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文档简介
1、PBS缓冲液配方无论是在免疫组织化学还是细胞培养中,都经常使用PBS缓冲液。以下是我们实验室的配方,供您参考。我们的实验室配方:溶液:0.1摩尔/升磷酸二氢钾;1.361克磷酸二氢钾(KH2PO4,分子量136.09),加入双蒸水至100毫升。乙溶液:0.1摩尔/升磷酸氢二钠;1.78克氢二钠(Na2HPO4.2H2O,分子量177.99),加入双蒸水至100毫升。或3.58克氢二钠(Na2HPO4.12H2O,分子量358.14),并加入双蒸水至100毫升。ph-溶液a(毫升)-溶液b(毫升)5.60 - 9.50 - 0.255.91 - 9.00 - 1.006.24 - 8.00 -
2、2.006.47 - 7.00 - 3.006.64 - 6.00 - 4.006.81 - 5.00 - 5.006.98 - 4.00 - 6.007.17 - 3.00 - 7.007.38 - 2.00 - 8.007.73 - 1.00 - 9.008.04 - 0.50 - 9.50一般来说,用于免疫组织化学的PBS只含有na2hpo 412H2O(磷酸氢二钠)磷酸二氢钠氯化钠用于细胞培养的PBS应该含有氯化钾称取8克氯化钠、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4和0.24克KH2PO4,溶于800毫升蒸馏水中,用盐酸调节溶液的酸碱度至7.4,最后加入蒸馏水至1L恒量,至0.01
3、米磷酸盐缓冲盐水称取8克氯化钠、0.2克KCl、3.63克Na2HPO4 12H2O和0.24克KH2PO4,将其溶解在900毫升双蒸水中,用盐酸调节酸碱度至7.4,加水至恒定体积的1L,并在常温下储存以备后用。PBS是最常见的实验室缓冲液,但其配方不同。以下是我的总结:母液的制备:0.2MNa2HPO4:称取71.6克h2hpo 4-12H2O,将其溶解在1000毫升水中0.2摩尔磷酸氢二钠:称取31.2摩尔磷酸氢二钠-2H2O,将其溶解在1000毫升水中不同浓度铅的制备(ph=7.4):0.2毫升(酸碱度=7.4,100毫升):取19毫升0.2毫升/升磷酸氢二钠和81毫升0.2毫升/升磷酸
4、氢二钠。然后按照相应的比例稀释0.2毫升(酸碱度=7.4),如:0.1毫升(酸碱度=7.4):取500毫升0.2毫升,用水稀释至1000毫升。0.01毫升(酸碱度=7.4):取50毫升0.2毫升,用水稀释至1000毫升。0.02毫升(酸碱度=7.4):取100毫升0.2 MPB,用水稀释至1000毫升。如果需要氯化钠,加入0.9%(克/100毫升)的氯化钠。其他:其他0.2毫升(100毫升)不同酸碱度的配方:ph0.2亚硫酸氢钠(毫升)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.
5、531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸盐缓冲液、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方磷酸盐缓冲液试剂:Na2SO 4 H2O Na2SO 4 H2O制备方法:制备时,通常先制备0.2摩尔/升磷酸氢二钠和0.2摩尔/升磷酸氢二钠,然后按一定比例混合得到0.2摩尔/升磷酸盐缓冲溶液。可根据需要制备不同浓度的铅和PBS。(1)0.2摩尔/升Na2HPO4;称取Na2HPO4.12H
6、2O 31.2g克(或NaH2PO4H2O 27.6g克),加入蒸馏水至1000毫升溶解。(2)0.2毫升/升Na2HPO4:称取NaHPO4.12H2O 71.632g克(或Na2HPO47H2O 53.6g克或Na2HPO42H2O 35.6g克),加入蒸馏水至1000毫升溶解。(3)制备0.2摩尔/升的磷酸氢二钠,其酸碱度为7.4:取19毫升0.2摩尔/升的磷酸氢二钠和81毫升0.2摩尔/升的磷酸氢二钠,充分混合,得到0.2摩尔/升的磷酸氢二钠(酸碱度约为7.4 7.5)。如果酸碱度高或低,可以通过改变两者的比例来调节,并且可以在室温下储存。0.2毫升/升磷酸盐缓冲溶液(pH 5.7 8
7、.0)0.2摩尔/升磷酸氢二钠(毫升)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.563 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.97
8、.0 93.08.05.3 94.7我在网上搜索了很多关于磷酸盐缓冲液的帖子,但是我还是不能确定正确的答案。现在把它们联系起来,希望一些专家能参与讨论。我会整理出最终的正确答案,并提供给每个人。PBS可以是三种解决方案的英文缩写,它们是1.磷酸盐缓冲溶液(磷酸盐缓冲溶液),2.磷酸盐缓冲盐水和3.磷酸盐缓冲钠,不同的制备方法,不同的酸碱度,不同的生物功能。除非另有说明,生物学中常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液。不含钙和镁离子的磷酸盐缓冲盐水(0.15毫升/升酸碱度7.2)氯化钠8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g克(Na2HPO412H2O为2.89克)KH2PO4 0.2g将上
9、述试剂依次溶于1 000毫升去离子水中,115高压灭菌10分钟 15分钟,4冰箱保存备用。该溶液可用于制备和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。我们都使用第二种类型问题1:为什么使用第三种或第一种磷酸盐缓冲盐水?很多年来,我一直认为PBS是磷酸盐缓冲溶液,另外两个表达的英文名字很常见,但我一直认为它们是相似的东西。这是我第一次听说不同的中文翻译。我公司使用的PBS种类很多,抗体组使用的中和PBS配方比较简单,不含钾离子,只起到缓冲酸碱度的作用;Na _ 2 HPO _ 4 KH _ 2 PO _ 4可以以不同的比例均匀混合,得到不同PH值的缓冲溶液,用于不同的目的,在分子生物学中有着广泛的应用。
10、对于活细胞或细菌的处理,为了保持渗透压,将加入其他溶液,其中最常见的是氯化钠和KCl来调节离子浓度。这些是个人理解,欢迎批评。问题2:既然抗体组的PBS可以缓冲酸碱度,加入80G NACL有什么效果?你需要平衡渗透压吗?还有,是不是因为细胞上的钠钾泵增加了钾离子?血清中没有细胞。你怎么能谈论钠钾泵?我认为这场比赛的原因实际上是模拟了血清中的缓冲环境。血清中没有细胞,那么你怎么能谈论钠钾泵呢?我没说血清。我们用的没有加K,我是说有K的那个问题3:没有NACL会发生什么?如何省钱在中和磷酸盐缓冲液中,氯化钠的主要功能应该是维持一定的离子浓度以维持抗体活性。当离子浓度过高或过低时,蛋白质会变性,抗体
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