31例B型血友病患者FⅨ基因突变研究.doc

1、 南方 医 科大学 级 硕 士学位 论 文 师 首 次 建 立了 基因 突 变 数据 库【 俊壳 白 钚 路 嫉 腇 源 双 链 分析 的直 接诊 断 方 法 有 变 性 梯度 凝 胶 法 、单 链 构 象 多态 性 等 。 对于 无 家族 史 或先 证者 的散发 病 例 和 携 带者 进行基因 诊 断 和产 前 诊 断 ，即 使 利 用 多态 性 位 点 的连 锁分析 方 式 也 会 出现无 法 诊 断 的现象 。 当运用 、 等 直 接检测方 法 发现有 异常 时，仍 需 要 进一 步 进行基因 序列分析 以 确定具体 突 变 【 】，且 等 方 法 都存 在复 杂 费 时且 敏感 性 低

2、等 问 题 。 近年 来 ，随 着 际醯 牟欢 铣墒旒癋基因 较小 及 其他 相 关 因 素 等 原 因 ，国 内外 许 多研究组 对 患者 的基因 诊 断 采用 全基因 测序的方 法 取 代 他 法 ，均 取 得了析 ，得出突 变 具体 位 置、类型 、氨 基酸改 变 。 例 患者 基因 突 变 检测及 分析 ， 材 料 与方 法来 自 南方 医 院 血液 科及 妇产 科门 诊 ， 个 无 亲 缘 关 系 家系 中 的 例 患者 ，临 床均 有 不 同程 度 的出血 现象 ，且 所 有 患者 的 钚 中 H 赝 槐 洌 例 为双 重 突 变 ，此 外 还发现 种新突 变 ，为国 际上首 次

3、瓹 双 核 苷 酸区 域 是突 变 热 点 。 琲 ， 瓼 瓵 甌 硕 士学位 论 文 甈 瑆 。 甊 ， 琲 琣 瓺 瓸 瓵 狝 瑆 瑆 痶 甌 琤 琽 弋 。 ， 珹 瑃 ， ， 琣 瓻 甅 甌 篋 目第 路 治 鎏致邸 目 血友病 是一 组 遗 传性 凝血因 子缺乏 症 引起 的出血 性 疾 病 ，最常 见 的分型 包 括 脱 S巡 虰 型 血友病 ，男女均 可 发病 ，但 绝大多数患者 为男性 。 在男性 血友病 患者 中 ， 占 ，而 仅占 。 临床上以关节、肌肉 和 内 脏 自 发性 或者 外 在创伤 后 出血不 止为主 要 特 征 ，截至 目 前 为止主 要 的可 靠 治 疗方

4、法 为血浆替代 疗法 以 预防 和 控 制症 状 。 随 着 分子生 物 学的持续发展 ，研究的不 断 深 入 ，基因 治 疗为根治 血友病 带来 了希 望，并 在临床应用中 取 得成 效 。 基因 诊 断 为血友病 的确诊 提 供 了依 据 ，是基因 治 疗的基础，同时基因 产 前 诊 断 也 为降 低血友病 患儿 的的出生 率 ，提 高 人口 素 质起 到 了显著而重要 的作 用 。常 见 血友病 。 在男性 中 的发病 率 大约 为 ，女性 患者 罕见 ，但 也 可 出血，是来 源 于 后 天的自 发基因 突 变 。 参 与 血液 的 凝 血途 径 。 硕 士学位 论 文象 改 变 、与

5、其他 因 子结合 能力 下 降 和 催 化 活 性 降 低等 严重 后 果 。 临床表 现为任意 功 能区 的功 能障碍都有 可 能导 致凝 血障碍的发生 ，引起 机体 出血 或出血 不 止。 鞍 资怯 蒄 基因 的 鐾庀 宰颖 嗦 耄 直 鸨嗦 氲 鞍 椎 个 主 要 结构 域 ，其中 外 显子 嗦 胧杷 孕 藕烹 遥 ，可 引导 合成 的蛋 白 分泌 至 血液 中 ；外 显子 编 码 一 段前 导 肽 玪 虶 结构 域 【 一 个 和 其他 国 家的协调员 建 立了 一 个 极 性 降 低的机制为：这种突 变 形成 的产 物 是带有 个 氨 基酸的前 肽 的因 子，这 但 适 当 的分隔

6、或配合 好 的相 同序列可 不 造成 明显的剪接改 变 。 剪切位 置的序列 疶 ， 瓽 糀 久 璆 疶 疓 缺失 ， ， 故 它 珼 此 法 是 与 杂 且 可 明确突 变 位 置，操 作 简 便，重 复 性 好 ，较其他 方 法 有 较大优 越性 。 用 本 法 准 确的特 点 。 它可 用 于 基因 的测序，突 变 的检测，基因 多态 性 的分析 等 ，使 血 珻 直 接诊 断 方 法 一 般 需 要 知 道 引起 疾 病 的基因 ，对于 一 些 致病 基因 还不 清 楚 ，或者 用 以 上方 法 检测困 难 的疾 病 ，直 接进行突 变 检测费 时费 力。 同时，许 多情况 下 ，临

7、床上只 需 要 进行携 带者 诊 断 而无 需 确定具体 突 变 性 质，此 时用 间 接连锁分析 法 更 为实 际可 行。 基因 间 接诊 断 主 要 是通过 与疾 病 基因 连 锁的多态 性 遗传标志 分析 检测疾 病 的。 ， 死嗷 蜃 橹校 贒 的高变 区 广 泛 存 在一 系 列串联 重 复 序列，长 约 ，不 同个 体 中 串联 序列拷 贝 数 ， 是二态 遗 传变 异，通过 基因 组 内 特 定目 前 筛查 基因 突 变 的方 法 有 以 上数种，但 大多都费 时且 敏感 性 较低，或需要 具有 完整的家族 史 以 及 先 证者 ，经这些 方 法 检测若 发现异常 ，仍 需 基因

8、 序列先 选 择方 法 。 本 研究根据 文 献 设 计合 成 引物 ， 个 外 显子及 其侧翼 停 鹿 鶨 公 司 。 撼 上褚牵篏 停 鶶 公 司 。 汕 头 市 化 工 厂 ，定容括 ， 取 硕 士学位 论 文 一 设 计并 合 成 引物 研究方 法 虺恋 碇 屑 洗涤液 鑫 姓 竦雌魃 铣浞中 恋 恚 离心 胫 樱 钠 锨濉 胄墓艿 怪迷 谖 缴 掀 蹋 谋 艄艿 壮 恋 沉公 式 为： 放 核 酸稀 释 倍 数 。 握 瘴 南咨 杓 撇 铣 对扩 增 引 硕 士学位 论 文 苷 酸多态 性 位 点 。 然 也 是最 常 见 的血 友病 类型 之 一 ，但 是 的人 群发病 率 仅为

9、，与 的发病 率 之 比约 为 ， 的病 例 数十 分稀 少 。 其次 ， 基因 突 变 机制水 平的研究也 十 分有 限。 的散发病 例 常 见 ，许 多无 家族 史或先 证者 。 基因 突变 类型 也 多种多样，突 变 突 变 分布覆 盖 基因 序列所 有 区 域 ，许 多突 变 位 点 是否引起 的发生 或仅仅是多态 性 位 点 尚 无法 确定。 再 次 ，迄今为止 ，尚 无一 系 列简 便快 速 的诊 断 手 段。 许 多关 于 的基因 诊 断 方 法 不 是过 于 繁琐、耗 时耗 力 ，就 是无 法 具体 定位 突 变 位 点 ，无 家系 散发病 例 更 是无 法 作 出最 后 诊

10、断 。 因 此 ，虽 然 国 际上早 已 建 立了 基因 突 变 数据 库，但 是数据 库仅仅包 含 了数千例 突 变病 例 ，所 包 含 的突 变 数据 也 十 分的局 限。 临床以 轻型 多见 ，出血情况 比 轻。 在 个 外 显子中 ，由 于 在背 景 中 ，已 经列出了 有 关检测血 友病 的方 法 ，但 是各 种方 法 都具有 局 限性 。 部分诊 断 方 法 操 作 过 于 繁琐，且 耗时费 力费 钱，只 停 留在实 验室 基础研究操 作 中 ，无 法 实 施 到 临床分子诊 断 。 随 着 生 活 水 平的不 断 提 高 ，科技 的不 断 进步 ，对 认 知 的不 断 进步 ，迫

11、 切需 要 建 立起 的诊 断 筛查 体 系 。 现在临 床实际工 作 中 往 往 需 联 合使 用 多种多态 性 连 锁分析 方 法 ，才 能对血 友病 病 人、携 带者 和 产 前 做 出诊 断 。 在无须明确突 变 性 质的前 提 下 ，采用 间 接连 锁分析 方 法 更为简 便、快 捷、易行，但 前 提 条 件 为被 检家系 须有 阳性 家族 史，至 少 有 一 个 先证者 ，同时女性 携 带者 的被 检测位 点 为杂 合 子。 若 多态 性 位 点 均 无 法 提 供 信 息 ，或者 无明确家族 史，仍 须借助 于 直 接基因 诊 断 或基因 直 接测序法 。 因 此 ，本 研 料

12、。 随 着 分子生 物 学的发展 ，基因 治 疗为根治 带来 了希 望，并 在临床应用 中 硕 士学位 论 文参 考 文 献【 縂 】 篴 珿 綣 】 ， 】 ： ， 甴 海 痺 產 畊 痠 痯 痟 珻 与实 践， ， ： 【 】戴 菁 ，刘湘 帆，王 学锋 ，等 中 国 汉 族 血友病 蚁 滴逯 中 碌腇 基因 突【 】王 宁 遂 ，邓 兵，朱静 应用 多聚 酶链 反应和 双 链 凡 庑蚨 訤 基因点 突 变 的研究 谢Q R貉又 荆 ： 縑 ： 緽 ， ： 琍 ： 因 突 变 泄 笛檠 R貉又 荆 ： 垦 站 氨 螅 四 R蜃 覫 槐 湫脱 芯肯肿碵 遗 传 ，【 】 ： ： 突 变 谢Q

13、 R貉又 荆 ： 。 。 覶 ， 硕 士学位 论 文 攻 读硕 士学位 期 间 所 发表 的文 章 感 谢细 胞 生 物 学教研室 所 有 的老 师 和 同学们 对我 的无 私帮 助 和 关 怀 。 感 谢张文 清 主 任、白 晓 春 教授 、邓 凡 副教授 、王 宏 副教授 、熊 静 波 副教授 、曾位 森副教授 、杨翠兰 老 师 、柯 志 勇老 师 ，是老 师 们 的指导 和 帮 助 才 有 我 的不 断 进步 。感 谢邹志 鹏 师 兄 、林骏 师 姐 和 所 有 的同门 师 兄 弟 姐 妹给 予 的真 诚 帮 助 和 关 怀 ，我 感 受 到 了 师 长 同学们 的温 暖。尤 其感 谢李

14、莉 艳师 姐 在实 验和 生 活 中 对我 的无 私帮 助 。 实 验上以 其专 业的知 识 和 敏锐 的学术 洞 察 力 对我 进行悉 心 指导 和 耐心 讲 解 ，使 我 得以 顺利 完成 对本 课 题 的研究。 生 活 上，更 是用 亲 情般 的温 暖关 心 爱 护 我 ，宽厚善良 的理 念 和正直 的人 格都深 深 的影 响 了 我 ，带动 我 积 极 向 上。 感 谢李 强 师 兄 ，对我 的实 验的给 予 的无 私帮 助 和 指导 。 感 谢南方 医 院 妇产 科的贾蓓 师 姐 ，她 的积 极 乐观豁达 的人 格魅 力 ，给 我 带来 了 许 多笑 声和 欢 乐，是我 的良 师 益 友。 感 谢妇产 科分子实 验室 的靳 旺杰 ，在实 验阶 段提 供 的真 诚 帮助 。 硕 士学位 论 文感 谢研究生 学院 和 基础医 学院 给 予 我生 活 和 学习 帮助 的老 师。 英 文 缩 略词中 英 文 对照 表 琔 本 人 郑重 声明：所 呈交 的论 文 是本 人 在导 师 的指导 下 独立进行研究所