毕业答辩ppt模板中南财经政法大学武汉学院

1、雪上一枝蒿提取物对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用研究,答辩人：苏琴诗 班级：07级药学 学号：07113004 指导老师：黄先菊,目录,前言,肿瘤的发病机制及治疗现状,雪上一枝蒿的药用作用概述,实验材料及细胞系 雪上一枝蒿根块购自安徽亳州，采用系统溶剂分离法提取分离，其醇提物及各个有效部位均为本实验组提供。 人肝癌细胞株HepG2购自武汉大学典藏物保存中心。 雪上一枝蒿五个提取部位分别为：氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，正己烷，水溶。,实验方法,肿瘤细胞的培养 MTT显色法测细胞活性 流式细胞仪测细胞凋亡 Hochest33258染色法测细胞凋亡,肿瘤细胞的培养,培养基：PRMI-1640，10

2、%胎牛血清，青霉素，链霉素 培养箱：37，100%相对湿度，5%CO2,MTT显色法测细胞活性,实验原理：,四甲基偶氮唑盐(MTT)能被活细胞线粒体还原成蓝紫色的甲躜结晶物，而死细胞和红细胞则无这种能力，甲躜可溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，呈蓝色溶液，它的颜色可与活细胞数成正比，所以根据OD值来反映存活细胞的变化，从而推算出肿瘤细胞在化疗药中的存活率和抑制率。,实验方法,细胞消化，点板。 加药 加MTT反应 加DMSO显色 酶标仪测OD值 数据处理,流式细胞仪测细胞凋亡,实验原理：,实验操作：流式细胞仪检测雪上一枝蒿五个有效部位的细胞凋亡情况,Hoechest33258荧光染色法,实验原理：

3、 Hochest33258染料可以直接和细胞内的DNA结合，在荧光显微镜下发出蓝色荧光。凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。,实验操作：用Hoechest33258检验雪上一枝蒿五个提取部位对HepG2的凋亡的影响。,实验结果,MTT显色法测细胞活性,IC（g/ml）：2831.605,药物种类 IC（g/ml） 正己烷部位 74.1677 氯仿部位 37.986 乙酸乙酯部位 112.8488 正丁醇部位 183.0931 水溶部位 1413.471,雪上一枝蒿氯仿不同提取副部位的细胞毒作用分析,流式细胞仪检测结果,由图可知，经过雪上一枝蒿各个提取部位（200g/m

4、l）处理24小时后，除水溶部位，正丁醇提取部位外，肝癌细胞中坏死细胞，早期凋亡细胞，晚期凋亡细胞都有不同程度的增加，说明这几个部位能诱导细胞产生凋亡。,荧光显微镜结果,图1：对照组 图2：氯仿提取部位,图3：乙酸乙酯提取部位 图4：正丁醇提取部位,图5：水溶部位 图6：正己烷提取部位,讨论,本研究为抗肿瘤药物的相关筛选，经采用MTT法，流式细胞仪，荧光显微镜对雪上一枝蒿的水、氯仿、正己烷、乙酸乙酯和正丁醇的萃取部位进行体外抗肿瘤活性研究表明，雪上一支蒿提取物的上述各萃取部位对HepG2有不同程度的抑制作用，在给药后24 h有明显效果。氯仿部位对HepG2的最大抑制率为74.43%，正己烷部位最

5、大抑制率为67.86%，两个部位的半数抑制率分别为37.986%和74.1677%，说明氯仿部位和正丁醇部位具有明显的体外抗肿瘤活性，且有明显的剂量依赖性，这可能是氯仿部位生物碱含量较高。对其相关提取副部的研究显示，两个部位的副提取部位对肿瘤细胞也有一定的抗癌作用，还可以近一步研究其体内抗癌的相关药理作用。正丁醇部位和水溶部位作用较差，有可能是药物难以在溶解在这两种溶剂中。因此，雪上一枝蒿的各提取部位的化学成分和抗癌药理作用还需进一步研究。,参考文献,1 张秋菊，杨晶，杨凤娟，刘美娜.肝癌的健康生命年损失研究.中国卫生经济，2010年3月，第29卷第3期:3436. 2 韩东铁.雪上一枝蒿的化

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