第2章 无脊椎动物标本制作PPT.ppt

1、第二章无脊椎动物的采集和标本制作的第一节概述了1、为什么制作标本。 2 .制作标本的原则1、无脊椎动物采集所需工具和常用药品1、采集工具2、玻璃工具3、标本制作工具4、常用药品2、无脊椎动物的处理方法和标本种类的生物标本经过一定的方法和手段处理后，反映生物的特征，可长时间保存的标本按制作方法分为浸渍标本和干燥标本1、浸制标本是用保存液防腐的标本，如果保存好，该标本可长期保存。 清晰地显示生物体的外部形态和内部构造，能够长期保持生物体本来的颜色。 浸渍标本可分为(1)整个动物的浸渍。 (2)动物解剖标本的浸制。 (3)生长发育(生活史)标本浸制。 动物整体浸制，动物解剖标本浸制，动物解剖标本浸制

2、，生长发育(生活史)标本浸制，2 .干制标本适用于脱水后不变形或不太变形的个体器官。 干燥标本包括剥制标本、骨架标本、玻璃板标本、贝干燥标本、棘皮动物干燥标本、昆虫针插标本、鸟巢及卵标本等。 剥制标本、骨骼标本、无脊椎动物整体的浸制标本的制作无脊椎动物种类繁多，有的身体柔软，有的身体硬壳，有的身体有很强的伸缩性。 在制作标本时，根据上述特征而不同。 一个个体柔软的动物：例如扁平动物门上的涡虫可以用一个铬酸处死固定。 为了防止身体卷曲，用毛笔将固定的标本举到培养皿的湿滤纸上，放平。 在其上再放入一枚滤纸，夹住动物，在纸上放置几块载玻片，再加入10孔陆战队员液，经过12h后，除去滤纸，转移到5孔陆

3、战队员溶液中保存。 肝吸虫的浸制标本也可以用这种方法进行。 2体易伸缩的动物：为了防止浸渍引起的动物收缩，(1)麻醉法：一般用酒精、硫酸镁、薄荷脑、乙醚等麻醉剂先行麻醉，动物深度麻醉后，浸泡保存液保存。 薄荷脑麻醉法是将有触手的腔肠动物放入装有水的玻璃容器中，动物伸展到距离水面1cm左右后，轻轻洒在水面上使薄荷脑变成薄层(或者用纱布包裹薄荷脑，用细线卷成直径约1cm的小球，纱布球轻轻放置在水面上)，有会儿放置后最后将固定的标本转移到5荷尔陆战队员液中保存。 酒精麻醉法是在培养动物的水液中各加入95%酒精，使浓度达到10%左右，经过1数小时后，如果针刺动物发现无反应，可以迅速地浸泡在80%酒精中

4、保存，也可以浸泡在10%荷尔陆战队员液中固定保存。 线性动物及环节动物标本制作可以采用这种方法。 (2)窒息法：在玻璃瓶中放入螺丝类，放入干净的水，不留间隙，盖上瓶盖，以免瓶内残留空气。 数小时后，腹足类的头部和足部伸出明亮的口，发现不接触时，即用10%富奥尔马材料液或80%酒精固定保存。 3个身体被硬壳复盖的动物：像软体动物的瓣鳃类一样，为了打开它的壳，迅速将固定液浸入动物体内，把动物浸泡在热水中，等动物死亡的贝壳打开后，取出用清水冲洗即可。 在热水中加热时，不要放置太久(几分钟即可)。 否则，内部柔软的组织容易损坏。 如需长期保存的标本，壳厚无光泽，可以用10荷尔陆战队员液保存，但有光泽的

5、种类最好用80%的酒精固定保存，以免贝壳失去光泽。 玻片标本制作微玻璃片标本的制作方法常用的有残奥翅片切方法和整体装片法两种。应对玻璃板标本的要求，可分为临时玻璃板和永久玻璃板。 (1)切方法切方法的主要步骤有：取材、固定、清洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、补丁、脱蜡、复水、染色、脱水、透明及封堵器等步骤。 (二)装片法适用于原生动物、蝌蚪、涡虫、吸虫、绦虫节片、昆虫、昆虫外部器官和多细胞动物早期胚胎等。 定径套片材的方法与切片法相同，但不需要浸蜡后的步骤，透明后直接密封片材。 当身体柔软的动物制作装片时，成功的关键是麻醉。 像蝌蚪一样，在表面皿中放入水和蝌蚪，在完全伸展之前放入少量的薄荷脑

6、结晶，用探针触手可及，麻醉的时间可以达到数小时。 三、浸泡标本封瓶的方法(一)一些常用的保存液和固定液(二)封瓶：浸泡标本，若不需要仔细取出观察或供实习鉴别，应封口。 圆柱形标本瓶的瓶盖经过砂磨加工，可以牢固复盖的方形标本缸盖是边缘磨损的玻璃，不能牢固复盖，因此封口的方法不同。 1 .样品缸封口2 .样品瓶封口3 .包口，第二节原生动物采集和样品制作，一、原生动物采集原生动物大多有机质丰富，生活在水质腐烂、不流动的污水中。 根据水质的不同，有不同种类的原生动物生存。 寻找水源，观察水质是采集的关键。 下水沟的液面有白色膜状的展望罩，这种下水沟的草泥虫一般较多。 有绿眼虫污水沟，沟两侧呈绿色，沟

7、底为黑色污泥，有腐烂臭味，采集时撇去污水、水底黑色污垢和两侧绿色污垢。 变形虫的采集地也同样可以采集变形虫。 (1)绿眼虫1 .绿眼虫采集眼虫不流动，多集中在腐殖质多的沟渠和池塘，或积水，特别是有臭味的绿色水体。 只需用玻璃瓶装入绿色的水，采集作业就完成了。 2 .眼虫的分离纯化大多数情况下采集的样品中混有其他原生动物，因此为了得到供试用眼虫个体群需要分离纯化。 分离方法用细滴管吸取野外采集的水样，滴到载玻片上，在解剖镜或低倍显微镜下观察。 发现眼虫水滴后可进行一头地一头地稀释。 方法是用沸水加热滴管，将蒸馏的水滴吸取到有眼虫的水滴中，减少虫体浓度，用该滴管吸取该水滴。 如果虫体的浓度高的话。

8、 没有必要抽所有人的吸管。 之后，用吸水纸擦拭载玻片，用吸过上述虫体的吸管依次在载玻片上各滴几滴，检查这些个水滴，如果发现只有l只虫体的水滴，用吸水纸擦拭其他水滴。 最后用沸腾水处理后的细吸管吸取该水滴，接种装入培养液的小试管中，繁殖至一定量后，接种500m1的锥形瓶扩大培养。 如果没有特别的要求，也可以将其他原生动物和不含轮虫的多只眼虫一起放入500ml的锥形瓶中进行扩大培养。 3 .将2030g富含眼虫培养腐殖质的菜园土装入三角瓶，将水倒入瓶容积的2/3，瓶口用双层纱布包裹。 煮沸l5min，在室温下放置24h。 将分离的眼虫接种装有上述培养液的三角瓶中，用纱布填塞，将三角瓶放在直射日光接

9、触不到的窗户上，25室温下培养l0d，一般可得到大量的眼虫。 眼虫培养液的主液为： (1)冰乙酸纳米金属钍(结晶) 6g； 胰鸡蛋清蛋白胨1g； 蒸馏水1000mlpH7.3。 (2)冰乙酸纳米金属钍(结晶) 2g； 蛋白胨5克； 葡萄糖2g； 蒸馏水1000ml毫升。 (二)草履虫1 .采集草履虫喜欢生活在有机质丰富、流动缓慢的水沟和池子里，可以漂浮在水面上，可以在有枯草的地方舀水采集，采集的水样通常混杂着其他种类的原生动物和小生物，需要进一步分离培养。2 .培养(1)培养液的调制将稻草培养液未污染的稻草切成12cm的小口，以质量比(水：稻草) 100:1的比例放入烧杯中，在烧杯壁上显示水面

10、位置。 加热煮沸10分钟后，在记号中加入水，再次煮沸即可。 烧杯上复盖双层纱布，放置24小时可用于草泥虫的培养。 加热的目的：1)杀死原生动物的包囊；2 )溶解稻草中的小分子，提供营养。 24小时放置瓶盖的双重纱布的原因：1)使培养液溶解一盏茶的氧；2 )使培养液中的微生物大量繁殖，为象鼻虫提供食物。 (2)纯培养滴一滴采集液在凹玻璃中，在解剖镜下观察，用微吸管吸取多才多艺的生物，只留下一只草泥虫，再添加35滴培养液。 选择培养皿，在其中放入清水，水的深度超过凹玻璃板的厚度时进行要不得。 将凹玻璃板放入培养皿中，盖上培养皿，放入室内或人工气候箱中培养，温度25C左右。 第二天补充培养液。 第3

11、天将凹玻璃片中的草泥虫全部移入试管进行培养，随着草泥虫数量的增加，适当增加培养液，扩大培养。 (3)采集变形虫1 .采集变形虫一般生活在有机质丰富的水体中，附着在水生植物上，采集时可以同时采集水生植物的茎叶。 2 .培养(1)培养液的配制将小麦粒培养液水和小麦粒以：5060粒1000ml的比例装入烧杯中，标识牌水面，煮沸15分钟后，在标识牌处加入水，再次煮沸。 复盖双层纱布，放置24小时可用于阿米巴培养。 (2)将粗放培养用采集的茎叶用力涂抹在干净的载玻片上，不复盖载玻片，在低倍镜下观察变形虫的形态特征。 在光线暗的条件下，带有蓝色的小亮点就是变形虫。 如果发现变形虫，用吸管吸取放置24小时的

12、冷热水冲洗掉。 为了清洗前变形虫容易吸附到载玻片上，用大头针定径套敲打载玻片。 选择滴下培养液的培养皿，培养液的厚度大于载玻片的厚度，将有变形虫的载玻片浸入培养液中，盖上培养皿。 在培养过程中，载玻片两侧的培养液中可以各加入一粒小麦，以补充营养。 二、阿米巴、草泥虫、眼虫标本的制作阿米巴、草泥虫、眼虫等单细胞球原生动物适合制作装片。 (1)象鼻虫装片制作象鼻虫培养液2-3 ml、离心沉淀-加蒸馏水3-4 ml、多次离心沉淀-加肖丁氏固定液2-3 ml、2-3小时固定、在离心沉淀中加入50%醇5-10分钟后沉淀-70%醇3-4 ml、3-4 ml 浸染1小时，50%醇3-4 ml，离心沉淀- -

13、加入50%醇1分钟后离心沉淀-碱醇(70%醇试剂氨水0.5 ml)2-3 ml，色分解1分钟后离心沉淀90%醇34ml，2分钟后离心沉淀-纯醇为了进一步观察，必须用吸管吸取颜色深的部位的水样，在载玻片的中央逐滴滴下，之后，在盖上盖玻片后，用吸水纸吸取多馀的水，从而能够进行显微镜观察。 首先要用低倍镜观察，滴下的水样尽量少，眼虫活动要慢，注意观察方便；或者在载玻片上的水样液滴中放入几根棉花纤维，限制动物的运动。 眼虫的鞭毛不染色也能看到，但需要光线稍暗一些好好观察，鞭毛的摇晃很常见。(三)变形虫制片实验室常用的方法有直接涂片法、直接沉淀法、离心沉淀法、碘元素液染色法和苏木精染色法，具体制作过程可

14、参考草履虫的制片。 (四)草泥虫分裂生殖装片制作1 .草泥虫分裂虫体的培养。 用细密的面团儿过滤培养的虫体液，在过夜的1%稻草水溶液中，加入适量的酵母水溶液，丰富食材，精置培养。 2 .虫液清澈。 每100ML培养液加入4%矾土水溶液0.4-0.6ML，搅拌静置，使虫液中的杂质和溶解状态的凝胶沉淀。 3 .固定、脱水银。 慢慢倒入澄清的虫液，每100ML虫液加入预备固定液10ML，静置数分钟。 将预固定的虫液用250目的过滤网过滤，除去水分，除去筛子底，用大头针定径套夹在固定液反复颤抖，用吸管清洗，将虫体落入固定液，固定数小时至24小时。 将固定的虫液放入250目或300目的小型过滤筛中，装入

15、装有95%体积分数酒精的大型称量瓶中，滴下数滴碘元素液脱汞。 碘元素液失去颜色后，适当滴下，如果碘元素液不退色，就会完成脱汞。 制片人。 染色、脱水、透明及浸渍等普计程仪柱全部用上述小型过滤筛操作。 (1)核染色。 (2)脱水及细胞质再染。 (3)透明及浸渍剂。 排成(4)列。 (5)封装片。 第三节腔肠动物的采集和标本制作，一、腔肠动物的采集1 .蝌蚪(1)采集时间和地点：选择春秋两季，天气好的日子，在蝌蚪的生活环境(水流慢，水质干净，水草茂盛的池塘和溪流)中寻找。 夏冬两季，在受污染的水域和水流湍急的地方，采集蝌蚪是很困难的。 采集方法：站在水边仔细寻找，不能动水草，不能入水。 在水草中发

16、现蝌蚪后，可以用广口瓶在远处舀池水，然后用大头针定径套轻轻地取出带有蝌蚪的水草，装入瓶中。 (2)在培养蝌蚪的玻璃缸上盖上玻璃罩和纱布，以防止灰尘和昆虫掉落。 每隔两天用吸耳球向缸体的水中吹入空气，用玻璃棒轻轻搅拌缸体内的水，使水内有一定量的氧气。 请将玻璃缸放在避开直射日光的位置，同时注视阳光。 藻类培养法：在大玻璃缸中加入自来水放置24小时以上。 取出池子和排水沟中带有绿藻的水，用离心分离机收集绿藻，制成块，放入玻璃缸。 将牛肉、蚌埠肉、螺肉用水煮沸10分钟，用冷水洗净数次后，放入玻璃缸。 把鱼虫放在玻璃缸里。马粪水培养法：以马粪1千克，泥土2千克，水1500毫升的比例，在容器内加入泥土，

17、加入马粪，加水1500毫升，保存于1518，放置15天左右，在云同步上取出一部分马粪水，加水510加倍，加入鱼虫。 如果采用这样的培养液，请注意立即更换水。 特罗尔节水温。 限制喂食量。 2、海葵是海生腔肠动物，我省舟山沿海的海涂、海边岩礁上栖息着泥涂海葵、砂栖海葵、红海葵等多种海葵。 在海水中，蓝藻的身体和触手伸长，受到刺激后全身收缩成块。 (1)采集：锦葵基部的附着力极强，与岩石的粘贴牢固，因此很难徒手采集完整的标本，采集时将其与固定的岩石的一部分一起用尖头刀取下。 采集海葵的时候带上装水的容器，把采集的海葵放入装海水的容器带回去。 (2)观察：采下葵青后，放入玻璃缸，静置有会儿，身体无损伤则伸躯干，伸出触手。 此时是观察的好时期。二、蝌蚪、水母、海葵标本的制作1 .蝌蚪浸渍标本的制作是首先用吸管将蝌蚪移至表面皿或培养皿内，伸出触手后，从蝌蚪的后端向前端迅速喷射加热后的疣液，杀死蝌蚪， 之后将蝌蚪转移