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文档简介
1、酵母菌数量的测定,显微镜直接计数法:使用血球计数板等计菌器进行酵母菌的计数。,优点:直观、快速、操作简单。,缺点:所测得的结果是死菌体与活菌体的总和。,取样前需摇匀 向计数室添加样品向计数室加样品时,先将计数室盖上盖玻片,用无菌细滴管沿盖玻片边缘滴入少量菌液,菌液自行沿边缘缝隙渗入计数室。计数室要充满菌液,不能存有气泡。,取样与滴加培养液,稀 释,小方格内酵母菌数量过多,难以计数,就要对菌液进行适当稀释后再计数。一般样品稀释后适宜范围是少于 10 个菌体/每小格。根据需稀释的倍数,精确算出应加入的无菌水量, 如lmL 菌液欲稀释100 倍,则需向lmL 菌液中加入99mL 无菌水,而不是加入1
2、00mL 无菌水。,计 数,对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻两边及顶角计数。,以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算:设五个中方格中总菌数为A,菌液稀释倍数为B,那么,一个大方格中的总菌数:,(6)怎样进行酵母菌的计数?,染 色,美蓝是无毒性染料,碱性条件下,用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型,因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。,如果将染液直接滴在血球计数板上,菌液浓度改变,无法对实验结果精确计算。
3、正确的做法应是另外制作装片,通过染色对活菌和死菌加以区分,算出两者比例,进一步换算出总菌体数中的活菌数。,第 7 天,死亡,(1)在不同温度(以及通氧、通CO2等)条件下酵母菌种群数量增长的情况如何? (2)不同培养液(如加糖和不加糖)中酵母菌种群数量增长的情况如何?,进一步探究:,为什么第3天后A组培养液中酵母菌数目减缓甚至不增加?,C,血球计数板的清洗,血球计数板使用结束后,应用清水浸泡、冲洗,不能用刷子等硬物洗刷,自然晾干或吹风机吹干后,镜检每个小格中是否存有污物、残菌,如不清洁,需重新清洗直至洁净。,无菌操作,要防止杂菌污染给实验结果带来影响。每次抽样检测用到的蒸馏水、玻璃器皿、滴管等要事先经无菌化处理,血球计数板、载玻片、盖
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