法医物证学 第8章 血清型.ppt

1、第八章，血清类型，在第一节中概述。根据不同的分型原则，血清蛋白类型的分类和命名可分为两类：1异型遗传标记是指属于同一属的不同个体之间血清蛋白抗原性的差异，可通过特异性抗血清进行分类。包括免疫球蛋白Gm、Km、Am和低密度脂蛋白。这些血清型的名称主要由抗原所在肽链的名称和抗原编号组成。例如，Glm(1)抗原表示该抗原位于免疫球蛋白IgG1重链的1号抗原上，血清蛋白电泳多态性的遗传标记是指不同个体血清蛋白电泳特性的差异。由血清蛋白多肽链中某些肽段或单个氨基酸的差异引起的多态性的名称通常是蛋白质的缩写名称加上代表等位基因的数字或字母。例如，用于HP1-1、2的法医鉴定的血清型在电泳性质上大多是多态性

2、的，需要通过凝胶电泳进行分型。分型原则是不同表型的蛋白质在一级结构上存在差异。分子量和等电点不同，在电场中的迁移率也不同。根据蛋白质条带的位置，可分为淀粉凝胶、SDS聚丙烯酰胺凝胶和等电聚焦。，法医学的应用价值：它在斑点鉴定中起着重要的作用，并逐渐被DNA分型技术所取代。与DNA遗传标记相比，血清蛋白多态性具有较低的基因重组率和突变率，在亲子鉴定中仍然存在。HP1-1型电泳条带成分单一，移动速度最快。HP1-2型和HP2-2型在靠近正侧由多个组分组成，它们的电泳迁移率小，带浓度向负侧逐渐降低。这种类型的特征在于，区域11中的电泳带被分成两条，并且负侧带增加到Hp2-1变体5 HpK1。这种类型

3、的特征在于，区域11中的电泳带被分成两条，而其它区域中的无蛋白带是Hp1-1变体。图1聚丙烯酰胺凝胶不连续圆盘电泳示意图(A为前侧，B为截面)1样品凝胶pH6.7 2浓缩凝胶：它是一种大孔凝胶。凝胶缓冲液ph 8.9，Tris-HC14电极缓冲液pH8.9，Tris-甘氨酸缓冲液ph 8.3。(1)普通类型可用聚丙烯酰胺凝胶盘电泳进行分类。电泳前，待测样品与血红蛋白形成HpHb复合物。电泳后，血红蛋白的过氧化物酶活性可用于在过氧化氢存在下将联苯胺氧化成联苯胺蓝。血痕的分型效果不理想。Hp血痕稳定，储存时间长(18个月)。然而，由于血痕中的大量血红蛋白仅与Hp结合，它们大部分以游离形式存在，Hb

4、在电泳凝胶中占大多数。联苯胺染色时，过多的血红蛋白会掩盖Hp的电泳谱，使其无法打字。(2)幽门螺杆菌亚型的等电聚焦电泳分型首先对样品中的幽门螺杆菌进行纯化，然后对幽门螺杆菌组分中的肽链进行变性，还原后可通过普通电泳或等电聚焦技术进行分型。考马斯亮蓝染色免疫印迹电泳后，可通过蛋白质印迹和酶联免疫吸附试验检测人尿中常见的幽门螺杆菌。，免疫电泳，IEP)是一种结合了区域电泳和双向琼脂扩散的免疫化学。原则上，首先，待检测的样品在琼脂凝胶中电泳。由于电荷、分子量和分子构型的不同，以及在电场作用下不同的游动速度，不同的抗原组分被分成不同的区域。然后，平行于电泳方向，挖一个小槽，加入含有相应抗体的免疫血清，

5、与琼脂中分离的抗原成分进行双相免疫扩散，每个区域与相应位置的抗体形成沉淀弧。根据沉淀弧的数量、位置和形状，可以分析样品中的抗原成分及其性质。免疫电泳具有很高的分辨率，可以分离人血清中的2030种抗原成分用三甘氨酸缓冲液作为电极溶液，在3mA下电泳2小时。Gc位于白蛋白和转铁蛋白之间。等电聚焦电泳可检测Gc亚型，以浓度为5、交联度为3的聚丙烯酰胺凝胶为支持介质，两性介质的酸碱度为4.55.4，电压为500伏，样品加至离负电极10毫米处，电泳1小时。电泳后，用抗Gc血清进行免疫固定，蛋白染色后观察结果。第4节血清粘蛋白样，血清粘蛋白样(ORM):它是一种具有遗传多态性的糖蛋白，存在于人的血液、体液

6、和分泌物中。1.ORM的生化特性和生物学功能是由肝脏和淋巴细胞合成的，血清中的含量为0.61.2克/升.ORM是人类血浆蛋白中含糖量最高、酸度最强的糖蛋白。ORM的肽链结构富含脯氨酸，具有较高的稳定性和耐热性。人类ORM蛋白是一个含有183个氨基酸残基的单肽链。主要有两种分子，ORM1和ORM2，它们具有微观异质性：每个ORM1分子连接五个糖侧链，糖侧链是双支链、三支链或四支链的复合糖链。同一个体的同一个ORM1分子具有不同的糖侧链，并且在电泳过程中呈现六个以上的蛋白质条带。微异质性与氨基酸序列无关。经唾液酸酶处理后，侧链差异被消除，具有相同氨基酸序列的ORM1分子在电泳时显示出蛋白质条带。在

7、感染和肿瘤发生过程中，患者血清中ORM含量显著升高。因此，它被认为是炎症的急性期反应蛋白。ORM具有免疫调节功能，通过抑制免疫反应来调节免疫系统。其次，遗传和等位基因命名基因位于人类9号染色体的长臂上，并且ORM1和ORM2位点紧密相连。ORM编码区包含三个相邻的基因簇：AGP-A、AGP-B和AGP-Bp。AGP-A代码ORM1，AGP-B和AGP-Bp代码ORM2。根据孟德尔定律，由普通等位基因遗传的ORM1位点在所有人中都具有遗传多态性。ORM1上有共显性等位基因：ORM1*F1、ORM1*F2和ORM1*S，它们决定了6种表型。ORM2基因座仅在少数人群中显示多态性，其显性等位基因OR

8、M2*M为显性，通常产生纯合表型ORM2。同一个体血清中ORM1蛋白的含量约为ORM2蛋白的3倍。在等电聚焦电泳中，ORM1染色深，ORM2染色浅。3。群体遗传学调查结果：在调查人群中，ORM1*F1和ORM1*S的基因频率均大于0.01，且ORM1在所有人群中都具有遗传多态性。ORM2*H19变异体在东南亚人群中经常被检测到，其频率仅次于ORM2 * m。由于ORM2基因座的基因频率分布不佳，沉默基因ORM2*Q0较为常见，且ORM2基因座的表达产物含量仅为ORM1的1/3，ORM2分型的法医学价值不如ORM1分型，其法医学应用价值如下：肽链结构富含脯氨酸，可在血清、血痕、精液和精囊腺中检测

9、到ORM1。第五节免疫球蛋白同种异型，同种异型：指同一属不同个体间免疫球蛋白抗原性的差异，由免疫学方法确定。抗原性可分为同型、异型、独特型、异型。不同个体轻链或重链氨基酸序列的细微差异导致免疫球蛋白抗原决定簇的差异，这种差异仅限于轻链和重链的恒定区。除G1m(3)和G1m(17)位于IgG1的FD段外，其他Gm因子位于IgG重链的Fc段，而Km位于轻链。免疫球蛋白同种型的命名和遗传，1命名原则标记名称：位于igg1、IgG2、IgG3、IgA、IgE和轻链的同种型的遗传标记(因子)分别用G1m和g21标记让每个因子在遗传标记上的位置一目了然。抗原名称：标记名称(抗原编号)，如G1m(1)，G1

10、m(3)，A2m(2)，表型：标记名称(抗原编号，按照IgG亚类从1到3的顺序，同一亚类上的同素异形用“、”分隔，不同亚类上的同素异形用“、”分隔)Gm(1，3；5)、Gm(1，2，3；5，21)基因型或单倍型：标记基因(上标)，数字表达与表型相似，两条染色体上的基因用“/”Gm1，3分开；5/Gm1，3；5 Gm1/Gm1，2；21、2免疫球蛋白同素异形体的遗传，重链或轻链同一位置有不同氨基酸的同素异形体是由常染色体共显性基因遗传的，如G1m(3)和G1m(17)、Km(1)和Km(3)，基因的表达有等位基因排斥。尽管杂合子的两个等位基因同时表达，但任何免疫球蛋白分子都只是一个同种异型。由于

11、一个B细胞只能表达一个等位基因，这被称为等位基因排斥，因此，1 Gm型的遗传是常染色体共显性遗传(同一重链中相同的氨基酸位置)和单倍型遗传(同一重链中不同的氨基酸位置)。Gm系统中决定IgG1亚型的四个主要等位基因是G1m1，17，G1m1，2，17，G1m1，3和G1m3。IgG2含有G2m23和G2m23-。IgG3上有许多同种异型。根据三个群体的遗传调查，单倍型频率在不同种族和地区之间差异很大，Gm因子的分布明显不均匀。有些单倍型存在于所有种族中，但频率不同。有些单倍型只存在于某些种族中，而有些则不存在。白人没有1的单倍型。亚洲和黑色单倍型都携带1。两种黑色单倍型都携带1和6。四种检测方

12、法，血凝抑制试验、酶联免疫抑制试验、血凝抑制试验，原理：D()的红细胞可被抗D抗体致敏，因为抗D上的Gm抗原可与相应的抗Gm抗体发生反应。在测试血清与抗Gm抗体反应后，加入致敏的红细胞。凝集：(-)表示血清不含待检测的Gm抗原，抗Gm抗体未被中和，可与被含Gm因子的免疫球蛋白致敏的红细胞凝集。无凝集： ()表示血清含有待检测的Gm抗原，该抗原中和抗Gm抗体并抑制其与被含Gm因子的免疫球蛋白致敏的红细胞凝集。酶联免疫吸附试验，酶联免疫吸附试验-1，首先用待测血清与相应的单克隆抗体反应，然后用酶联免疫吸附试验。如果待测血清含有与单克隆抗体相应的同种异体抗原，则在抗原抑制相应抗体后，ELIAS试验结果为阴性。是针对酶联免疫吸附试验-1阳性反应。根据法医应用评估，Gm和Km系统的个人识别率和非父系排除率高于已知的红细胞类型、红细胞酶类型和其他血清型。