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文档简介

1、聚合酶链反应原理(Polymerase Chain Reaction，PCR)，这使得PCR反应自动化。1993年，Kary Mullis发明了PCR技术，通过诺贝尔化学奖1995年定量PCR的诞生，定量研究了DNA靶标序列，创造了PCR技术的诞生和发展，Kary Mullis，PCR反应原理和反应过程。(a) PCR基本成分：模板DNA引物4种脱氧核糖核苷酸DNA聚合酶其他(Mg2，化学物质等)(b) DNA的体外克隆阶段：1，变性(90-96) 2，退火(25)，2，renaturation(退火，退火)，系统温度降低，引物和DNA模板相结合，形成局部双链。影响复性速度的因素：DNA浓度D

2、NA片段的大小DNA片段的复杂性适当的复性温度适当的离子强度，3，扩张，Taq酶(约72，活化效果最好)的作用下，以dNTP为原料，从5段3段开始延伸。常用荧光定量PCR方法，SYBR Green I Taqman水解探针，SYBR Green I，与双链DNA相结合的小沟部分只有与双链DNA相结合才能发出荧光，SYBR和dsDNA相结合，受到刺激后才能发出绿色荧光，SYBR Green荧光定量PCR与现有PCR的区别，常规PCR技术对PCR扩增的最终产物进行定性和定量分析荧光定量PCR技术，在PCR扩增反应中，各循环的产物定量分析，Ct与初始模板的关系，固定周期数后荧光信号与模板数成正比固定荧光信号值成正比，模板数与周期数成反比，初始DNA杨怡增多。荧光达到阈值所需的循环数(Ct值)越少，开始模板的对数浓度与Ct线性相关，可以根据示例的Ct值计算示例中包含的模板量。实时

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