细胞工程_动物细胞工程

1、动物细胞工程，主题2细胞工程，动物细胞培养，动物细胞融合，单克隆抗体准备，动物体细胞核移植技术和克隆动物，1，PPT学习交换，动物细胞培养，动物细胞融合，单克隆抗体技术，核移植，动物细胞工程共同技术，2，原则：细胞增殖，4，PPT学习交流，定义：人们通常把动物组织消化后的早期培养称为初级培养。胰蛋白酶处理，切除组织、胚胎或年轻动物器官，将其分散成单个细胞，转移到细胞悬浮，培养瓶内培养(附着生长，成长为单层细胞)。存在接触抑制现象)。原代培养，3，课程，图标，原代培养，5，PPT学习交流，1:细胞附着过程，细胞附着：培养瓶悬浮液中分散的细胞很快就会附着在瓶壁上，细胞附着。培养瓶或培养皿壁要求：表

2、面光滑，无毒，附着方便。6、PPT学习课程，附着细胞分裂成长为表面相互接触，细胞停止分裂和增殖，这种现象称为抑制细胞接触。2:抑制接触，7，PPT学习交流，定义：原代培养细胞抑制接触后，用胰蛋白酶处理从瓶壁分离细胞，添加新培养液，稀释细胞，从原培养瓶转移到新培养瓶的过程为继代培养(瓶培养过程)，继代培养，8，PPT学习交流重点：细胞株，细胞株(据了解，是旧的教科书体系)，细胞株：继50岁以后不能再传递了，一些细胞遗传物质发生变化，可以连续传递，确保不死性，被称为细胞株。9，PPT学习交换，3，摘要：动物细胞培养过程，动物胚胎或幼小动物的组织，器官，构成细胞悬浮，切割胰蛋白酶处理，10代细胞，转

3、移到培养瓶，40-50代细胞，继代培养，无限系，系10-50代左右，部分核型可能会改变(遗传物质可能会改变)，为什么要用胰蛋白酶处理？分瓶培养，原代培养特征：附着细胞，抑制接触，持续传代培养少细胞不灭性，细胞突变，遗传物质变化，与癌细胞相同。细胞株：一般遗传物质没有变化细胞株：遗传物质发生变化，原代培养，10，PPT学习交流，4。动物细胞培养条件：1)无菌无毒环境：适宜温度：人和哺乳动物细胞的最佳温度为36.50.5。合适的ph: 7.2-7.4，液体合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、水、无机盐、微量元素等；还必须添加血浆、血清和其他天然成分。4)气体环境：2)营养：3)温度和ph:， 95空

4、气5CO2 混合气体培养箱。细胞代谢需要氧气。CO2维持培养液的PH值。培养液和所有培养物的无菌处理；在培养液中添加抗生素以防止培养过程中污染。定期更换培养液，去除代斯产物，避免伤害培养细胞。11，PPT学习交流，问题3:为什么处理胰蛋白酶？问题1，为什么选择动物胚胎或幼小个体的器官、组织作为动物细胞培养物？因为细胞生命力旺盛，分裂力强，分化度低。问题2，为什么在培养前将组织细胞分散为单个细胞？扩大细胞和培养液的接触面积，李和细胞吸收营养。，动物组织细胞间隙包含一定数量的弹性纤维等蛋白质，胰蛋白酶处理动物组织，通过酶水解动物组织细胞间蛋白和细胞外其他成分，可以获得单个细胞。问题4:为什么用胰蛋

5、白酶代替胃蛋白酶处理？动物细胞培养的最佳PH值为7.2-7.4，适合胰蛋白酶效果的PH值为7.2-8.4，胃蛋白酶适合PH，胃蛋白酶在PH值为7.2-7.4的动物细胞培养中不活跃。问题5:胰蛋白酶处理不会消化培养的细胞吗？控制时间！长时间处理当然会损伤细胞。第12，PPT学习交流，问题6，动物细胞培养液的主要成分是？什么比植物组织培养培养基更独特？问题7，动物细胞培养像绿色植物组织培养一样，最终能培养成新的个体吗？主要成分： (葡萄糖，氨基酸)，(水，无机盐)，维生素和动物血清等。1、液体培养基2、动物血清的成分等是独特的。不，动物细胞培养不能发展成新的动物对象，只增加细胞数量。问题8，动物细

6、胞培养原理：细胞增殖。问题9，目前使用或董洁保存的正常细胞通常在10代以内，为什么？第10代内的细胞遗传物质保持不变，维持正常的二倍体核型。13，PPT学习交换，5，动物细胞培养技术的应用：1，病毒疫苗，干扰素，单克隆抗体2等蛋白质生物产品的生产，主要用于基因工程的受体细胞3，毒性物质的检测，特定物质的毒性4，细胞的生理，药理学和病理学研究，抗癌药物筛选检查，3，分类：胚胎细胞核移植，体细胞核移植。胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性比较容易。动物体细胞的分化程度高，所以复原很困难。2，原则：动物细胞核具有完全性，16，PPT学习通讯，4，体核移植过程是动物克隆无性生殖，1)克隆羊多利种植过程：不

7、同数量的子宫，特别是注意事项：克隆动物特性与捐赠者动物完全相同吗？不可能！第一，捐赠者只提供细胞核，线粒体DNA等细胞质遗传物质来自受体卵母细胞。第二，生物特性不仅受到遗传物质的影响，还受到环境的影响。捐赠者，受体，代孕受体，17，PPT学习交流，1，ab代表的细胞工程名称填写：a表示：b表示：2，在细胞工程执行中，必需的受体细胞大部分使用卵母细胞的原因：体积大，易于操作。含有使核表达其全盛性的物质和营养条件。3，多莉脸毛色根据遗传学原理说明判断依据。4，如果黑棉羊的基因型为aa，白棉羊的基因型为AA，那么克隆羊的基因型为核移植，胚胎移植，白，多莉的所有核基因都来自白棉羊。aa，18，PPT学

8、习交流法，用10代以内的细胞代替捐赠者细胞。为什么？使用去核减数第二次分裂中期细胞(m中期)为什么？激活方法：激活目的：激活方法：电刺激，将胚胎移植到代孕妈妈，怀孕，分娩，2)核移植过程，捐赠者：高质量高产奶牛，受体：普通奶牛(卵母细胞采集和培养)，1。体积大，操作容易。2.含有使核表达其可塑性的物质和营养条件。有人说是三个妈妈，对吧？19，PPT学习交换，核移植过程：1，捐赠者细胞收集和培养，5，以物理或化学方法激活受体细胞完成减数分裂过程。6，电刺激促进将供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎。，4，向细胞核卵母细胞注入供体细胞，3，去除细胞核的显微手术，2，受体卵母细胞收集和体外培养，7，

9、将胚胎移植到代理母细胞，8，妊娠分娩和供体遗传物质基础相同的犊牛。20，PPT学习交流，4，体核移植技术的应用前景，21，PPT学习交流，广为人知：您还在为身体障碍而烦恼吗？你还感到不安吗，因为器官移植找不到合适的工作？如果再这样下去的话，看看我们的体核移植技术。从你身上取出小的体细胞，通过核移植培养胚胎干细胞，诱导胚胎干细胞，分化各种组织器官就可以了。这种器官的组织相容性抗原和你的完全一样。如果把器官移植到这样的器官上，完全不会发生免疫排斥。如果这项技术研究已经成熟，可以说以后全部换胳膊和腿就像换汽车的轮胎一样。听懂了吗？这不是幻想，巨大的前景就在眼前，你在等什么？快加入生命科学研究吧！22

10、、PPT学习交流、23、PPT学习交流、5。体细胞核移植技术的问题，书P49-50页，24，PPT学习交流，动物细胞融合和单克隆抗体，25，PPT学习交换，动物细胞融合，所学知识回顾，你看过动物细胞融合的例子吗？人类鼠细胞融合实验，26，PPT学习交流，1，定义：也指细胞杂交，用自然或人工方法将两个以上不同的细胞融合成一个细胞的过程。1.动物细胞融合，杂交细胞：融合的结果，原来有两个以上细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。27，PPT学习交流，基因型相同的细胞融合的杂交细胞称为双核体。不同基因型的杂交细胞称为双核体。同种细胞在培养时粘在一起的两个细胞称为自发融合。据说异种肝细胞要通过诱导剂处理

11、才能诱导融合。28，PPT学习交流，细胞融合是正常的生命活动，两个细胞融合和受精作用，29，PPT学习交流，动物细胞融合，30，PPT学习交流，2，刘涛融合的因子生物法：惰性病毒刘涛融合。(惰性仙台病毒的利用是动物细胞融合特有的。因为病毒的磷脂皮与动物性细胞的膜很像。病毒外壳中的特定糖蛋白可能还具有促进细胞融合的功能。)化学法：聚乙二醇(peg)刘涛融合。物理方法：电击穿融合，病毒粒子粘附细胞表面，细胞膜连接，细胞膜被病毒颗粒穿透，细胞融合，杂交细胞形成，等等，31，PPT学习交流，考察讨论：细胞融合过程中使用的病毒为什么要停用？你不活吗？停用病毒是因为细胞膜的蛋白质分子和脂质分子重新排列，细

12、胞膜打开，细胞融合，不灭的话细胞会感染，细胞融合无法诱导。32，PPT学习交换，3，动物细胞融合技术的应用，细胞融合技术克服性杂交的局限性，实现远程杂交。利用异种交配技术制备单克隆抗体。33，PPT学习交流，准备单克隆抗体，培育新品种，杂交细胞，杂交植物，突破远程杂交不兼容障碍，生殖隔离，电击，振动，离心，聚乙二醇，纤维素酶，果胶酶，胰蛋白酶(或胶原酶)将抗原注入动物体内，然后从动物血清中提取抗体的方法的缺点是？效率低、产量有限、纯度低的动物抗体注入人体后，会产生严重的过敏反应。能否克隆单个b淋巴细胞形成的细胞群，产生单个类型的抗体？b淋巴细胞不能在体外无限增殖。2:成功应用动物细胞融合的单克

13、隆抗体的制备，思考，35，PPT学习交流，抗原，吞噬细胞摄取处理，t细胞，暴露，杰西，b细胞，直接刺激，血浆细胞，增殖，分化，抗体，36，PPT学习交换，传统获得方法的缺点：低产量，低纯度，低特异性，如何获得大量，特定的强抗体？利用动物细胞培养技术，复制单个免疫b细胞。这就是“单克隆抗体”、37、PPT学习交流、单克隆抗体的制备非常有创造性的方案，融合了能产生特定抗体的b淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞，形成杂交细胞。异种杂交瘤细胞在体外表现出快速增长的同时，持续分泌单一成分特定抗体。仅针对特定抗原决定簇的这种单一类型的抗体分子是单克隆抗体。因此，米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)在198

14、4年获得了诺贝尔奖。38，PPT学习交流，1 .你怎么得到b淋巴球？2.b淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起的几种融合方法？如何筛选需要的细胞？细胞培养有几种方法？如何提取单克隆抗体？准备过程提示：39，PPT学习交换，准备单克隆抗体，2。单克隆抗体准备原理，每个分泌一个特定的抗体。具有无限增殖的特性。技术融合两个细胞，得到杂交瘤细胞。杂交瘤细胞可以做到，能产生足够的量。利用技术大量培养杂交瘤细胞。b淋巴细胞，骨髓瘤细胞，动物细胞融合，动物细胞培养，大规模增殖，特定抗体，40，PPT学习交换，单克隆抗体准备过程，特定抗原注射，骨髓瘤细胞，免疫b淋巴细胞(血浆细胞)，细胞培养，刘涛融合小鼠，动物细胞培

15、养，骨髓瘤细胞，单克隆抗体，抗原，免疫处理，动物细胞融合，筛选，动物细胞培养，提取，42，PPT学习交流，如细胞增殖时合成DNA有d和s两种方法。 人的淋巴细胞合成了这两种DNA，但一般不会分裂增殖。老鼠的骨髓瘤细胞即使没有s途径，也可以继续分裂增殖，将两个细胞混合在培养液中，加入聚乙二醇，使其熔化，培养液中有一个细胞。添加甲氨蝶呤后，阻断d合成途径，只有d合成途径和徐璐融合细胞不能增殖。人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交细胞可以利用淋巴细胞的s途径合成DNA并增殖。从培养液中分离杂交细胞。培养液中如何筛选杂交瘤细胞？5，骨髓瘤细胞，43，PPT学习交流，多孔细胞培养板，限制性稀释法，稀释杂交细胞，用多孔细胞培养板培养，在每个孔只有一个杂交细胞的情况下开始培养，然后筛选能够产生特定抗体的细胞群。如何筛选分泌所需抗体的异种杂交瘤细胞？44、PPT学习交换，动物特异性免疫分离b淋巴细胞(b)；寻找骨髓瘤细胞(g)。b淋巴细胞是系列。(B1，B2，B3，- Bn)细胞融合3种融合方法：(BB；BG；GG)初级筛选：在“培养基培养选择”中培养选定的杂交细胞(只有BG杂交细胞