实验5 微生物大小及数量测定

1、CentralLaboratoryofBiology，实验5微生物大小和数量测定，微生物学实验，课前提问和目的要求，课前提问，1 .千分尺测定微生物大小的原理是什么？ 2 .测量过程中应注意的问题是什么？ 【目的】，1 .学习和掌握使用千分尺测量微生物大小的方法。 2 .掌握分类学对不同形态细菌细胞大小测定的基本要求，加强对微生物细胞大小的感性认识。【基本原理】微生物细胞的大小是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。 那个测量工具有目镜测量千分尺和载物台测量千分尺。 载物台测量微标尺是在中央部分刻有标准标尺的载玻片，其标尺全长为1mm，准确地分为10个大格，各大格再分为10个小格，共计

2、100个小格，一个小格的长度为0.01mm，即10m 图5-1载物台测微仪的中央部和载物台测微仪是可以校正目镜测微仪放入目镜的圆形小玻璃板，其中央有准确的等分刻度，通常分为50小格和100小格。 测量时，放在目镜中的隔板上，用显微镜测量放大的细胞像。 由于放大率根据显微镜、目镜和物镜的组合而不同，因此目镜的千分尺在每个单元中以不同条件代表的实际长度也不同。 【基本原理】、【实验用品】，1 .菌种：黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、迂回菌的染色玻璃标本。 2 .试剂：香沥青、二甲苯。 3 .仪器和其他用品：载物台测微仪、目镜测微仪、普通光学显微镜、镜纸擦拭等。 (方法步骤)，目镜测量微标尺的安装校正目

3、镜测量微标尺菌体的大小的测量完成.1 )使用载物台测量微标尺进行校正的情况下，暂时无法直接找到测量微标尺的情况下，是否将焦点对准标尺外的圆圈？ 2 )细菌的个体很微小，测定细胞大小时，为了减少误差，一般尽量使用油镜。 3 )细菌根据生长时期的不同，细胞的大小会有很大的变化，所以如果需要自己测定细菌细胞的大小，要注意选择处于对数生长长期的菌体细胞材料。 获得了本实验成功的关键。 【注意事项】、1 .目镜的千分尺轻且薄，在取出放入时请注意不要掉落破损。 2 .观察时光不能太强。 否则，在更换很难找到载物台微刻度的高倍镜和油镜时，请小心不要让物镜按下载物台微刻度，或损伤镜头。 【实验报告】，1 .结

4、果1 )目镜测量千分尺的校正结果填写表5-1，目镜测量千分尺的校正结果填写表5-2。 注：球菌用直径(宽度)表示细胞的大小，杆菌和螺旋菌用宽度的长度表示细胞的大小。 表5-2金黄色葡萄球菌的大小测定记录，【实验报告】、3 )用表5-3计算并表现各菌的测定结果。 注：球菌用直径(宽度)表示细胞的大小，杆菌和螺旋菌用宽度的长度表示细胞的大小。 【实验报告】、2 .思考问题1 )为什么在更换不同倍率的目镜或物镜的情况下，需要用载物台测量微计重新校正目镜测量微计呢？ 2 )在不改变目镜和目镜的微尺度的情况下，使用不同倍率的物镜测量相同细菌的大小的情况下，其测量结果是否相同？ 为什么？【实验报告】、用第

5、二部分显微镜直接计数法测定微生物数量【课前提问】，1 .血球计数板的基本原理是什么？ 2 .显微镜直接计数法的优点和缺点是什么？【目的要求】，1 .明确显微镜计数的原理2 .学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。【基本原理】，血球计数板是特制的载玻片，上面有4条沟构成了3个平台。 中央宽敞的平台被横沟分成两部分，每个平台上刻有格子，各格子共分9个格子，中央格子为计数室。计数室的刻度一般有两个规格，一个大斗分成25个斗，各斗进一步分成16个斗(图5-2 )。 另一个是，一个格被分成16个格，一个格被分成25个格，但是无论是什么尺寸的计数板，一个格的格都是400个。 各方格的边长为1mm，各方格

6、的面积为1mm2，盖上玻璃罩后，玻璃罩与载玻片之间的高度为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm3(10-4mL )。 以25个中耳眼的计数板为例，设5个中耳眼中的总菌数为a，菌液稀释倍数为b :25104B，1mL菌液中的总菌数=，图5-2血球计数板侧面和两种计数室，【基本原理】，图5-2血球计数板，【实验用品】，菌种：酵母菌种悬浊液。 仪表及其他：普通光学显微镜、血球计数板、玻璃罩、擦镜纸、酒精灯、无菌毛细管、三角烧瓶。 【方法步骤】、菌悬浊液调制检查血球计数板和样品显微镜计数清洗，得到了本实验成功的关键，1 )由于生细胞是透明的，在进行显微镜计数时，必须适当降低视野的亮度，提高对比度。 2 )进行显微计数时，首先，在低倍镜下查找大方格的位置，找到计数室移动到视野的中央，交换高倍镜的观察和计数。 【注意事项】，1 )使用酒精灯时，要注意不要被火焰烧伤，或被衣服烧伤。 2 )放过微生物培养物的接种环，在回到实验台之前，要记住再次在火焰上燃烧灭菌，以免实验台被污染。 3 )用接种环向培养基斜面刮取时的动作很轻，请勿将琼脂培养基一起刮上来。【实验报告】，1 .结果：表5-4显微计数结果，2 .思考问题1 )根据你的体会，用血球计数板计数的误差主要