食品卫生微生物学检验-2.ppt

1、食品卫生微生物学检测2、菌落总数测定之一：标本稀释及培养。 大肠菌群组测定之一：标本稀释和乳糖发酵试验。 实验流程：标本为10倍、100倍、千倍稀释液。 分别取稀释液1ml，放入灭菌平盘2个和乳糖胆盐发酵管10ml根中。 平皿注入46营养琼脂约15ml，立即旋转培养皿，与一盏茶混合，均匀静置，等待琼脂凝固反转平板培养。 菌落总数的检验普拉姆样品选择几种适当倍数的稀释液，选择2个3个适当稀释度分别在灭菌培养皿内各放入1ml适量的营养琼胶36148 h2h菌落修正数报告，大肠菌群组样品稀释乳糖胆盐发酵管，361， 根据不发生24h2h瓦斯气体的大肠菌群群阴性伊红美青琼脂平板、361 24h2h革兰

2、氏染色乳糖发酵管、361、24h2h克阳性无芽胞杆菌瓦斯气体发生剂大肠菌群群阴性大肠菌群群阳性大肠菌群阴性报告、菌落总数、检测规范检测菌落总数的条件，未能检测出检测样品中实际活菌数。 由于厌氧菌、微需氧菌、嗜冷嗜热菌以及有特殊营养要求的细菌，在这种条件下不能生长或不能很好地生长。 目前的检测规范方法得到的结果仅含有在营养琼脂培养基中能够生长发育的嗜中温的好氧或兼性厌氧性细菌菌落总数，其数量低于实际存在的活菌数。 菌落总数是判定标本受细菌污染程度的指示菌。 不能说明污染菌的种类和由来。 检查菌落总数的注意事项，进行菌落总数的检查时，要接种空白的平盘作为对照，检查培养基、器皿和稀释液的灭菌效果。

3、吸管出出进进瓶或试管时，请勿使吸管嘴接触瓶口或管口的周边部分。 稀释样品时，请注意沿管壁，避免接触管内稀释液，避免吸引管前端外侧部分附着的检液混入。 为了防止片状菌落的发生，将平皿放入标本中后，20分钟内将营养琼脂注入皿内，立即均匀混合。 皿内琼脂完全凝固后，不长期放置后反转培养，琼脂完全凝固后，数分钟内反转平皿进行培养，可避免菌落蔓延。 检测大肠菌群组、大肠菌群组通常采用定量方法，只有在规定不能检测的情况下才采用定性方法，常用的定性检测方法是多管发酵法。 多管发酵法是公认的检验标本中大肠菌群组的传统方法，结果以最大可能数量(Most Probable Number MPN )表示。 它可以由

4、概率公式得到，并被用于估计样本中的大肠菌群群的密度。 根据接种量和管数，用100ml样品中含有的大肠菌群群细菌的最可能数进行了报告。 稀释度的选择对于：低污染水样，选择10ml、1ml和0.1ml这3个稀释度的污染较重时，需要增大1ml、0.1ml、0.01 ml以上等稀释度。 如果不能估计其细菌污染量，可以增加一些稀释度，结果出来后根据MPN表适当选择。单号组分别检出1号标本“屠宰场井泉水”。 2节目分别检查了2号标本“磨粉机茶或豆浆”。 分别用P10的“菌落总数测定”标本稀释和培养、P16的“大肠菌群群测定”标本稀释和乳糖发酵试验方法进行了操作。 请注意稀释一个标本，分别进行两个实验。 标

5、本混合均匀。 使用无菌器材。 严格的无菌操作。 在操作之前做标记。 在平皿底部，标记了225ml生理盐溶液瓶、中试管和10ml乳糖胆盐发酵管的上2/3。 例如，1-1-1表示第1组、1号标本，稀释10倍。 10-2-3表示第10组、第2标本、1000倍稀释。 1 .先用10ml刻度的吸管分别吸入9ml盐水(从100ml的盐水瓶)放入中试管，每组各2根，用百倍和千倍稀释。 用10ml刻度的吸管吸取25ml样品，加入225ml生理盐溶液，充分摇动，制成1:10的均匀稀释液。3.1336010分别用1ml刻度的吸管吸取1ml稀释液，放入直径9厘米的无菌空盘2根中，放入3根乳糖胆盐发酵管和1根百倍稀释

6、的大姨妈食盐水管中(注意：沿管壁缓慢注入，吸管的前端不接触管内稀释液，以下相同)， 均匀混合经百倍稀释的大姨妈盐水管涡流振动，4 .更换另一个1ml刻度吸管，按照上述方法，分别吸取1ml均匀百倍稀释液，注入2个平皿、3根乳糖胆盐发酵管和1根千倍稀释的大姨妈盐水管。 5 .这样，依次进行10倍、100倍、千倍的稀释和采样。 在含有6.1ml标本的9cm大板块中(7个大板块必须全部取样后操作)，注入约15ml培养基，立即大板块、右三转、左三转、右三转或同向旋转12周，使培养基旋转流动，混合成一盏茶均匀。 静置2030分钟，等待琼脂完全凝固。 反转平板，培养3648小时，观察结果。 将130ml营养

7、培养基加热溶解，等温度下降到5060，在47恒温水浴罐中加入平衡温度。 225ml生理盐溶液用于10倍稀释，9ml生理盐溶液用于100倍和千倍稀释。25ml、1ml、1ml、225ml生理盐溶液、稀释倍数： 101 102 103、菌落数： 164 20、1641021.64104 CFU/ml、测定对象样品、15 25ml、1ml、1ml、稀释倍数： 10-1102103、1ml3根刻度吸管的无菌操作方法、吸引球的选择：无菌操作时，一般不使用洗耳球的5毫升和10毫升的刻度吸管用的牙膏球，1毫升的刻度吸管适用适当的小吸引球。 无菌操作方法：用左手手指握住吸管头包装纸茄克衫约5厘米，右手向前转动纸茄克衫，撕裂包装纸茄克衫，如果吸管头外面有棉质棉花，将其焚烧，盖上球，以免空气从连接部漏出。 此时包装纸包的出口被污染了。 反向打开包装纸，折叠无菌倾斜出口，取出吸引管，管头应以3040度的角度离开无菌包装纸罩。 吸引球的按压程度，按压松弛后，最好能够吸引110种液体。 该按压的程度容易特罗尔吸引管中的液体，在移液中失控、对吸引球过度加压、减压，从而液体流出、空气难以进入吸引管内，能够将污染抑制在最小限度。 思考题，食品中的微生物为什么繁殖快，种类多，食品被微生物污染后有什么危害？ 标本稀释时，为什么每个稀