基于质谱的蛋白质组学分析

1、蛋白质组学是建立在质谱学基础上的蛋白质组学，01，02，03，生物质谱技术，生物质谱在蛋白质组学中的研究和应用，内容，蛋白质组学，蛋白质组学：蛋白质组学，蛋白质组学，即由基因组表达的蛋白质，蛋白质的研究，是一门研究所有蛋白质的存在和形式的学科。蛋白质组学可分为表达蛋白质组学、结构蛋白质组学和功能蛋白质组学)。表达蛋白质组学研究细胞或组织中蛋白质表达的质量和数量的变化。以及不同时期基因表达谱的变化。2.结构蛋白质组学旨在绘制蛋白质复合物或存在于特殊细胞器中的蛋白质的结构，用于建立细胞内信号转导的网络图，并解释某些特定蛋白质的表达对细胞的影响。3.功能蛋白质组学研究不同生理和病理条件下细胞中各种蛋

2、白质及其调控网络之间的相互作用。以及蛋白质转录和修饰，蛋白质组学研究路线，主要技术，1。双向电泳第一方向：等电聚焦(IEF)，根据蛋白质等电点分离第二方向：聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据蛋白质分子量差异分离，2。二维荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)使用专有的荧光染料、多种样品和图像分析方法，可以在同一凝胶上同时分离多个带有不同荧光标记的样品，并使用荧光标记样品的混合物作为内标。可以对每个蛋白质样品和每个差异进行统计可靠性分析。生物质谱技术，质谱是一种图像质谱仪，其中带电原子、分子或分子碎片按质量顺序排列。质谱仪是一种能够电离物质，根据它们的空间位置、时间顺序或轨道稳定性或不通过适当的电场和磁场来分

3、离它们，并在检测它们的强度后分析物质的仪器。质谱仪主要由分析系统、电气系统和真空系统组成。基本原理：这是一种通过测量被测样品中离子的质核比的分析方法。首先对待分析样品进行电离，然后根据不同离子在电场或磁场中的不同运动行为，按质荷比(m/z)分离离子，得到质谱。样品的定性和定量结果可以通过样品的质谱和相关信息获得。质谱的发展第一台质谱仪是由英国物理学家汤姆森于1912年成功开发的。质谱在20世纪20年代成为一种分析方法，从20世纪40年代开始被广泛用于有机物质的分析。1966年Munson 2。标记方法，包括同位素标记亲和标签(ICAT，iTRAQ)，元素标记亲和标签(ECAT)，酶18O标记，

4、DYGE技术和同位素氨基酸细胞培养标记(SILAC)。例如，iTRQA试剂结合生物质谱用于蛋白质组的相对定量方法。(1)试剂的反应基团与肽段的n端氨基和赖氨酸的-氨基特异性结合；(2)不同质量的平衡基团和报告基团在一级质谱上有一个峰，即肽加144Da的质量；(3)在次级质谱上，报告基团被特异性破坏，其比率是两个样品中蛋白质的相对定量。(3)蛋白质的翻译后加工蛋白质的修饰类型主要包括磷酸化和糖基化，其中蛋白质的磷酸化和去磷酸化几乎调控了生命活动的全过程。蛋白质磷酸化是HPO3基团的增加，可以通过增加80u氨基酸残基的质量来检测，从而识别蛋白质的翻译后修饰信息。以下方法用于通过质谱测定蛋白质磷酸化位点。磷酸酶处理结合分子激光原位杂交-飞行时间-质谱-PME，以找出哪个肽段被磷酸化。利用三级四极杆串联质谱的前体离子扫描技术检测肽段的磷酸化位点。4.蛋白质相互作用首先通过生化方法纯化蛋白质复合物，然后通过质谱分析其组分。用质谱法研究这类问题有两种主要策略。一种是分离获得结合蛋白