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文档简介
1、比较真菌常用的体外药敏实验方法,真菌药敏实验临床困难的原因,1。根据NCCLS推荐的稀释法操作很麻烦。2.有些药只能用于某些细菌的抗菌活性测定。3.纸法实验没有得到NCCLS的认可。4.e实验价格太贵了。5.药敏孵化时间因菌种而异,体外敏感性实验与临床治疗有关。真菌外药敏实验结果与九人部真菌感染结果有很好的联系。深部真菌感染、抗真菌药敏实验与临床治疗的相关性进一步证明,体外敏感性实验没有考虑到对抗真菌药的力学和复杂的生物学作用。真菌外药物敏感试验法,NCCLSM27-A:常数肉汤稀释法,微量肉汤稀释法E-test法NCCLS M44-P纸扩散法(仅限氟康唑)丹麦Rosco纸扩散法(NCCLS不
2、承认),真菌外药,真菌体外药敏用培养基,E-test方法:在RPMI液体培养基中补充葡萄糖,使最终浓度为2%。NCCLS纸扩散法:Mueller-Hinton琼脂2%葡萄糖和0.5g/ml微蓝丹麦ROSCO纸扩散法:改进的SHADOMY(PH7.0)培养基主成分:酵母粉、葡萄糖、天冬氨酸、磷酸缓冲液等,以及用0.85%的盐水制作酵母悬浮液,将浊度调整为0.5脉氏浊度标准(约15106CFU/ml)。常数稀释法:RPMI1640液体稀释2000倍接种浓度约为0.52.5103CFU/ml微量稀释法:RPMI1640液体稀释接种浓度约为1000倍稀释接种浓度约为15103CFU/ml E-test
3、和NCCLS纸扩散法:使用菌液Rosco纸扩散法念珠菌:0.5脉浊度,生理盐水1: 10稀释(15105CFU/ml) 2。隐球菌属:1.0麦卓度3。其他酵母:0.5麦芽、生理盐水1: 1稀释起始浓度为640g/ml,最终末端浓度为1.25g/ml,无菌清洁12mm75mm试管:64,32,16,8,4,2,1,0.5,25,1.8ml164037,64,32,16,8,4,2,1,5,25,酵母菌的NCLCLSM27-A每种药物的触点菌显液在药敏板35至24小时培养后,应均匀涂上光滑的念珠菌新品种银球菌等生长缓慢的菌种,适当延长培养时间。,E-test方法评价,通过高精度、易于操作的E-te
4、st方法获得的MIC值,可以在某些菌种中比NCCLS推荐的常数肉汤稀释法测定的MIC的20%浓度CO2的环境下更真实地反映此方法的结果。药物对病原体的敏感性缺点:1 .价格太高了。酵母纸扩散法敏感性实验NCCLS M44-P. 2003,培养基:Mueller-Hinton琼脂补充2 Glucose 0.5 ug/ML Methylene Bluedye PH 7.2-7.4优点:提高重复性和稳定性菌显液在药敏板上,酵母纸扩散法敏感性实验NCCLS M44-P. 2003氟康唑解释标准和相应的最小抑菌浓度,Susceptible SDD=Susceptible Dose Dependent R
5、=Resistant,酵母纸扩散法敏感性实验NCCLS M44Crosco念珠菌:0.5脉浊度,生理盐水1: 10稀释菌液5105CFU/ml 2。恩古菌属:1脉浊度3。其他酵母:在0.5麦卓度,生理盐水1,约80%的抑制区域,读取与mm相对应的抑制菌环直径。界限是在抑菌圈内测量个别小或中等大小的菌落,15可以忽略。Rosco纸扩散法测定药敏结果,两种纸扩散法比较,Rosco纸扩散法检测菌种念珠菌属,银球菌培养基改良SHADOMY Jin,PH7.0实验药和剂量AA IT 8g,FLA 15g,FC 1,10g,FC 10g,KC隐球菌不稀释1.0脉核)在其他菌种中配制0.5脉浊,1: 1稀释培养条件念珠菌属35培养1824小时,新品种隐球菌30培养4248小时结果FC及AMB100%被抑制。NCCLS纸扩散法检测假丝酵母,隐球菌是培养基Mueller-Hinton琼脂中2%葡萄糖和0.5g/ml的亚甲基蓝实验药物和剂量FLA 25g接种的菌量1 5106/mL隐球菌1.0麦芽糖浊度培养条件35孵化18222唑约80%抑制质量控制株白念珠菌ATCC90028根平滑念珠菌ATCC22019,Rosco纸扩散法各药物接触点,粘膜酵母菌感染氟康唑,曲霉菌,酮康唑,氟康唑,氟康唑1ug,替比尼培,米诺唑等敏感性:22 系统化酵母感
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