5.层析-1.ppt

1、生物分离工程，第五章色谱技术(Chromatograph)，第一章，本章的内容是生物化学分离通用色谱、凝胶过滤层、亲和层、离子交换层、疏水层分析、高效液相色谱、应用蛋白质分离色谱、概述、色谱的基本原理色谱技术(又称色谱技术)是利用混合物中各组的物理化学性质(如吸附力、分子形状和大小、分子亲和力、分配系数等)的差异，使各组徐璐以不同的速度移动，以达到分离目的。色谱的发展，1903年俄罗斯植物学家Tswett以碳酸钙作为吸附剂吸附植物色素后，用石油醚冲洗，获得了黄色、绿色带，首先提出了色谱概念1970s早期高效液相色谱(HPLC)。目前，气象层分析器和HPLC是色谱、光谱、质谱和计算机相结合(气质

2、、液质)、基本概念、固定相：色谱的矩阵。它可以是固体物质(如吸附剂、凝胶、离子交换剂等)或液体物质(如固定在纤维素上的溶液)，这种基质可以与要分离的化合物起反吸附、溶解、交换等作用。流动相：在分层分析过程中，推进将固定相分离的物质向一个方向移动的液体、气体等。在柱层分析中一般称为税制，在薄层分析中称为展示剂。色谱分类，色谱的特点，优点：(L)高分辨率(2)范围广泛；(3)设备简单，操作缺点：吞吐量小，工作周期长，不能连续工作，因此主要用于实验室，工业生产主要应用于价格高的生化产品。纸层分析、薄层分析、柱层分析、纸层分析法是分离蛋白质的氨基酸的重要工具，薄层层经常用于过滤吸附层的流动相，用量小、

3、速度快、简便，纸层分析装置示意图、薄层层析法硅胶板、纸层分析过程示意图、柱层分析用层析法柱体积排阻色谱、分子筛色谱、凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography)利用凝胶的分子筛特性，可以对这些物质的溶液进行脱盐、热源去除和脱色。基本原理，凝胶是一种多孔聚合物，每个粒子等于一个体。样品溶液通过凝胶柱时，相对分子质量较大的物质，直径大于凝胶网状孔，因此溶剂仅沿着凝胶颗粒之间的空隙流动，过程缩短，前进的速度加快，首先从层柱流出。相反，相对分子质量较小的物质，其直径比凝胶孔小，因此可以自由进出凝胶颗粒的网内，在向下移动的过程中，从凝胶扩散到凝胶孔，进入其他凝胶颗粒。这样不

4、断地进出，增加流量，移动速度慢，最后让他们离开层层递阶。(莎士比亚，模板，移动名言) (中等大小的分子可以分布在明胶粒子之外，也可以部分进入粒子，在高分子物质和小分子物质之间冲洗)。这样，经过断层柱，混合物中的各种物质根据分子大小分离。固定相(凝胶)、三维空间网状结构、分子筛效果：由于分子大小不同，凝胶中接收的阻断作用不同，因此各组在凝胶柱中以不同的速度移动。，基本概念，外水体积(Vo)是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，即凝胶颗粒之间液体流动的体积。耐水体积(Vi)是凝胶颗粒中孔的体积。矩阵体积(Vg)表示凝胶粒子的实际骨骼体积。支柱床体积(Vt)是凝胶柱可容纳的总体积。洗脱体积(Ve)是指冲洗样品中一组所需溶液的体积。凝胶层柱的各种体积图(阴影部分)、分配系数(Kd)，每个溶质分子在流动相和固定相之间有特定的分配系数。Ve -Vo Kd=Vi，特征：分离物质分子的大小和凝胶粒子孔的大小