ImageLab中文操作手册

1、图像实验室中文操作手册快速可靠分子成像仪Chemi docxrs、分子成像仪gel docxr和Criterion Stain FreeTM成像系统使用Image Lab自动图像采集和分析软件，可应用于凝胶电泳和转印膜的数字成像和分析，而自动工作流程可加快图像采集步骤和参数优化，并系统分析调整后的凝胶或转印膜图像，以获得所需的分析数据结果。一、软件操作界面启动向导程序桌面主窗口工具栏分析工具栏状态列1.主窗口工具栏档案管理分析数据结果数据2.显示工具栏将3D转换成图案图像明暗转换更改图像颜色全窗尺寸放大狭窄的图像显示设置图片信息3.分析工具栏(1)图像工具(图像工具)(2)车道和带状工具(3)

2、分子量工具(分子量)(4)自动定量工具(5)注释工具(注释工具)(6)手动定量工具(体积工具)第二，利用图像实验室软件获得化学发光图像1.建立图像采集程序：在凝胶成像对话框中选择化学应用程序(1)从“成像区域”对话框的下拉菜单中选择适当的样本大小(可选，但您可以稍后通过定位凝胶选择)(2)选择图像曝光方法，该方法可以手动评估曝光时间并手动设置，或者使用信号累积模式(SAM)进行操作。建立化学发光程序最困难的任务是确定图像曝光，因为你想得到一个图像，充分利用相机的大动态范围。图像曝光时间过短可能会使高于胶片背景的微弱信号无法识别；过多的图像曝光时间会使某些波段饱和(也就是说，超出了相机准确报告信

3、号的能力)。如果这是您第一次使用化学计量XRS分析化学发光样品，您需要在使用手动控制或信号累积模式(SAM)之前确定适当的成像时间范围。获取此信息的最佳方法是获得相对较短的手动曝光时间，并使用图像实验室中的工具来估计最佳曝光时间。2.手控曝光(1)选择手动设置曝光时间，并在倒计时框中输入10秒。(2)选择高饱和像素。(3)将胶水放在变速箱的中央。(4)单击程序窗口中的按钮。(5)在显示器上观察样品的实时图像，打开涂胶系统的门并移动样品，直到其位于视野的中心区域。(6)摄像机的变焦滑块可用于调整成像区域的大小。(7)选择按钮获取您的第一个图像。如果所需图像出现在计算机显示屏上，确认图像是否包含红

4、色饱和区域。如果有饱和区域，请用较短的曝光时间再次获得图像。如果没有饱和区域，请将鼠标移到最暗的条带上，并在图像实验室窗口的右下角观察信号强度。如图所示，强度为1994，这是摄像机能记录的最大值的三分之一(最大值为65，535)。使用前10秒曝光时间，乘以30，在相机最大动态范围附近成像。如果您只需要评估单个图像的成像时间，您可以在手动曝光区域直接输入300。3.信号累积模式如果估算方法对您的目的而言不够准确，请选择SAM按钮并按下设置按钮。将弹出一个新对话框，其中包含可以输入细分成像时间的字段。在本例中，我们输入的估计曝光时间小于或大于我们最初的300秒，因为我们有理由相信准确的成像时间将在

5、这些时间内。我们总共想要五张图片，据推测其中一张将非常接近最佳图片。对话框中会出现您的SAM设置的图像。在SAM设置的图像显示对话框窗口中，选择后点击按钮，该窗口将显示相关的进度图标，解释整个图像采集时间。在250秒内获得第一个图像，一个小缩略图将出现在窗口底部，依此类推。整个过程将一直持续到所有的图像都被采集到。像以前一样，您可以通过在图像上移动鼠标来确定强度值。您也可以使用位于程序窗口左侧的“图像变换”窗口中的调整划线来更改图像的外观。您可以通过在SAM程序中的任意位置单击缩略图来查看图像。如果确定图像已调整到符合您的要求，请单击按钮丢弃其他不合适的图像，以完成图像采集过程。您还可以在SA

6、M图像采集期间或之后保存所有需要的图像，并且您可以通过直接单击单点缩略图窗口中的图像来保存它们。在决定采集图像的数量时，请记住增加SAM图像将导致背景信号的平均化。当获得更多图像时，背景强度水平附近的弱信号将变得难以识别。如果识别最弱的信号很重要，我们建议在正确的时间获得单个图像。第三，建立全自动图像采集和分析程序(创建协议)1.启动分析向导窗口-步骤1。凝胶成像(1)根据应用选择应用(核酸/蛋白质/印迹)(2)选择成像区域(3)选择图像曝光时间(4)选择显示选项，高亮显示饱和像素和图像颜色2.自动分析图像-步骤2。检测车道和波段设置检测通道和带的参数(低频带检测灵敏度(低灵敏度=25)，高频

7、带检测灵敏度(高灵敏度=75)或自己设置灵敏度。3.分析分子量-步骤3。分析分子量设置分析分子量设置的分子量标准类型，所有种类的Bio-Rad标准(包括核酸和蛋白质)都已预先存储。当然，你也可以根据你的实验设定自己的分子量标准。同时设定了分子量标准的泳道和回归模式。4.报告设置-步骤4。指定报告的内容5.结果概述和报告(1)数据显示信息(显示数据)(2)分析表选项(3)车道轮廓(4)标准曲线第四，建立图像分析程序(创建图像分析协议)1.图像分析(分析图像)(1)分析工具分析工具箱自动分析单击进入检测设置窗口设置检测通道和带的参数(低频带检测灵敏度(低灵敏度=25)，高频带检测灵敏度(高灵敏度=

8、75)或自己设置灵敏度)。然后设置分子量分析设置的分子量标准、标准泳道和回归方法参数。2.图像工具(图像工具)它可以水平或垂直旋转，左右旋转90度，也可以自由旋转、裁剪、翻转和合并。3.车道和带状工具(车道和带状工具)(1)车道标签使用自动或手动搜索通道功能调整所有车道的参数，如调整大小、调整和删除。(b)调整车道(单线)的参数，如添加、弯曲、移动、宽度和删除。(c)使用车道背景减法来扣除背景值，并单击(应用于所选车道)来调整单个车道。-背景值可以通过设置滚动盘参数(1-99毫米)来移除。(2)波段选项卡通过检测波段自动搜索波段或手动调整参数，如添加、删除和调整。4.分子量分析工具该工具可以根

9、据已知标准计算相对分子量或碱基对。5.定量工具(数量工具)(1)相对数量标签从图像中选择已知的参考带及其浓度(用绿色r表示)，从分析表中可以观察到分析结果。(2)绝对数量标签目标谱带的绝对浓度可以通过选择具有已知标准浓度的谱带(至少两个，用r表示)并设置适当的回归参数来计算标准曲线(回归参数如线性(更常用)、点到点或三次样条)来计算。回归方法标准波段的最小数量带强制通过选项的最小数量线性的21点对点21三次样条546.注释工具(注释工具)您可以通过添加注释工具添加文本注释和箭头注释，并调整注释的相对位置(对齐)、文本属性、颜色、旋转方向和其他参数欢迎下载7.定量工具(体积工具)按选择一个更合适的谱带类型，选择定量分析的谱带位置，在谱带上点击左键两次，将样品定义为标准样品、未知样品或背景空白，分别定义它们的定量基础(如kb、ppm、mg/ml、)。建议使用矩形工具正方形，首先框定适当的正方形，然后通过复制来框定分析的带(按住Ctrl键/要复制，或按住Ctrl键复制/按