真菌感染与实验室诊断进展_ 李若瑜.ppt

1、全国基层医疗机构抗菌药物合理应用,培训项目,常见病原真菌,李若瑜 北京大学第一医院 北京大学真菌和真菌病研究中心,真菌感染的分类,根据真菌侵犯人体的部位分为四类： 浅表真菌病 皮肤真菌病 皮下组织真菌病 系统性真菌病,浅部真菌病,深部真菌病,临床常见的真菌病,浅表真菌病： 花斑癣 掌黑癣 毛结节菌病,皮肤真菌病： 皮肤癣菌病 手足、体股、头、甲 皮肤念珠菌病,皮下真菌病： 孢子丝菌病 着色芽生菌病 暗色丝孢霉病 足菌肿,系统性真菌病： 念珠菌病 曲霉病 隐球菌病 接合菌病 双相真菌感染,浅部真菌病,限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。 主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。 大多轻微，容易

2、诊断，对治疗反应良好。,手、足、甲癣最常见的真菌病,各种头癣：传染、危害健康,皮下真菌病往往经过外伤发病,孢子丝菌病,着色芽生菌病,系统性真菌病,常起源于肺，可以播散到全身许多器官。 常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病菌腐生于土壤或腐败有机物中，或作为植物致病菌。 病原体可分为两组：真正的致病菌和条件致病菌。,系统性真菌病危及生命,系统性真菌病主要的致病真菌,荚膜组织胞浆菌 粗球孢子菌 皮炎芽生菌 巴西副球孢子菌,临床常见的条件性真菌感染,念珠菌病: 最常见，血源感染的第4位。 曲霉菌病: 常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。 隐球菌病: 艾滋病人患病率为10-20%。 接合菌病（

3、毛霉病）:多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。,临床有增多趋势的条件性真菌,非白念念珠菌感染 毛孢子菌感染 地霉感染 镰刀菌感染 枝顶孢霉感染 暗色真菌感染 马尔尼菲青霉,真菌感染的诊断方法,真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学,真菌感染的实验诊断方法及问题,显微镜检查-阳性率？ 培养-时间？敏感性？意义？ 血清学-敏感性？特异性？ 分子生物学-标准化？,组织病理学,阿申蓝染色,H39:199-205,侵袭性真菌感染中葡聚糖检测,AML, MDS Receiving antifungal prophylaxis,Cut off 60 pg/ml,Clin Infe

4、ct Dis 2004;39:199-205.,30,30,with candidemia,control subjects,侵袭性真菌感染的葡聚糖检测 Fungitell assay,检测曲霉半乳甘露聚糖抗原的 EIA 方法（Platelia）,检测位于曲霉细胞壁上的 galactomannan,（GM） 3. Detection avidin-enzyme + substrate 2. Detecting Ab anti-galactomannan biotin conjugated Ag blood, urine, BAL 1. Capture antibody monoclonal a

5、nti - galactomannan,Specificity = 90% sensitivity = 75%,Platelia Aspergillus EIA 结果判断,曲霉的GM 抗原检测,乳胶凝集试验（Pastorex） (15ng/ml) 酶连免疫吸附试验（Platelia） (1ng/ml),Sabetta et al. JID 1985; 152: 946 Ansorg et al. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1994; 13: 582 Verweij et al. JCM 1995; 33: 3150 Maertens et al. Bloo

6、d 2001; 97: 1604 Herbrecht et al. J Clin Oncol 2002; 20: 1898,GM 抗原,GM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断,与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。 检测方法有ELISA、放射免疫分析（RIA）和乳胶凝集试验等。 Platelia试剂盒采用ELISA方法，敏感性80%，特异性80%。儿童假阳性10%。 Cut-off值影响结果0.5:早期诊断,特异性差;1.5:特异性提高。可动态观察。 Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berl

7、in,曲霉感染检测的影响因素,半乳甘露聚糖在血中存在时间短，建议： 高危人群每周至少检测2次，动态观察 结合影象学、培养结果综合分析诊断,假阴性,假阳性,哌拉西林/他唑巴坦 与其它细菌或真菌成分有交叉反应 肠道中定植的曲霉释放GM进入血液循环 含有谷物的食物中存在GM抗原，通过受损肠黏膜进入血循环导致抗原血症，化疗后出现严重黏膜炎的更易发生,检测真菌DNA的PCR试验,标本： 全血 血清 活检组织 BAL CSF,不同方法： DNA 提取 PCR 设计 产物检测,PCR,PCR技术用于诊断,种特异-PCR 非特异 PCR 杂交,Standart single nested PCR-EIA Re

8、al-time,标本 全血 血浆 血清 BAL,最低检测范围 4-10 cfu/ml 25-100 fg DNA,原位杂交,目的基因 多拷贝基因,PCR过筛试验诊断IA,每周监测2次通用引物; 确定采用巢式和实时定量; 敏感性100%,特异性65%; 早于临床症状2天,早于确诊9天; 动态观察持续阴性可排除;,Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berlin, Germany.,Jun Zhao et al. JCM 2001,Nested PCR in Animal Models,余进

9、，等。中华检验医学杂志，2003,种特异引物巢式 PCR扩增烟曲霉rRNA基因,动物模型中巢式PCR方法检测的灵敏度,灵敏度=77.8%,余进，等。中华检验医学杂志，2003,突破方向,对基因组序列和功能的了解，找出特异处 改进目前方法，提高敏感性 Real-time PCR 多重PCR 芯片技术 其它特异抗原,DNA 微阵列,芯片、探针: Candida spp. Aspergillus spp. 临床标本: 10-20 cfu/ml body fluid PCR electrophoresis: 75.6% DNA microarray: 87.9% Zhu et al. AAA. San Francisco, 9-12th September 2004,真菌非培养诊断小结,在诊断侵袭性真菌感染有一定价值，尤其早期诊断和疗效监测 理想的检测方法很少 隐球菌乳胶凝集 曲霉ELISA Glucan PCR方法有待验证 多次取材重要 结合临床表现、真菌学等传统方法和影象