分子生物学RTPCR.ppt_第1页
分子生物学RTPCR.ppt_第2页
分子生物学RTPCR.ppt_第3页
分子生物学RTPCR.ppt_第4页
分子生物学RTPCR.ppt_第5页
已阅读5页，还剩7页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、，第二部分，RT-PCR的原理，方法和琼脂糖凝胶电泳结果分析，RT-PCR技术背景，(1)基因表达，(2)PCR技术，变性退火扩展，(三唑l萃取总RNA 1，细胞1107或组织100毫克，1mlTRIzol(细胞用1ml开颅器吹进液体净化，细胞质均匀化后移至EP管)10次翻转后室温5分钟。 2，氯仿1/5卷(0.2毫升)，10倒置混合，室温5分钟。3，4，离心12000g，15分钟。4、在其他1.5mlEP管中加入上层水(约400l)，将室温混合10分钟。5，4，离心12000g，10分钟。6、废弃，冰预冷乙醇75% 1毫升(使用DEPC水)。7，4离心7500g，5分钟。8、常挂，空气干燥5

2、-10分钟(不能完全干燥)，在DEPC水中20l (55-60数，可辅助10分钟)。9、紫外分光光度法测定总RNA浓度。RT-PCR实验阶段反转录(RT)，反转录反应：1，RNA 1-5g，将适量的DEPC水混合到11lOligo(dT)15 1l，离心，70 10分钟。2，立即冰池。10x PCR buffer 2l 25mm MGC L2 2l 10mm dntp mix 1l 0.1m dtt 2l混合，离心，42 50min。3，95 10分钟(MLV破坏，反应终止)，4保存。RT-PCR实验阶段聚合酶链反应(PCR)，PCR反应：反应系统：总体积20l(50l)试剂浓度体积Taq Buffer 10 (5l_) dNTP 10mM (0.5l)上游底漆影像系统影像分析。琼脂糖凝胶电泳结果显示，DNA分子中含有磷酸盐和碱，在生理条件下，羟基在磷酸盐中分解，因此DNA带有负电，从电场转移到两极

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论