基因工程-3-受体.ppt

1、1、大肠杆菌受体系统 基因复制 原核细胞 2、芽孢杆菌受体系统 扩增场所 受体系统 3、其他细菌受体系统 外源基因 表达场所 1、酵母菌受体系统 真核细胞 2、哺乳动物细胞受体系统 受体系统 3、植物细胞受体系统,受体(宿主) Host: 能支持质粒,病毒进行复制的生物体。,受体系统,一 基因工程的基本元件 -受体,一、E.coli受体系统,大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的,1、E.coli受体系统的特点, 遗传背景清楚 繁殖快 含有质粒,3、E.coli受体系统的缺点,表达产物存在于细胞内 安全性欠佳 缺乏基因产物表达后加工机制,基因型：

2、F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG 80dlacZM15 (lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, 特点：一种常用于质粒克隆的菌株。 其80dlacZM15基因的表达产物与pUC载体编码的-半乳糖苷酶氨基端实现互补，可用于蓝白斑筛选。 用途：分子克隆、质粒提取。,DH5菌株,基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (lac-proAB) e14- F traD36 proAB+ lacIq lacZM15hsdR17(rK-mK+)。 特点：部分抗性缺陷

3、，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。 用途：分子克隆、质粒提取。,JM109菌株,基因型：F ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) (DE3 lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5)。 特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达。,BL21(DE3)菌株,ompT = mutation in outer membrane prot

4、ein protease VII, reducing proteolysis of expressed proteins,基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) (DE3) pLysS(cmR)。 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达,BL21(DE3)ply菌株,四、酵母菌受体系统,食品级真核单细胞微生物 适合于真核基因表达 基因产物外分泌 遗传背景较清楚 具基因表达后加工机制,1. 酵母菌受体系统的特点,2.常用酵母菌受体系统,酿酒酵母 甲醇酵母,酿酒酵母,酿酒酵母（Saccharomyces serevisiae）又名面包酵母，它是单细胞真核微生物，一直以来酿酒酵母被称为真核生物中的“大肠杆菌”。,1.酿酒酵母表达系统表达外源基因的优点： 工艺简单，可快速大规模生产； 它不会产生毒素，安全可靠。 适合于表达真核生物基因； 外源基因可在酿酒酵母中分泌表达 酿酒酵母的遗传背