动物细胞融合和单克隆抗体(终极浓缩版).ppt

1、动物细胞融合和单克隆抗体,知识回顾,？,再分化,一、原理： 细胞膜具有流动性 细胞的全能性,二、诱导方式： 物理法、化学法,三、用途： 获得杂种植株,2.过程：,1、动物细胞融合的基本原理是什么？,2、动物细胞融合的诱导方式是什么？与植物细胞融合的诱导方式有什么不同？,？,？,？,用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程,2.过程：,.原理：,与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。,.诱导方式：,物理法：,电激、振动、离心,化学法：,聚乙二醇（PEG）,生物法：,灭活的病毒,例如：仙台病毒,打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 广泛应用多个学科领域； 重要用途：制备单克隆抗体。,3.意义

2、和应用：,思考：,动物细胞融合过程和植物体细胞杂交有何不同？,植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,细胞膜的流动性 细胞的全能性,细胞膜的流动性,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇）,物理、化学方法（同左） 灭活的病毒,获得杂种植株,？,？,？,？,制备单克隆抗体,三、单克隆抗体,1、抗体是由何种细胞产生的？,浆细胞（效应B细胞）,2、抗体是如何产生的？,B淋巴细胞,抗原,增殖分化成浆细胞,3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体？,一种,知识回顾,思考：,1、传统的方法得到的抗体具有什么特点？,特异性差、产量和纯度都很低。,三、单克隆抗体

3、McAb,1.概念：,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点： 特异性强、灵敏度高,思考：,1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？,不可能,2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？,癌细胞,3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？,细胞融合,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖,杂种细胞,动物细胞培养技术,、实验原理：,动物细胞融合,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖,播放科学家的单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体

4、的细胞群,单克隆抗体,注意观察细胞的种类,诱导融合,选择培养基,筛选，继续培养 克隆能产生抗体的阳性细胞,体外培养否或小鼠腹腔内增殖,动物细胞融合,动物细胞培养,二、单克隆抗体,2、单克隆抗体制备过程-流程图,B淋巴细胞（免疫）,杂交细胞,杂交细胞（ B-瘤细胞）,单克隆抗体,杂交瘤细胞,瘤-瘤细胞 B-瘤细胞 B-B细胞,2、单克隆抗体制备过程,思考,二、单克隆抗体,(1）什么是免疫的小鼠?怎样对小鼠进行免疫？ (2)图中的B淋巴细胞有何功能？骨髓瘤细胞有何功能？杂交瘤细胞有何特点？ (3)怎样才能将B细胞与骨髓瘤细胞融合？ (4)融合后可能有几种类型的细胞? (5) 两次筛选的目的是什么？

5、 (6) 培养杂交瘤细胞的方式有哪两种？ (7)制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,四、单克隆抗体的应用,可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点 可用于疾病治疗 可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹“。） “生物导弹”单克隆抗体药物,细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合,浆,筛选,瘤细胞,杂交,细胞培养,选出能产生特定抗体的细胞群继续培养,体外培养,体内培养,从培养液或小鼠腹水中取出,单克隆抗体,本节小结,两个过程,动物细胞融合过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法,一个新细胞,一个优势,灭活病毒,杂交瘤细胞,单克隆抗体特异性强、灵敏度高 的优势.,练习：

6、,1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较， 在动物细胞融合中有特殊性的是（ ） A、融合的原理 B、融合的优点 C、融合的诱导手段 D、融合的过程,练习：,2、动物细胞融合的目的中最重要的是（ ） A、克服远缘杂交不亲和 B、制备单克隆抗体 C、培育新物种 D、生产杂种细胞,练习：,3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合， 得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗 体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A、经过免疫的B淋巴细胞 B、不经过免疫的T淋巴细胞 C、经过免疫的T淋巴细胞 D、不经过免疫的B淋巴细胞,练习：,4. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选

7、出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融 合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,练习：,5、(2006，广雅中学考题)研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（ ） A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合,练习：,6只能使动物细胞融合的常用诱导方法（ ） APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心 7、“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单抗上连接抗癌药物,3.

8、下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：。,（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。 （2）B过程是一个_过程，该过程的进行需要灭活的_或_的诱导。,效应B,抗体,抗原,细胞融合,病毒,聚乙二醇,4、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。,（1）_技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用_。 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具

9、备淋巴细胞的_特点。 （6）淋巴细胞是由动物体_中的_细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。,动物细胞培养,选择,特异性强,灵敏度高,灭活的病毒,在体外大量增殖,分泌特异性抗体,骨髓,造血干细胞,主动运输,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。,(2)、该方案能达到预期效果吗？为什么？,(4)、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,(1)、该实验方案的目的是_,(3)、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_,( 5)、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段。,制备单

10、克隆抗体,已免疫B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,B,体外培养,足够数量的细胞群,A,C,不能 因为没有抗原注入小鼠体内,无法获得产生此抗体的效应（免疫的）B细胞.,注射到小鼠腹腔,自我评价,第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。 第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。 第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。,实验评价,1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠,2、B淋巴细胞,3、选择培养基,4、必须经过专一抗体阳性检验,下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。,1、动物细胞工程技术的基础是？ 2、动物细胞培养的原理？过程？分散细胞的方法？ 3、原代培养？传代培养？10代、40-50代、50代以后细胞的特点？ 4、动物细胞培养的条件？动物细胞培养技术的应用？ 5、动物细胞核移植过程？应用？ 6、动物细胞融合的原理？诱导融合的方法？特有的