) :可以得到药物的吸附水/溶剂、结晶水/溶剂及初始分解温度等信息。 技术要求必须包含使用机器的型号、参数设定值、升温速度、样品重量、温度范围进行说明。 供试品和对照品必须是相同的机器，在相同条件下测定。 DSC表达：纵轴为热流率，横轴为温度，气体一般为氮，流速为40ml/min。 TGA

12、表达：纵轴为重量，横轴为温度，气体一般为氮，流速为40ml/min。资料制作形式、器械测试条件图的测试结果和探讨、原料药的登记和生产现场检查、晶体溶剂差异引起的结果差异，一般没有硬规定，可适当处理。 但是，操作时请务必仔细研究样品后再进行。 同时对于贵重药物，按比例减少重量。 【结晶型】研究表明，各结晶型具有相同的表观溶解度，或者各结晶型容易溶于水，在这种情况下，各结晶型一般不影响药物的体内生物利用度，因此不需要制作。 各晶型在表观溶解度不同，即有属于低溶解性的晶型时，必须按质量标准作成晶型检查。 一般使用x射线衍射法。 有时可以用红外线识别。 观测到了2500cm-1-400cm-1波数区间

13、的8大主峰波数。 山峰之间的高低可以不同。 单独的小峰值的存在，是杂质存在的表现。 【荧光分析法】响应值不稳定，有时偏差大，不推荐。 【熔点测定法】试验结束后不要马上切断电源，要使其在室温下自然降温后再切断电源。 熔融距离越短或最终熔点越高，纯度越高。 【紫外-可见分光光度法】比色法测定时，一定要并行操作，测定时马上完成，不要等待吸收率值稳定后再记录！【旋转光度测定法】温度调节特别重要！ 首先将溶剂放入该温度水浴中，然后用该溶剂迅速制备溶液，定容后立即测定。 【氧瓶燃烧法】样品必须完全燃烧。 氧气充满，燃烧不完的情况下，把样品量减半，然后的测定使浓度再增加2倍即可。 建议制备【溶液的澄清度和颜

14、色、氯化物、硫酸盐、重金属检测等】梯度对照液，可以对样品进行全面、综合的分析。 【灼热残渣检查法】灼热后，放置在干燥器内的时间必须在1小时以上。 不那样的话，重量会变得不稳定。 【干燥减量和水分】，(1)缓慢分解的物质，难以采用常数重，规定时间。一般的105、3小时一定可以！ (2)带结晶水的药物尽量用卡诺法测定。 残留溶剂的研究思路、研究原则：合成过程中使用的有机溶剂必须建立测定方法并研究测定。 观测样品测定结果：申报3批样品测定结果，说明过程的稳定性。 质量标准制定原则：除第一类溶剂外，不制定“未检测的溶剂”，只制定最后的再结晶溶剂。 测定方法：根据检测结果，质量标准的方法与研究时的方法完

15、全不同。 品质标准的制定原则：只要只剩下再结晶溶剂，且低沸点(乙醇、丙酮等)，完全可以用105干燥减量法代替。 由此，省略脱气相测定，适当减轻干燥减量。 应用高效液相色谱时经常出现的问题，柱温箱必须制备。 建议试验温度为30-50。 清洗温度可以比试验温度5高。 柱清洗：正相，实验结束时用流动相再清洗30分钟即可。 关于反相，只要流动相不使用单纯的甲醇/乙腈水，其他所有的流动相用纯水洗涤30分钟(流速1.0ml/min )，再用20%甲醇洗涤30分钟，然后取下，密封两端即可。 决不推荐，液相色谱：为了节约乙腈/甲醇，不推荐使用两个泵，分别注入混合水和有机相的方式(即使配置脱气机)。 两相成比例

16、混合后，必须脱气过滤，用泵注入。 过滤膜必须采用混相膜。 正相流动相不需要过滤、均匀混合后的超声波。 应用高效液相色谱时经常出现的问题是梯度溶出时最理想的方式： a相高比例的水相是b相低比例的水相比低比例的有机相高比例的有机相，其次a相高比例的水相比低比例的有机相b相都是有机相。 绝对不要提出a相纯水相、b相纯有机相。 即使质量标准如此制定，如果采用一次函数，将其转换为第二种情况，也容易出现基线动而无法正确积分的现象。 应用高效液相色谱时经常出现的问题是，梯度溶出时，必须先测定空白溶剂峰，基线平稳，溶剂峰先出现。 确认柱内的清洗干净后，再测量样品。 在检测有关物质时确保杂质的正确测定。 应用H

17、PLC时经常出现的问题是，测定HPLC的含量，(1)对2份对照品溶液(粉末2份)各采样3针，计算校正因子f=C/A，然后计算f的RSD，低于2.0%，对照品溶液2份的调制没有错误，装置稳定取f平均的样品。 (2)样品溶液也调制2份，每样品1针，含量的差在2.0%以内即可。 药理毒理资料药理毒理资料：(3)继承了原来的方法是内标准法，药审中心提出的“仿制品不是仿造标准”的理念，除了必须改变为外标准法的预处理非常复杂容易损失的情况外。 含量的测定浓度和色谱条件如何确立浓度，不能与有关物质浓度一致，一般为1/101/50。 容易过滤(对制剂)，杂质干扰少，积分正确。 色谱条件可能与有关物质不一致(如

18、有关物质梯度溶出或保持时间长)，具有科学化、人情味。 波长不是最大吸收波长，还可以选择末端吸收。 薄层色谱法测定有关物质，(1)尽量使用商品化的薄层片材，不建议自己制作。 (2)设置坡度对照(1.0%、0.5%、0.2%、0.1% )，以样品量实现，方便快速，能工作(3)在不出现0.1%的斑点的情况下，增大光点尺寸。 (4)主要斑点为过载，如“折断腰”，可以适当减少点的样品量。 (5)显色剂尽量调制得新鲜。 用高效液相色谱法测定有关物质时，(1)每批样品调制一份即可。 (2)同时检查多批样品时，选择粉末量最少的样品稀释到自对照溶液中即可，绝对不需要按每个样品稀释到自对照溶液中。 (3)连续采样3针溶液，计算主峰面积的RSD，小于2.0%时，认为装置稳定，积分无误。取峰面积的平均，用于样品杂质峰的比较。 用HPLC测定有关物质，(4)空白溶剂的测定(梯度溶出时必须先测定) (5)每个样品取1根样品，积分杂质峰值。 积分时的注意事项：最小峰面积：对照溶液主峰面积的1/10-1/50的斜率和峰宽：设定为与对照溶