DNA扩增.ppt

1、多聚酶链式反应（PCR)扩增DNA片段,.DNA分子的结构,C、H、O、N、P,1.元素组成：,脱氧核苷酸,2.基本单位:,一.基础知识,脱氧核苷酸,磷酸,脱氧核糖,含氮碱基,嘌呤,嘧啶,腺嘌呤（A）,鸟嘌呤（G）,胞嘧啶（C）,胸腺嘧啶（T）,一个核苷酸上的磷酸基团上的“OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3和5碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3、5、磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“OH”末端称为3端，而磷酸基团的末端称为5端,3.多脱氧核苷酸链得形成,多脱氧核苷酸链结构简

2、图,5,5,3,3,4.DNA分子的双螺旋结构,.DNA分子是由 的（即一条链为35，另一条链为53）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。,. 与 交替连结，排列在外侧，构成基本骨架； 排列在链的内侧。,.两条链上的碱基通过 连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与 配对， 一定同胞嘧啶配对。,双螺旋,两条反向平行,脱氧核糖,磷酸,碱基,氢键,胸腺嘧啶,鸟嘌呤,.DNA的复制,2.时期,有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期。,3.场所,细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。,1.概念,由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。,4.基本条件,酶:解旋酶、DNA聚合酶 能量:AT

3、P 原料:四种脱氧核苷酸 模板:DNA的两条链,.边解旋边复制(过程）,5.复制特点,.半保留复制（结果）,6.遵循原则：,碱基互补配对原则,7.精确复制的原因,8.复制的意义,DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传信息的连续性,规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板,碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行,二.PCR(多聚酶链式反应）,2.DNA聚合酶特性,不能从头合成DNA，只能从DNA的3端开始延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。,3.DNA聚合酶作用过程,当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后， DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链，DNA的合成方

4、向总是从子链的5端向3端延伸。,1.定义： 是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。,DNA母链：提供复制的模板 解旋酶： 打开DNA双链 4种脱氧核苷酸：合成子链的原料 DNA聚合酶： 催化合成DNA子链 ATP：为复制过程提供能量 引物：使DNA聚合酶从引物的3端开始连接脱氧核苷酸,三、PCR反应的条件,80100,耐热的DNA聚合酶,缓冲溶液：维持反应的pH值不变,四、PCR反应的过程,1、变性：,温度上升到90以上时,双链DNA解聚成为单链。,2、复性（退火）：,温度下降到50左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。,3、延伸：,温度上升到72左右,溶液中的4种脱氧核苷酸在Taq DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对的原则合成新的DNA链。,二、PCR原理,二、PCR原理,变性,实验操作步骤： （1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备） （2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液） （3）盖严离心管