第七章_苯乙胺类拟肾上腺素

1、2020/7/23,第 七 章,苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析,2020/7/23,学习要求,掌握：药物的结构和性质；主要药物的鉴别、检查和含量测定的原理和特点 熟悉：主要药物杂质的结构、危害、检查方法与含量限度 了解：影响药物稳定性的主要因素、体内样品与临床监测方法,2020/7/23,第一节 结构与性质,分子结构中具有苯乙胺基本结构,2020/7/23,苯乙胺类药物的基本结构,*,2020/7/23,代表性药物,肾上腺素,盐酸去氧肾上腺素,重酒石酸去甲肾上腺素,盐酸异丙肾上腺素,盐酸苯乙双胍,盐酸麻黄碱,2020/7/23,盐酸克仑特罗,硫酸沙丁胺醇,瘦肉精 2受体激动剂，能解除支气管平滑肌

2、痉挛,2020/7/23,2020/7/23,2020/7/23,化学性质,酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。 弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性 游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水 光学活性：手性碳原子，具有旋光性。 苯环取代基特性：根据苯环取代基的电负性，最大吸收波长以254nm为中心红移或者蓝移 ；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。 如盐酸克伦特罗、盐酸氨溴索-芳伯氨基,2020/7/23,第二节鉴别试验 (identification),一、与三氯化铁反应,2020/7/23,二、与甲醛硫酸反应

3、 具有酚羟基取代的本类药物，可与甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物。肾上腺素显红色，盐酸异丙肾上腺素显棕色至暗紫色，重酒石酸去甲肾上腺素显淡红色，盐酸去氧肾上腺素为显玫瑰红橙红深棕红的变化,2020/7/23,与甲醛硫酸反应,2020/7/23,三、还原反应 （酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）,肾上腺素,碘或过氧化氢,中性或酸性,肾上腺素红,放置,棕红色多聚体,盐酸异丙肾上腺素,偏酸性条件,碘,异丙肾上腺素红,硫代硫酸钠,淡红色溶液,重酒石酸 去甲肾上腺素,酒石酸氢钾饱和液,pH 3.56,碘试液,放置5min,硫代硫酸钠,溶液为无色或仅显微红色或淡紫色,肾上腺

4、素 或盐酸异丙肾上腺素,明显的深红棕色 或紫色,2020/7/23,四、双缩脲反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。 例：Chp2000，鉴别盐酸麻黄碱 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。,2020/7/23,盐酸去氧肾上腺素的鉴别：乙醚层不显色，可与盐酸麻黄碱区别,2020/7/23,五、脂肪伯胺的Rimini试验 与亚硝基铁氰化钠反应 重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基,2020/7/23,5mg重酒石酸间羟胺,0.5ml水,溶解,亚硝基铁氰化钠试液2d,丙

5、酮2d，碳酸氢钠0.2g,红紫色,脂肪伯氨基的专属反应 丙酮不含有甲醛,60，1min,2020/7/23,六、紫外光谱特征吸收,红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别。,2020/7/23,第三节特殊杂质检查,一、酮体检查 生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。 例如：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸甲氧明等苯,2020/7/23,紫外分光光度法检查酮体的条件及要求,2020/7/23,利用酮体在紫外310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收，测定一定浓度下样品溶液在310nm处的吸收度来控制酮体的限量。,20

6、20/7/23,二、光学纯度检查,大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子通过比旋度测定控制药物的质量,2020/7/23,手性药物光学纯度检查的最佳方法是实现对映体分离分析，目前常用的方法为色谱法和电泳法,重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度检查：称取重酒石酸去甲肾上腺素消旋体约50mg溶于5ml蒸馏水中，滴加氨水调pH为78；以乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯层用蒸馏水洗涤2次，再用1g硫酸钠脱水，过滤除去硫酸钠，得到溶液置于50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得手性分离系统适用性溶液。同法制备(R)-重酒石酸去甲肾上腺素供试品溶液。取20 l注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测

7、定。用Chiralpak AD-H色谱柱，；以正己烷-乙醇-乙醇胺(800200 2)为流动相；检测波长为280 nm；流速0.8 ml/min。对映体的分离因子为7.2。通过手性高效液相色谱法分离，按峰面积归一化法，可以测定重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度,2020/7/23,三、有关物质检查 例：盐酸去氧肾上腺素,检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇氯仿浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重

8、氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,2020/7/23,肾上腺素中有关物质的检查 供试品溶液：1mg/ml； 对照溶液0.2%（2g/ml） 氧化破坏溶液：50mg供试品，加浓过氧化氢溶液1ml，放置过夜，加盐酸0.5ml，加流动相稀释至50ml 系统适用性试验溶液 ：取重酒石酸去甲肾上腺素对照品适量，加氧化破坏溶液溶解并稀释制成每1ml中含 20g的溶液 HPLC离子对色谱法：去甲肾上腺素峰与肾上腺素峰之间应出现两个未知杂质峰。理论板数按去甲肾上腺素峰计算不低于3000，去甲肾上腺素峰、肾上腺素峰与相邻杂质峰的分离度均应符合要求,2020/7/23

9、,第四节 含量测定,原料：非水溶液滴定法、溴量法 制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法,2020/7/23,一、非水溶液滴定法 非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物的含量。也用于测定某些有机弱酸的含量。,酸性溶剂：冰醋酸 碱性溶剂：DMF 两性溶剂：甲醇 惰性溶剂：氯仿，甲苯，丙酮,2020/7/23,(一) 基本原理,BH+A-,+,HClO4,BH+ClO4-,+,HA,有机弱碱盐,被置换出的弱酸,因此，要根据不同情况采用相应测定件。,2020/7/23,(二) 一般方法,供试品,+,冰

10、醋酸,（10ml30ml）,结 果,HClO4滴定,空白试验校正,（8ml）,2020/7/23,1.适用范围 pKb8的有机碱及其盐。 pKb为813的弱碱性杂环类药物采用本法滴定。 pKb为810时，冰醋酸； pKb为1012时，冰醋酸+醋酐； pKb12，醋酐。,(三) 问题讨论,2020/7/23,2.酸根的影响： 在醋酸介质中的酸性以下列排序递减： 高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸磷酸有机酸 若置换出的HA酸性较强，需加Hg(Ac)2-冰HAc消除干扰。 2BHX + Hg(OAc)2 2BHOAc + HgX2 量不足终点不明显，结果偏低。,过量(13倍)不影响测定结果,2020/7/23

11、,3.滴定剂的稳定性 若滴定供试品与标定HClO4溶液时温差未超过10，HClO4浓度需用公式校正,超过10，重新标定,2020/7/23,4.终点指示方法 常用电位法和指示剂法 常用的指示剂是结晶紫 5.其他干扰 对于有机碱性药物，经碱化处理，有机溶剂提取分离出有机碱后，再用HClO4滴定。,2020/7/23,例：重酒石酸去甲肾上腺素直接滴定 盐酸克伦特罗加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点 硫酸沙丁胺醇加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂,注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。,2020/7/23,非水溶液滴定法-11种,2020/7/2

12、3,二、溴量法,盐酸去氧肾上腺素及其注射液、重酒石酸间羟胺,2020/7/23,三、亚硝酸钠法 盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法,取本品约0.25g，精密称定，置100ml烧杯中，加盐酸溶液(12)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.05 mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.05 mol/L)相当于15.68mg的C12H18Cl2N2OHCl,2020/7/23,四、紫外分光光度法&比色法,盐酸甲氧明注射液含量测定：精密量取本品适量(约相当于盐酸甲氧明100mg)，置250ml

13、量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在290nm的波长处测定吸光度，按C11H17NO3HCl的吸收系数( )为137计算，即得,2020/7/23,紫外分光光度法&比色法重氮化-偶合显色或与亚铁离子络合显色 以盐酸克伦特罗为例，测定原理如下：,注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。,2020/7/23,例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005） 【含量测定】 对照品溶液的制备 精密称取盐酸克仑特罗对照品适量，加盐酸溶液 (9100)制成每1

14、ml 中含7.2g的溶液。 供试品溶液的制备 取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于 盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液(9 100)振摇提取3 次(20ml、15ml、10ml) ，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液(9 100)稀释至刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。,2020/7/23,测定法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加盐酸溶 液(9100)5ml 与0.1 亚硝酸钠溶液1ml ，摇匀，放置3 分钟，各加0.5 氨基磺酸 铵溶液1ml ，混匀，时时振摇10分钟，再各加0.1

15、盐酸萘乙二胺溶液1ml,混匀，放置 10分钟，用盐酸溶液(9100)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录 B），在 500 nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。,2020/7/23,五、高效液相色谱法 高效分离，高灵敏度和高选择性可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。 例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析 色谱条件：色谱柱：ODS 流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.00.1，流速：1.0ml/min 检测波长：280nm,2020/7/23,测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中， 加醋酸溶液

16、（125）稀释至刻度，摇匀，取2l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石 酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（125）制成每1ml中含0.16mg的溶液， 同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,2020/7/23,第五节 体内药物分析),动物组织中的盐酸克伦特罗残留的测定瘦肉精 1. 提取 称取动物肝脏组织样品5g0.05g于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸钠溶液3ml，然后以10 000r/min以上的速度匀质60秒，盖上盖子以5000r/min的速度离心2分钟，吸取上层有机溶剂于离心管中，在残渣中再加入乙酸乙酯10ml，在涡旋混合器上混合1分

17、钟，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。,2020/7/23,在收集的有机溶剂中加入0.10mol/L的盐酸溶液5ml，涡旋混合30秒，以5000r/min的速度离心2分钟，吸取下层水溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。,2020/7/23,2.净化 SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L盐酸5ml活化，然后将上述萃取液上样至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脱，收集洗脱液。,2020/7/23,3.测定 (1) 衍生化： 在50水浴中用氮气吹

18、干上述洗脱液，加入甲苯100l和BSTFA(双三甲基硅烷三氟乙酰胺)100l，试管加盖后于涡旋混合器上振荡30秒，在80的烘箱中加热衍生1小时(盖住盖子)；同时吸取标准工作液0.5ml加入到4%氨化甲醇溶液4.5ml中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束后加入甲苯0.3ml转入进样小瓶中，进行气相色谱-质谱(GC/MS)分析。,2020/7/23,(2)GC/MS测定参数： 色谱柱HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷，30m0.25mm(内径)，0.25m(膜厚)；进样口温度220；进样方式不分流；进样体积1l；柱温70(保持0.6分钟)，以25/min升温至200(保持6分钟)，以25/min升温至280(保持5分钟)；载气氦气；流速0.9ml/min(恒流)；GC/MS传输线温度280；溶剂延迟8分钟；EM电压高于调谐电压200V；离子源(EI)温度200；四极杆温