病原微生物标本的采集保存与运输

1、致病微生物标本的采集、保存和运输，疾病控制中心2012-9，主要内容，标本质量的重要性和意义标本采集的基本原则标本采集前常见传染病采集标本的种类常见标本采集时间，方法标本的运输生物安全，标本质量的重要性和意义，标本的重要性， 标本是能客观反映生物状况的检验材料标本，是得到所有实验检验和精确数据的物质，标本质量的重要性，所有实验室检验结果取决于所得标本的质量，检验方法的可靠性和检查人员能力。 标本质量的好坏直接关系到实验室检查的精准性和效率，影响处置事件的评价和策略制定。 疫病对策：疫病的判断和预防措施的制定。 监测和调查：流行情况评估。 病例诊断：制定治疗方案，判断患者的预后，负担病症。 正确

2、采集、保存、运输标本的意义，标本的质量与标本的采集、保存、运输密切相关，标本的采集、保存错误会导致假阴性、假阳性结果的出现。 因此，正确采集、保存、运输标本是保证实验室检验结果准确可靠的前提。 为了分离样品采集的基本原则、样品采集的基本原则、培养的患者样品，应尽可能在抗微生物剂使用前采集样品进行微生物检验样品，在取样时使用微生物杀菌作用和新的抗菌物质，如容器中有木有或焚烧消毒剂残留的未蒸发制冷取样工具在保护目标微生物的同时，留心避免杂菌污染。 注意采样部位，疾病发生的正确部位，也就是致病菌必须在最多表兄弟的地方进行采样。 像细菌性痢疾的大便一样，采样要采集脓血部分进行检查。 标本采集的基本原则

3、是，采集的标本需要一盏茶的量。 取决于标本中致病菌的含量、分离要求和标本的性质。 采集标本时要注意与病程的关系。 伤寒患者首周血培养阳性率高，23周大便培养阳性率高，败血症高烧寒战时血培养阳性率高，用药前血培养阳性率高。 标本采集后请立即送到实验室。 通常在4h以下。 床边接种可以提高致病菌的检出率。标本采集的基本原则，棉花雨刮器采集的标本如咽部雨刮器、肛门雨刮器或伤口雨刮器，应用于运输培养基(Cary-Blair运输培养基：空肠弯曲菌、霍乱弧菌、沙门氏菌属、志贺氏菌的取样，霍乱在该培养基上制备48h、沙门氏菌属和志贺氏菌可存活的样品标记应详细填写标本的名称、来源、取样时间、抽样方法、患者的主

4、要临床症状、检验项目等，实验室准确及时地接种合适的培养基和合适的培养环境，以提高阳性检出率。 取样的基本原则是根据样品的性状，检查项目要求，合理保存、运输样品。 夏天最好用冷藏方法运送样品。标本采集前的准备、人员、现场医生和实验室工作人员必须知道标本采集的基本原则、快速运输的要求，以及特有的储藏方法、不同种类的保存、感染性废弃物的处理。安全防护、标本采集过程中，要注意一次性物品隔离服、手套、防护面罩等防护措施，标本采集过程中，要严格采取预防措施，防止针尖等尖溜溜器刺伤(特别是采集患者血的针尖)取样人员的适当防护，防止过度引起人的恐慌，发生不必要的纠纷， 保护采样前应该掌握的信息，掌握样品采集人

5、员需要的全部指示信息，尽可能进行放箭。 标本采集基本信息：标本检验目的、取样对象、标本类型等标本采集和运输方法实验室检验项目和方法联络人及记录信息：实验室名称、地址、联络人等。 突发疫情标本采集要求，慎重处理案件，认真处理标本。通常，突发疫情面广、影响大，直接关系到疫情的判断、处理策略的制定。 目的：某些放箭确定采样时间、采样部位、采样量无目的的大范围标本，无助于疫病病原的诊断，但标本过多导致实验室检查时间延长，疫病诊断的时间节点(一般10份左右，10例以下全采)以科学态度落后，化学基快速处理原则各项工作细节无严格标本采集量应一盏茶(一式三份：一份用于实验室检验，一份用于检验结果复核，另一份作

6、为原标本保存，以备不时之需)，人员、场所及易耗品准备应与现场人员协调，安排妥当，避免混乱。 配置取样对象和取样位置。 一般需要将2名以上的专门人才送到现场进行采样，必要时需要检查人员和其他部门的知情人员协作。人员、场所及易耗品的准备，根据需要准备采样用品的采样工具：注射器、肛门拭子、消毒棉棒、消毒纱布、调羹、汤匙、回形针、大头针定径套、剪刀、酒店灯、标签条用品、75酒精、其他消毒灭菌器具、吸管样品容器：各种采血管、灭菌试验必须提前准备，定期检查，及时补充。 不同的增菌液、保存液低温运输设备，将用于细小病毒和细菌检验的标本区分开来，显示标本包装标识牌人员防护和消毒用品现场快速检验、测定设备：食物

7、中毒快速检验箱、食品温度检验修订、消毒剂浓度检验试纸等。根据取样用容器和试剂的要求，取样容器必须采用清洁、无色、无毒的聚乙烯管塑料或硬质玻璃(西林瓶)。 样品瓶必须是专用的，实验室里装有试剂的瓶子不能作为样品瓶使用。 微生物检验容器使用的基本要求为高温、无毒、耐用材料制作，包装容器后可以防止泄漏，能承受在空中或地面运输中可能发生的温度和压力的变化。 所有取样用具、容器必须严格灭菌，且不能长时间存放，防止污染影响的检测结果取样用生理盐溶液、运输培养基及相关试剂等均应满足新鲜无菌要求，云同步取样所需的试剂量，如输送粪便的培养基以5mL/管为宜、标本采集记录表、标本采集记录表识别、记录标本的唯一证明

8、，建构标本跟踪系统的第一环节。、标本采集记录单、记录单填写患者的基本情况，保证患者能够到偏僻农村访问顺顺利利，必须考虑方言沟通。 由于文化程度低，有可能面临许多困难标本的唯一编号：致命、不可弥补的错误，编号开始重复，编号紊乱，患者的临床症状观信息、人口学信息、不能识别标本采集记录片的标本随时追溯到抽样者， 保证能够验证其他现场信息的附加信息记录：现场发现附加重要信息，及时记录，特殊标记采样前印刷，现场及时填写，不采样，采样结束后补充， 立即作为电子版登记从呼吸机传播的从细小病毒性疾病肠道传播的细小病毒性疾病呼吸机传播的从细菌性疾病虫媒传播的从疾病消化道传播的细菌性疾病人感染链球菌症，从呼吸机传

9、播的细小病毒性疾病例如流感、禽流感、a型H1N1流感， SARS、麻疹、风疹等鼻咽雨刮器(3天未服用抗病毒药物)含漱液痰液血清标本(7天和2-4周)脑脊液解剖检查组织下呼吸道标本、传播至肠道的细小病毒性疾病如手足口病、甲肝、戊肝、细小病毒感染性拉肚子等粪便标本咽拭子标本血液标本疱疹液肛门拭子标本解剖检查标本， 在呼吸道传播的细菌性疾病例如流脑、百日咳、白喉等咽头拭子脑脊液的血瘀点、瘀斑、虫媒传播的疾病例如b脑、登革热等血液脑脊液、标本分注、消化道传播的细菌性疾病例如伤寒、细菌性痢疾、霍乱、其他细菌感染性拉肚子等粪便(等)例如狒狒皮肤炭疽病毒等脑脊液(床边接种血平皿或两相培养瓶)血液(4-7天和

10、2-4周)的瘀点、瘀斑胸、腹水、常见标本采集时间、方法、标本用途分类细菌或细小病毒病原(抗原)检测(病原分离或核检)中常用标本，如粪便、咽雨刮器、血液、 脑脊液等其他种类的标本为病原抗体检查所用标本通常含有血液和脑脊液，抗原检查所用标本，咽雨刮器采集患者发病3天以内的咽雨刮器标本，用病原检查所用舌压板按下舌头，用专用雨刮器在咽后壁或引体向上后侧适当地强涂数次， 为了不接触口腔及舌部，迅速地将棉棒放入装有3-4mL保存液(Hank氏液或者生理盐溶液)的15mL外螺旋盖采样管，在前端折断棉棒，写明患者的姓名、样品种类(5岁以下的婴儿子采样时用保存液浸湿雨刮器， 在试管壁挤压后取样)，包括抗原检查用

11、标本、抗原检查用标本、鼻咽雨刮器、抗原检查用标本、漱口液在内，在72小时内采集。 含漱液是通过用小体积(510ml )的无菌盐水含漱而得到的，在50mL外螺旋盖取样管中捕集了液体。 痰液仅取重症患者，无时间限制。 患者将痰液放入无菌平盘咳嗽，用棉棒刮取痰液放入含4-5mL样品输送液的螺口试管。 痰液无菌，4-5mL标本运送液，带瓦斯气体包50mL螺母柱塑料管内亦可放咳嗽。 下呼吸道标本(适用于气管插管患者)仅取重症患者，无时间限制。 回收气管吸引液或支气管清扫液5-10mL，装入带无菌瓦斯气体插座50mL的螺丝口塑料管内。 抗原检查用标本、疱疹液、瘀点瘀斑先用75喷雾消毒疱疹、瘀点或瘀斑周围皮

12、肤，皮肤干燥后用消毒针选择疱疹、瘀点或瘀斑用棉棒取液，将棉棒放入内置3-5mL保存液的取样管(或可在云同步采集多外疱疹液作为标本。 明确记载了患者姓名、样品种类、采样时间、采样等基本信息，用于抗原检查的标本，粪便标本应在发病早期(3天内)且尽量在抗生素治疗前提取，可提高检出率(注：不管患者是否服药，均应大便提取。 对阿摩尼亚苯甲酸可以中和磺胺钾元素类抗生素。 硫酸镁可以中和抗四环素、赤霉素、新霉素、多粘菌、链霉素等抗生素)粪便标本中多有杂菌，但在标本采集过程中应注意无菌操作，防止杂菌污染。 为了提高检出率，最好采集新鲜粪便，采集脓血便和粘液便，旧标本影响检出率。 液态粪便采集水样便或含摇滾乐液

13、态粪便2-5mL； 成形粪便将至少1个蚕豆大小的粪便(约5g )放入无菌采便管内，采集时注意不要将尿液或水混入粪便容器内，采集后要尽快将容器填塞或勒紧。 抗原检查用标本、肛门擦拭子标本得不到粪便时，用专用棉棒浸湿保存液或增菌液，放入肛门4-5cm深度(小儿2-3cm )轻轻旋转一周，取出直肠表面的粘液，迅速放入运输培养基或保存液中检查，为了保证多个检查项目的展开采集大脑、肝脏、肺和肠淋巴结等重要组织标本，每个采集部位分别使用不同的消毒器具。 各组织采访多个部位，各部位取约5-10g组织23份，淋巴结2个，分别放入15-50mL无菌外螺旋盖冷冻保存管中，取样管外贴标签条，标明患者姓名、样品种类、

14、取样时间取样等基本信息。 当抗原检测的标本、脑脊液标本患者出现神经系统症状时，可采取脑脊液标本，进行病原分离、核酸、抗体检测。 采集时间为出现神经系统症状后3天以内，采集方法采用腰椎穿刺，采集量为1-2mL。 采集后立即放入无菌带瓦斯气体壶的冷冻保存管中，脑膜炎奈瑟菌一出体外即自行溶解，肺炎链球菌和流感菌也容易领便当，标本应立即检查，注意保温、防止干燥，并放入冰箱保存使不得。 取样管外贴标签条，明确记载患者姓名、样品种类、取样时间、取样等基本信息。 抗原检测的标本、血液标本应在患者发热初期或放热峰时采集，尽量在抗微生物剂治疗前采集。 如果患者已经给药，在下次给药前进行液血病原培养时，必须严格采

15、用无菌穿刺法采集肘静脉血，转移到带无菌螺口的抗凝血容器和血培养瓶中进行检查，或者直接接种血平盘。 血培养瓶的接种比例一般为1:5-1:10，其目的是稀释血液中的抗微生物剂、抗抗体等杀菌物质。 每例以0.5-1h间隔采血，可以提高阳性率，区分感染菌和皮肤污染菌。 抗体检测用标本、血清必须采集多份血清标本，至少急性期(发病7d内或发现时，主要为检测IgM和IgG )和恢复期(急性期间隔2-4周，主要为检测IgG )分别采集5-6mL外周静脉血， 分离后血清应严格消毒3个塑料螺母柱血清管分注静脉采血时部位的局部皮肤，采血针内径适宜，采血针过细，损伤血红细胞，引起溶血。 采血时穿刺静脉的速度快，抽出血

16、液的速度适度，用力过猛则要不得。 抽吸后，取下针，沿着管壁缓慢地向试管内注入血液。 如果有抗凝血剂的话，请慢慢地摇匀血液和抗凝血剂。 避免在静脉注射处采集血液标本。 一般采血时使用7号针采血量多的情况下，使用8号针。 抗体检测用标本、脑脊液标本应在患者出现神经系统症状时采集，检测IgM只需要一个脑脊液。要检测IgG，必须收集两次，每隔一个时间间隔保存一次，如上所述。 标本的保存、致病微生物标本的保存、致病微生物标本的保存，取决于运输时间的长短、不同致病微生物对干燥、温度、营养、pH值的耐受力等。 为了确保目标致病微生物的生存，抑制其他微生物的过度生长，选择适当的培养基和保存温度。 用于保存致病

17、微生物标本、细菌分离培养细菌的标本，必须用运输培养基运送，并保存在适当的温度。 用于分离致病菌的运输培养基也不同，一般被冷藏运输(天然菌属、流感菌为20-36保存温运输)。 致病微生物标本的存放、细小病毒是用于分离细小病毒的标本，一般应放入保温容器(4)中，12h内送到实验室，最长24h以上要不得。 不能立即分离细小病毒时，必须冷冻保存标本-20。 长期保管时，请在-70以下冷冻保存。 采集细小病毒雨刮器推荐使用灭菌人工纤维雨刮器(如聚丙烯纤维)和塑料棒：采集咽雨刮器和肛门雨刮器等检测核酸时不能使用棉雨刮器和木质雨刮器棒。 在这种材料中含有核酸扩增抑制剂的细小病毒取样液，推荐使用的用于检测抗原和抗体的其他标本在48处可以保存24-28h，在-20处可以保存的时间长。 要求检查核酸样品的保存，在低温下迅速进行检查。 4暂时保存应立即送入实验室(12h以内)，需要20以下的低温冷冻保存，需要长期保