第1节高效液相色谱的特点与仪器.ppt

1、2020/7/25,第三章高效液相色谱分析,一、高效液相色谱仪 HPLC 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC,第一节高效液相色谱的特点与仪器,high performance liquid chromatograph,feature and instrument of HPLC,2020/7/25,一、高效液相色谱法的特点,特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。,2020/7/25,二、液相色谱仪器 high performance

2、liquid chromatograph,2020/7/25,液相色谱仪（2）,2020/7/25,液相色谱仪（3）,2020/7/25,液相色谱仪（4）,2020/7/25,液相色谱仪（5）,2020/7/25,三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC,1.流程,2020/7/25,1贮液罐（滤棒，可滤 去颗粒状物质） 2高压泵（输液泵） 3进样装置 4色谱柱分离 5检测器分析 6废液出口或组分收集器 7记录装置,2020/7/25,2.主要部件,(1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150350105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固

3、定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性,2020/7/25,(2) 梯度淋洗装置,外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。,内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。,2020/7/25,洗脱方式,1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 类似GC的等温度洗脱 2）梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类 和比例 即不断改变其极性（两个泵

4、） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品）,2020/7/25,2020/7/25,(3) 进样装置,流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：,2020/7/25,(4) 高效分离柱,柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。,2020/7/25,(5) 液相色谱检测器,a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线性范围宽； 流通池可做的很小（1mm 10mm ，容积 8L）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗

5、脱。,2020/7/25,b. 光电二极管阵列检测器,紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。,2020/7/25,2020/7/25,光电二极管阵列检测器,2020/7/25,c. 示差折光检测器（differential refractive index detector）,除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；,通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种；,2020/

6、7/25,示差折光检测器,2020/7/25,d. 荧光检测器（fluorescence detector）,高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；,2020/7/25,请选择内容,第一节 高效液相色谱的特点与仪器 feature and instrument of HPLC 第二节 基本原理与主要分离类型 basic principle and main separating type 第三节 固定相与流动相 stationary phase and mobile phase 第四节 影响分离的因素与操作条件选择 factors influenced separation and choice of o