艾滋病实验室检测管理与设备维护培训(PPT 106页).ppt

1、艾滋病实验室检查管理和设备维护，河北省疾病预防控制中心性病艾滋病预防监测中心赵翠英，HIV抗体检测的目的，监测：是为了了解不同人群的HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测人群包括各种高风险人群和一般人群以诊断：诊断为目的的检查是为了确定个人的HIV感染状况而进行的检查，包括临床检查和自主检查、术前检查、根据特殊需要进行的检查等。血液筛选：以血液筛选为目的的检查是为了防止输血传播HIV而进行的，包括献血者筛选和原料血浆筛选。HIV抗体检测要点、筛选试验阳性不能作阳性报告。 严格遵守实验室标准操作程序(SOP )。 严格遵照试剂盒的说明书。 留心防止样品间的交叉污染。 普通计程仪柱的初筛-复验

2、-复验确认：对初筛显示呈阳性的样品，用与原试剂不同的原理或不同厂家的筛选试剂反复检查。 当两种试剂均呈阴性反应、HIV抗体阴性报告均呈呈阳性或一阴一阳时，需送往艾滋病确认实验室进行确认。HIV抗体筛选试验程序流程图、HIV抗体确认试验程序流程图、一、HIV抗体诊断、临床上实际应用的是专一性HIV抗体的测定，包括初筛和确认。 HIV抗体一般在感染后数周逐渐出现，延续一生是重要的诊断依据，但从感染到血清抗体阳转有窗棂期，平均1个月至3个月，还有部分比例的艾滋病病毒感染者发生延迟反应，95%以上的HIV-1感染者产生抗体的时间在感染后6个月以内。 常用样品除血液外，主要还可以用唾液检测HIV(Ora

3、sure，如Salivacard )，尿液检测HIV抗体。 常用方法、酶催化剂免疫吸附试验(ELISA )动物胶粒子凝聚试验(PA )斑点免疫试验(或免疫层析法):金胶体或硒胶体、双抗原穿山鼠开关ELISA试验原理，此类试验比较敏感特异，微预制备可检测血清中IgA、IgM、IgG抗体的HIV -1/2混合抗原一步法-实验时加入被检血清和西洋山葵过氧化酶标识牌HIV-1/2混合抗原两步法 -实验时加入被检血清，温度处理后，酶催化剂标识牌HIV-1/2混合抗原，双抗原穿山鼠开关ELISA试验原理，温度处理被检血清中如果有特异的抗体，可以用抗原和酶标记包复抗原，例如添加的基质与交联抗原上的酶催化剂发

4、生颜色反应，显示出抗体的存在，如果与抗体无关，则不发色。 实验采用阴性对照和阳性对照。 根据动物胶粒子凝聚试验(PA )原理，用HIV抗原敏化作用大头针的动物胶粒子(载体)。 该敏化作用载体与血清中的HIV抗体相遇时发生交联，出现肉眼可见的凝集反应，非敏化作用的动物胶粒子在抗原不参与的情况下不凝聚。 试验中的未敏化作用粒子对照凝集时，即提示血清中含有非特异性凝集因子时，需要用未敏化作用粒子进行吸附处理，重新进行试验。 现已有HIV-1和HIV-2抗原共同敏化作用的PA试剂(AFD HIV 1/2 PA )和HIV-1、HIV-2抗原分别敏化作用的PA试剂(AERODIA-HIV-1/2 )。

5、前者可用于HIV1/2的筛选，后者可用于区分HIV-1型和HIV-II型。 其缺点是判定结果可以用肉眼观察到，不能保存。 目前，该问题已得到解决，试剂盒可装载电子数码以储存试验结果。雅培Determine (硒标准)快速试剂试验原理、雅培Determine HIV1/2快速试剂采用免疫层析法原理定性测定血液试样中HIV1/2抗体。 将样品放入反应棒中，样品通过硒胶体抗原结合物后，与硒胶体抗原结合物混合重组结合，该混合物在固相包裹的合成多肽和重组抗原的结果窗口持续移动。 样品中含有HIV1/2抗体时，其抗体与硒胶体抗原结合，与固定在窗上的合成多肽进行重组抗原捕获固定，形成红线。如果样品中不含HI

6、V1/2抗体，则无红外线形成。 反应条件包括质量控制带，以确保结果有效。 金标快速试剂试验原理，CHEK HIV-1 2 (EY )是将HIV抗原吸附在基膜上，放入样品后，如果样品中有HIV-1或HIV-2抗体，抗体就吸附在基膜的抗原上，放入P-A金标识牌溶液，其fiv、窗边期和残馀危险2、残佗危险度(residue risk ) :在目前条件下，筛查后仍有感染性概率。 影响残留危险度的主要因素包括窗口期、试剂质量、实验室质量管理及人的感染率等。 各国残佗危险度不同，美国1985年为1/2500，随着检测试剂的完善，包括“o”亚型的检测、IgM和p24抗原的检测，到1995年下降到1/44-6

7、6万。 据报道，非洲为5/1000，泰国为1/775，肯尼亚为1/50。 二、HIV的抵抗力、HIV的抵抗力、HIV离开宿主后在外界环境中的生存能力很快就会消失，HIV对环境中的物理因素和化学因素的抵抗力都很弱，比乙型肝炎病毒(HBV )的抵抗力低得多。 因此，对HBV有效的消毒和灭活方法适用于HIV。 HIV抵抗力-物理因素，HIV对热敏感，对低温的耐受力比高温强。 因此，可以在高温下使HIV失活，在低温条件下保存HIV。 对紫外辐射不敏感：紫外辐射、放射性射线不能使HIV失活。 HIV抵抗力物理因素，HIV失活：美国疾病中心证实了干燥环境中的HIV浓度在数小时内下降了9099% (即下降了

8、12 log )。 在室温(2227 )的液体环境下HIV可以存活15天以上经过56处理30分钟，HIV在体外可以对人t淋巴细胞失去感染性，但血清中的HIV不能完全失活。 血清中的HIV经过603小时或8030分钟的作用，未能检测出感染性HIV。 目前，世界卫生组织推荐的逆转录细小病毒失活方法是10020分钟。 HIV抵抗力物理因素，HIV保存：-70不加保存剂冷冻保存后会失去感染性。 但是，在-70下保存35%的索注音字醇或50%的小牛血清(FBS )可以生存3个月以上，在液氮中(-196)HIV下可以生存三年五载以上。 因此，毒种必须放入液氮中才能长期保存。HIV抵抗力化学元素、HIV耐碱

9、耐酸： pH3.0条件下HIV滴度在10分钟内可降低4个对数水平，但pH值达到9.0时，HIV滴度的降低很小。 对含有氯元素的消毒剂很敏感。 0.5次亚氯酸、2 -戊二醇溶液、3 -碘酒、6 -过氧化氢可在35分钟内将HIV灭活。 实验常用的消毒方法为，高压蒸汽灭菌(121 20分钟)干燥170 2小时，消毒剂煮沸20分钟浸泡30分钟，常用消毒剂为5氯元素(漂白水、次氯酸钾、氯元素阿摩尼亚t )、6过氧化氢、2戊二醛等。 70%酒精一分钟就能使艾滋病毒灭活。三、HIV实验室检测管理、艾滋病检测工作规范要点，实验室由国家艾滋病抗体检测参比中心艾滋病抗体实验室卫生部认可艾滋病抗体初筛中心实验室卫生

10、厅认可艾滋病抗体初筛实验室认可各级实验室承担相应任务，证实实验室职责。 对初筛实验室人员的技术培训进行的初筛实验室评价或检测对初筛实验室的年度质量管理血清评价省内使用的HIV抗体检测试剂省内各级初筛实验室的质量管理艾滋病关于抗体初筛实验阳性标本的实证报告上级部门。 艾滋病抗体初筛中心实验室职责本地辖区初筛实验室技术指导和管理本地辖区初筛实验室人员的技术培训和质量管理本地辖区初筛实验室的质量管理和质量管理负责对初筛实验可疑阳性或阳性标本的复验进行艾滋病抗体的初筛实验和查询，并对本地区艾滋病检测结果作总结报告，初筛实验室职责， 艾滋病抗体初筛实验和检测前后的询问法应及时向中心实验室传递检测阳性或可

11、疑阳性标本按规定对上级机关总结实验室工作和检测阶段，初筛实验室基本条件、房屋清洁区、半污染区、污染区、温度控制设备酶催化剂标记、扳机清洗、冷藏、微机、高压灭菌器洗眼器等人员报告都要经过专业技术培训的质量保证措施安全保护措施环境、个人具备各项规章制度，包括HIV抗体检测实验室结构模式1、HIV抗体检测实验室结构模式2、HIV抗体检测实验室结构模式3、人员保护基本装备、隔离服(一次性物品) 帽子口罩眼镜(根据个人视力配置能从实验室保护脚丫子面的消毒容易清洗的实验室用鞋，生物安全柜，微型生物安全柜microbiologicalsafetycabinet (MSC )生物安全柜biological s

12、afety cabinet 为什么使用生物安全柜，1 .生物安全柜主要用于各种微生物，特别是有害微生物的操作和基因工程操作。 2 .根本目的是保护员工的健康和盘外环境的安全。 3 .根据保护对象和程度，生物安全柜分为、和级。 生物安全盘等级，1.I级生物安全盘：保护员工和环境。 2.II级生物安全柜：保护工作人员、环境和样品。 3 .级生物安全箱：采用手套箱，更严格地保护工作人员、环境和样品(产品)。 级生物安全罐分类，1.II级a型生物安全罐： 70%罐内循环，30%空气排放，尺无连接蓝2.II级B1型生物安全罐：30%罐内循环，3 .级B2型生物安全罐：100% 5.II级A/B3型生物安

13、全罐： a型和1 .与有害微生物进行转基因操作时，必须使用生物安全罐，不能使用净化台。 2 .根据工作性质和防护要求，选择合适的水平和型号的生物安全柜。 3 .产品品质。 4 .售后服务。 微生物保护性能，1 .对员工的保护性能2 .样品保护性能3 .交叉污染保护性能，初筛试剂要求，* HIV1/2混合型*卫生部批准文号*卫生部药政局检验站批次检验，防伪标签*进口初筛试剂在中国的登记证明*易感性很高、艾滋病抗体检查结果的报告、初筛试验结果： *初筛实验室HIV抗体检查的阴性结果，可以根据试验阴性的报告，明确记载使用的试剂的名称、试剂的有效期、试验者等内容。 可以用询问法通知本主儿。 初筛HIV

14、抗体阳性，被视为HIV抗体可疑阳性，初筛实验室无权向个人或检验机构报告阳性结果。 根据“等待HIV抗体检查”的报告。 再次向采血确认实验室进行确认试验，报告艾滋病抗体检查结果，报告确认试验结果： *阳性结果，只有卫生部批准的HIV抗体确认实验室才有资格接受阳性报告，并按疫病报告计程仪方案和要求向有关部门报告，并一盏茶分析，在具体情况下通知受检者*阴性结果， 可将阴性结果通知受检者的艾滋病抗体初筛中心实验室，在每月10日前汇总本实验室和辖区内各初筛实验室上个月的检测情况后，统一使用“HIV抗体检测数月报告”向省艾滋病确认实验室报告的全国艾滋病检测技术规范(2004年版)的附表6 (从季报开始月报

15、) 报告方式、优先电子邮箱方式：以电子版的形式按时发送路新利收，另外根据-补充说明，对于“自主咨询检查月报通讯端口”，县(区)级疾病控制特罗尔机构每月5日上报市级CDC，市级CDC每月10日上报省级CDC。 报告方式：优先电子邮箱方式：以电子版形式按期收费，四、HIV检验实验室常用设备维修和校准，不同级别实验室必备条件，人员条件初筛实验室：有3名以上医疗技术人员，其中中级卫生技术人员1名以上，从事细小病毒血清学检验技术2年以上； 曾收到国家或省级HIV抗体的确认实验室： 5名以上医疗技术人员，其中高级卫生技术职务人员1名以上，中级卫生技术职务人员2名以上的负责确认试验的操作员，从事细小病毒血清

16、学检测技术5年以上，从事HlV抗体筛选3年以上； 接受国家或省级HIV抗体检测中心举办的HIV抗体检测实验室培训，合格证书、设备条件、初筛实验室：有独立的实验室，应划分污染区和清洁区。 包括酶催化剂标识牌引导人和洗衣机、精密移液器、专用普通冰箱、低温冰箱、离心分离机及各种消毒和排污设施、安全防护用品和恒温设施。 生物保险箱，确认实验室：设有独立实验室，设有清洁区、半污染区和污染区三个区域，包括专用普通冰箱、低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、酶催化剂标识牌引导人、全自动清洗机、旋转振荡器、摇床、精确移相器影响检测质量的几个重要因素，人设备环境，目前HIV检测实验室常用的设备，化验设备酶催化剂标准引导人和洗衣机，精确移液器，普通冰箱，低温冰箱，离心机，摇床，水浴箱，成像仪，病毒载量检测和流式细胞仪安全设备生物保险箱，高压灭菌器， 保护设备应配备的文件资料、仪器设备文件的内容应包括： (1)仪器设备产品使用说明书；(2)仪器设备检查记录；(3)仪器设备检查或检查记录；(4)仪器设备检查或检查合格证明书；(5)使用记录；(6)检查前后的仪器设备状况记录；(7)接通电源； 关机时间仪器的