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文档简介

1、实验 菜花DNA的提取及二苯胺检测,一. 实验目的,学习DNA提取的原理及方法。 掌握二苯胺方法检测DNA 。,二 .实验原理,在浓NaCl（12M）溶液中，DNA溶解度大，RNA溶解度小； 在稀NaCl（0.14M）中，DNA溶解度小，RNA溶解度大， 因此可利用不同浓度的NaCl溶液将DNA和RNA从样品中分开。 SDS可将核蛋白分离出来,二苯胺鉴定DNA的化学原理 DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成-羟基-酮基戊醛，它再和二苯胺作用而呈现蓝色(溶液呈浅蓝色)。鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关。,提取注意事项 减少物理因素对DNA的降解。动作轻柔缓慢，尽可能不要剧烈振

2、荡或搅拌.,三.实验试剂,1，5mol/L NaCl溶液; 2， 0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA-Na溶液; 3，25% SDS 溶液； 4，24:1 氯仿异戊醇混合液； 5，3mol/L 乙酸钠0.001mol/L EDTA-Na溶液； 6，95%乙醇； 7，二苯胺试剂：A液：1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加入1.5ml浓硫酸 ； B液：0.2%的乙醛,四. 实验步骤,（一）DNA提取 1，称取 菜花5g,用水清洗后，加入一勺石英砂粘磨,再加入10ml 0.14M/LNACL-0.15MEDTA该溶液，继续研磨至浆状， 2，上述研磨液加入1毫升，保温，分钟（不停搅拌）至溶液变粘稠。 3，上述溶液加入的NaCL溶液5毫升，搅拌2分钟，再加入氯仿异戊醇5毫升，振摇2分钟(轻微），分装2-4管，平衡后5转离心 3 分钟，取上清液。 4，上清液加入2倍体积的冰冻乙醇，用玻棒慢慢转动，可看见缠绕在玻棒上 5.待DNA略干燥后，溶于2ml水。,（二） 二苯胺法检测DNA,1.在鉴定DNA时，可用二苯胺试剂直接滴在玻棒上的丝状物上，呈现蓝绿色，即证明DNA的存在. 2.按照以下表格添加 沸水浴加热10分钟，冷却后观察颜

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