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文档简介
1、选择杂交板1,主题3植物的组织培养技术课题2月系的花药培养,1,1,被子植物定义:所有种子用皮包着,兰州用子房壁包着的植物为被子植物,1,被子植物,裸植物定义:所有胚胎暴露,外例:松树四分体时期,单核,双基,12,13,两个精子和营养核的基因型相同。14,15,16,花粉粒类型,成熟花粉粒是雄性配子体。有两种情况。双核花粉粒:成熟花粉粒中(精子在花粉管中形成),三核花粉粒:部分植物的花粉在成熟前生殖细胞一次有丝分裂,形成两个精子,这种花粉成熟时含有一个营养核和两个精子。17,3,被子植物胚囊形成,1,雌蕊的构成,柱头,花柱,子房,2,子房的结构,18,被子植物子房的结构,胚囊的结构,花粉管,精
2、子,精子胚囊是胚珠内的胚囊母细胞胚胎母细胞经过减数分裂,产生四个细胞,即称为大孢子的四个细胞,每个大孢子内的染色体数目比胚胎母细胞减少一半。这4个细胞排成一行,其中接近周公的3个细胞退化,最内部发育为胚胎细胞,胚胎细胞的核连续3次进行有丝分裂,但每次细胞核分裂后,不进行细胞质分裂,形成8个细胞核的胚囊。最初,8个核分别位于胚囊的两端,每端4个,每端各有一个核移动到胚囊的中央,因为这就是极核,胚囊的8个核中的遗传物质是相同的。3,卵细胞的形成,20,以后周公末端附近的3个核发育为3个细胞。其中最大的是卵细胞,剩下的是2个辅助细胞,另一端3个细胞核也发展成3个细胞,成为半足细胞,21,22,花粉落
3、在雌蕊柱头上,落在柱头上,到达胚珠后,在胚囊中绕过卵细胞,到达胚囊内卵细胞和细胞核之间,花粉管的前部破裂,释放出两个精子。一个精子与两个极核结合,形成受精卵,另一个精子与卵细胞结合,形成受精卵。这是被子植物特有的双受精现象,4,受精过程,23,28,5,影响火药培养的因素,1,材料的选择,接种的火药时机,不同植物的刘涛成功率大不相同。对于同一种植物,亲本的生理状态也直接影响刘涛成功率。材料选择成功与否是火药培养成功的关键,材料选择,29,适当的花粉发育时期选择是提高刘涛成功率的重要因素,30,一般来说,在单核从中央转移到细胞的时期,火药培养成功率最高。也就是说,最适合花药培养的小孢子发育时期是
4、单核细胞前的花药接种,质地柔软,易碎。选择单核机后的火药接种导致花瓣松动,材料消毒困难,单核机的火药难以选择。选择火药培养基,不同时期的缺点,31,火药培养时间,到单核期的火药,通常选择未完全打开的花蕾。盛开或稍开的花都是用实验材料挑选的,渡边杏。选择未完全打开的花蕾的原因,未完全打开的花剌子密,单核的火药,菌少,易消毒,单核的火药选择,通常月季的火药培养时间从5月初开始到5月中旬,即月溪的初花期。初花期的花剌子密营养状态和生理状态比较好,可以提高花粉的诱导成功率。32,如:月桂花药培养时,花粉粒最好。()A,四分体时期B,单核细胞中期C,单核细胞D,双核或三核花粉颗粒,C,2,培养基:油菜中
5、B5培养基,3,其他因素亲本植物的生长条件,材料的低温预处理,接种密度等对刘涛成功有一定影响33,6,实验操作,(1)选择材料,部分植物的花粉核不易着色,最常用的方法是醋酸紫法,1,方法,34,醋酸紫法染色机,醋酸紫红色是碱性染色剂,花粉细胞内有染色体,染色体主要成分是DNA和蛋白质,煮出体积分数为45的100毫升醋酸,慢慢加入1g洋红,加热返回8h,冷却到50,过滤即可。醋酸紫红色的组成,2,醋酸紫红色法,35,36,将火药放在幻灯片上,添加一滴质量分数为1的醋酸紫红色,用镊子夹碎火药,在显微镜下检查。染色工作,3,烘焙蓝铬钒方法,无水酒精和冰醋酸以体积比3: 1的比例混合。卡诺固定液的赵霁
6、方法,37,火药必须在卡诺固定液中固定20毫升。然后取出幻灯片,染色块状溶液,盖上盖子,在显微镜下检查,将5g铬矾K2SO4Cr2(SO4)24H2O放入90ml蒸馏水中溶解,然后加入0.1g烘焙炉,搅拌,加热至沸腾,煮5分钟,然后用室温冷却,过滤,再加入蒸馏水100ml。花块罗姆溶液的制作方法,染色操作,38,(2)材料的消毒,1,酒精处理,花蕾在体积分数为70%的酒精中浸泡30秒后立即取出。无菌水清洗无菌吸水纸吸收花蕾表面的水分,39,2,消毒液处理,质量分数为0.1%的氯化汞触媒溶液中的24分钟(质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和表百分溶液)无菌水清洗为培养花药35次,实际上大部分未熟。外面的花萼,40,无菌状态下,取出肿块和花瓣,用镊子取出火药,要完全去除花线。连接在花纱上的火药不利于愈合组织或胚胎体的形成,因此立即在培养基上接种火药。通常每瓶接种7-10种火药。1,剥火药,不损伤火药,非花粉愈伤组织,2,接种,注意:(3)接种和培养,41,培养条件:温度调节25左右,不需要光。幼植物形成后才需要光。3,培养,培养:通常在培养20-30天后发现火药裂纹,愈伤组织生长或释放胚胎,愈伤组织生长,愈伤组织转移到分化培养器,使再生植物进一步分化。注意:火药裂开,释放胚胎,一种火药中就会产
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