T∕ZZB 1406-2019 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌

1、ICS 65.120 B 46 T/ZZB 14062019饲料微生物添加剂农杆菌microorganismfeedadditive-bacilluslicheniformis 2019-12-06团体标准浙江省品牌建设联合会发表2019 - 12 - 31 ZZB 12062019 I现在的前言.II 1的范围。.用于1.3 词语和定义，词语和定义，词语和定义。.检查规则，检查规则，检查规则. 6 8标签，包装， 运输和储藏，7.9质量的约定 _ .7附录a (资料性附录)8t/zzb 120620199 ii前言本标准是根据GB/T 1.12009规定的规则起草的。 本标准的部分内容可能包

2、含专利，本标准的公布机构不负责识别这些专利。 本标准由浙江省品牌建设联合会提交，进行出口管理。 本标准由浙江省标准化研究院主导制定。 本标准主要起草单位：浙江惠嘉生物科技股份有限公司。 本标准参与起草单位：中国计量大学、浙江省标准化研究院(排名前后)。 本标准主要起草人：刘金松、杨彩梅、曹广添、曾新福、胡玉华、李慧、张玲玲玲、邛洪生、吕晓思。 本标准审查专家长：廖上富。 本标准由浙江省标准化研究院解释。 T/ZZB 12062019 1饲料微生物添加剂农杆菌1的范围本标准规定了饲料微生物添加剂农杆菌的术语和定义、基本要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和储藏、质量承诺等内容。

3、本标准适用于固体和液态芽孢杆菌饲料添加剂。 2正规的引用文件以下文件在本文件的应用中不可或缺。 订单日期的参考文件只有订单日期的版本适用于该文件。 与日期无关的参考文件的最新版本(包括所有变更单)适用于此文件。 GB/T 191包装储藏图表示GB 4789.5食品安全国家标准食品微生物学检查志贺氏菌检查GB 4789.10食品安全国家标准食品微生物学检查黄色葡萄球菌检查GB/T 5917. 1饲料粉碎粒度测定法2层筛分法GB/T 6435饲料中的水分的测定GB 10648饲料标签GB/T 13079饲料中的总砷的测定GB/T 13080饲料中铅的测定原子吸收法GB/T 13081饲料中汞的测定

4、方法GB/T 13082饲料中镉的测定方法GB/T 13091饲料中沙门菌的测定GB/T 13092饲料中的霉菌检测方法GB/T 14699. 1饲料采样GB T 17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶免疫吸附法GB/T 18869饲料中大肠菌群的测定GB 19541饲料原料豆粕GB/T 23530酵母提取物NY/T 119饲料用小麦面筋NY/T 1444微生物饲料添加剂技术通则NY/T 1461饲料微生物添加剂地衣芽孢杆菌国家质量监督检查检疫总局第75号定量包装商品计量监督管理方法3用语和NY/T 1461定义用语和定义适用于本文件。 4基本要求T/ZZB 12062019 2 4.1设计开

5、发4.1.1必须自主选育菌种，具备优化发酵过程的设计开发能力。 4.1.2省级以上或具有同等能力的研发团队。 4.2原辅料4.2.1豆粕应满足GB 19541中一级品以上的要求。4.2.2酵母提取物应满足GB/T 23530中纯品型的要求。 4.2.3面筋应满足NY/T 119二级品以上的要求。 4.3技术装备应采用4.3.1液体发酵和喷雾干燥的技术。 4.3.2必须具备发酵后的处理、喷雾干燥、振动筛和包装环节的自动生产线。 液体发酵必须采用自动控制系统(DCS )。 4.4检验应具备对芽孢杆菌含量、水分、粒度、重金属、总砷、微生物等项目的检验能力。 5技术要求5.1微生物指标5.1.1菌体形

6、态5.1.1.1染色：革兰氏染色为阳性。 5.1.1.2形态特征：菌体细胞(营养体)为直棒状，单一、对或短链序列，大小为(0.60.8)m (1.53.0)m，两端钝圆。 芽胞，芽胞接近椭圆形，中生，大小0.8 m1.3 m，具有稀疏的全身鞭毛，能运动。 孢子囊并不庞大，内生孢子释放后，孢子壳并不在很多地方破裂。 5.1.2菌落形态5.1.2.1 LB营养琼脂培养基(Luria-Bertani Agar，LB ) :菌落呈灰白色或乳白色、圆形或花瓣形。 5.1.2.2营养琼脂培养基(Nutrients Agar，NA ) :蚁群为杏白色，湿润光泽，表面稍有放射状条纹。 5.1.2.3圣诞老人琼

7、脂培养基(Sautons Agar，SA ) :菌落呈乳脂肪色，湿润有光泽，不透明，中央隆起。 5.1.2.4牛肉浸出培养基(Beef extract Agar ) :菌落为乳脂色，湿润光泽，不透明，长边缘毛。 5.1.3细胞壁化学T/ZZB 12062019 3细胞壁水解液含有中氨基庚二酸(meso-DAP )和甘氨酸，无特征的糖(糖型c )为细胞壁型。 5.1.4生理生化特征地衣芽胞杆菌的生理生化特征应满足表1的要求。 表1生理生化特征的结果特征结果明胶液化生长温度范围15 55淀粉水解柠檬酸盐硝酸盐还原苯丙氨酸脱氨0.001%溶菌酶生长酪蛋白分解7% NaCl酪氨酸分解pH 5.58.7

8、生长牛奶凝固厌氧洋菜生长牛奶胨化V - P试验糖产酸葡萄糖蛋黄反应阿拉5.2官能指标产品的性状分为固态和液态两种，应与包装上标明的产品固有的形状、色调和气味等相符，均匀度、杂志等无异味，无霉菌变质，无异物。 5.3理化指标理化指标应满足表2的要求。 表2理化指标项目指标水分(固体菌剂)、% 9.0粒度(固体菌剂，孔径850 m试验筛通过率)、% 95.0芽胞杆菌菌数、cfu/(g或mL) 1.010 11 5.4卫生指标卫生指标应满足表3的要求。 表3卫生指标项目指标黄曲霉毒素B1、g/kg 10.0砷(用As计算)的容许量、mg/kg 2.0 T/ZZB 12062019 4表3 (续)项目

9、指标铅(用Pb计算)的容许量、mg/kg 5.0水银(用Hg计算)的容许量、mg/kg 0.1镉kg 0.5杂菌率、% 0.1霉菌总数的容许量、cfu/(g或mL) 2.010 4大肠菌群的容许量、cfu/(100 g或100 mL) 400沙门氏菌不可检测出志贺氏菌的黄色葡萄球菌不可检测出5.5净含量的容许范围是原国家质量监督检查检疫6试验方法6.1样品按照GB/T 14699. 1的规定进行了样品的采集。 在取样时要特别注意样品的代表性和避免取样时的污染. 首先准备灭菌容器和取样工具，如灭菌牛皮纸包、广口瓶、金属勺子和刀子。 应该根据卫生学调查，采集代表性样品，样品采集后立即进行检查。 6

10、.2官能检查取适量样品(固体250 g，液体250 mL )，用无色玻璃进行官能检查，观察、闻或接触。 6.3水分测定按GB/T 6435规定执行。 6.4粒度检查(固体菌剂)按GB/T 5917. 1规定执行。6.5用农杆菌进行6.5.1菌体形态检查：6.5.1.1染色：革兰氏染色和芽胞染色。 6.5.1.2形态检查：用营养琼脂在30条件下培养48小时后，在无菌环境下采集菌体涂膜进行染色，用光学显微镜观察菌体形态。 6.5.2菌落特性检测：在LB营养琼脂、营养琼脂、山楂琼脂和牛肉浸出琼脂平板上，30培养48小时后，观察菌落的颜色、形态和色素等。 T/ZZB 12062019 5 6.5.3生

11、理生化特征检测：参照bergeysmannualofsystematicbacterologyvol.ii和常见细菌系统鉴定手册的相关内容进行。 6.5.4采用生菌数6.5.4.1稀释反平板法。 用10倍稀释法制备不同浓度的稀释液，从稀释液中分别取出一定体积，放入无菌培养皿，每稀释度重复3次。 将事先溶解冷却到50左右的营养琼脂培养基放入各培养皿中约12 mL，摇动、凝固后倒置培养24小时，进行菌落计数。 6.5.4.2每培养后的稀释度采集10个菌落的菌体，染色，用显微镜识别。 6.5.4.3选择适当的稀释度，菌落用30个300个之间的平板计数。 6.5.4.4计算公式为(1)、(2):()

12、() () () ml1mlmlcfu/g接种量的计算方法和菌剂母液菌悬浊液体积稀释倍数菌落平均、农杆菌=.(1) () 100% =杂菌数目标生菌数杂菌率. (2) 6.6卫生检查6.6.1曲霉B1检查按GB/T 17480规定执行。 6.6.2砷含量的测定按GB/T 13079规定实施。 6.6.3铅含量的测定按GB/T 13080规定实施。 6.6.4水银含量的测定按照GB/T 13081规定实施。 6.6.5镉含量的测定按GB/T 13082规定实施。 6.6.6霉菌检查按GB/T 13092规定实施。 6.6.7大肠菌群的检查按GB/T 18869规定执行。 6.6.8沙门氏菌的检查

13、按照GB/T 13091规定执行。 6.6.9志贺氏菌检查T/ZZB 12062019 6按GB 4789. 5规定执行。 6.6.10金黄色葡萄球菌的检测按GB 4789. 10规定实施。 6.7净含量容差由原国家质量监督检查检疫总局第75号命令执行。 7检查规则7.1检查分类7.1.1检查类型分为出厂检查和型号检查。 7.1.2出货检查出货检查项目如表4所示。 表4检查项目编号检查项目检查类型技术要求试验方法出货检查类型检查1微生物指标- 5.1 6.5.1、6.5.2， 6.5.3 2官能指标5.2 6.2 3水分5.3.3粒度5.3.4农杆菌生菌数5.3.5.4杂菌率5.4 6.5.4 7黄曲霉素B1 - 5.4 6.6.1 8砷(As) 5.4 6.6.2 9铅(Pb )5.4.6.6. 6 5.4 6.6.4 11镉(Cd) 5.4 6.6.5 12霉菌总数5.4 6.6.6 13大肠菌群5.5 6.7沙门氏菌-5.4.6.8志贺氏菌- 5.4 6.6.9 16黄色葡萄球菌- 5.4 6.6.10 17净含量允许差5.56. 6 7.1.3型号检查T/ZZB 12062019 7一般企业半年进行一次型号检查，型号检查项目如表4所示。 但是，有以下任一情况时，应进行型号检