药物定量分析样品与分析方法验证

1、第4章，药物定量分析样品和分析方法的验证，第1节，定量分析样品的预处理，第1节。研究对象概述：含金属或特殊元素如卤素、硫、磷、硒的药物预处理。第二，分析方法没有有机破坏。第三，分析方法没有有机破坏。首先，概述，原料：不经特殊处理直接测定，原料：在有机破坏后测定。制剂：排除了处方中的干扰成分和药物。第二，分析方法没有有机破坏，(1)直接测定1。配位滴定2。氧化还原法(2)水解后的测定1。碱水解后的测定。酸水解后的测定。还原分解后的测定。无有机损伤的分析方法1。配位滴定葡萄糖酸钙含量测定取本品0.5克，准确称量，加入100毫升水，加入15毫升氢氧化钠试液和0.1克钙黄绿素指示剂，用乙二胺四乙酸二钠

2、滴定剂(0.05毫升/升)滴定至溶液由紫色变为纯蓝色。每1毫升乙二胺四乙酸滴定剂(0.05毫升/升)相当于22.42毫克C12H22CaO14.H2O。二、无有机损伤的分析方法，(1)直接测定法(2)。氧化还原法葡萄糖酸锑钠含量测定取本品约0.3g，准确称量，放入带塞子的锥形瓶中，加入100毫升水、15毫升盐酸和10毫升碘化钾试液，塞紧，摇匀，在暗处放置10分钟。用硫代硫酸钠(0.1钼)滴定溶液。每1毫升硫代硫酸钠滴定溶液(0.1毫升/升)相当于6.088毫克锑。2.无有机损伤的分析方法，(2)水解后的测定方法1。碱水解三氯丁醇后的测定方法含量测定取本品约0.1g，准确称量，加入5ml乙醇，溶

3、解，加入20%氢氧化钠溶液5ml，加热回流15分钟，冷却至室温，加入20ml水和5ml硝酸，准确加入硝酸银滴定溶液(0.1 mol/L)。加入5毫升邻苯二甲酸二丁酯，塞紧，用力摇匀，加入2毫升硫酸铁铵指示剂溶液，用硫氰酸铵滴定溶液(0.1毫升/升)滴定，用空白试验校正滴定结果。每1毫升硝酸银滴定溶液(0.1毫升/升)相当于6.216毫克C4H7Cl3O.1/2H2O.2。无有机损伤的分析方法，(2)水解后的测定方法(2)。酸水解后的测定方法硬脂酸镁含量测定取本品约1克，准确称量，加入50毫升硫酸滴定溶液(0.05摩尔/升)，煮沸至油层澄清，继续加热10分钟，冷却至室温，加入1 2滴甲基橙指示剂

4、溶液，用氢氧化钠滴定。每1毫升硫酸滴定溶液(0.05毫升/升)相当于2.016毫克氧化镁。2。无有机破坏的分析方法，(3)还原分解后的测定，1。碱还原后的测定。酸性还原后的测定。通过氧化游离金属离子测定含量。有机破坏后的分析方法，1。湿破坏，2。干破坏，1。高温点火，2。氧气瓶燃烧，3。有机破坏后的分析方法，首先，凯氏定氮法是适用的：含氨基或酰胺结构的药物的原理：含氮药物用硫酸加热，将有机氮转化为无机氨，然后测定氮含量。3。有机破坏的分析方法，1。用凯氏定氮法湿法破坏双氯芬酸胺含量测定取本品约0.3g，准确称量，按氮测定法(附录D第一种方法)测定。每1毫升硫酸滴定溶液(0.05毫升/升)相当于

5、15.26毫克C6H6Cl2N2O4S2。3。有机破坏的分析方法，1。干式破坏氧气瓶燃烧法适用于含有卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限量检查或含量测定，以及药物中杂质硒的检查。，3。有机破坏的分析方法，1。氧气瓶燃烧法干法破坏碘苯酯含量测定取本品约20毫克，准确称量，按照氧气瓶燃烧法(附录C)进行有机破坏，用2毫升氢氧化钠试液和10毫升水作为吸收液，加入溴乙酸溶液(取10克醋酸钾，加入适量冰乙酸溶解，加入0.4毫升溴)加入冰乙酸制成100毫升)10毫升， 紧紧塞住，摇动，放置几分钟，加入约1毫升甲酸，用水冲洗瓶口，并通入气流约35分钟，以除去残留的溴蒸气，加入2克碘化钾，紧紧塞住，摇动均匀

6、，用硫代硫酸钠滴定溶液(0.02毫升/升)滴定。 当接近终点时，加入淀粉指示剂溶液并继续滴定。每1毫升硫代硫酸钠滴定溶液(0.02毫升/升)相当于1.388毫克C19H29IO2。(1)容量分析适用于化学原料的测定(2)容量分析的相关计算(3)含量测定(2)光谱分析(3)色谱分析，定量分析的特点(1)容量分析具有设备简单、操作简便快速、耐久性高、测定结果准确(RSD 0.2%)的优点。特异性差，适用于高含量样品的分析，常用于化学原料的测定。掌握含量测定的计算公式和方法。二是定量分析方法的特点，二是光谱分析(1)紫外分光光度法的特点：1。高灵敏度，10-4 -10-7g/ml。2.准确度高，相对

7、标准偏差%: 2%-5%。3.该仪器价格低廉，操作方便，易于推广。4.广泛使用。二是定量分析方法的特点，二是光谱分析(1)紫外分光光度法含量测定方法1。对照品比较方法2。吸收系数法3。计算分光光度法。4.比色法，第二部分是特征定量分析，第二部分是光谱分析，第二部分是荧光分析。1.高灵敏度，10-10 10-12克/毫升。2.在低浓度溶液中。3.确定测试溶液时，使用参考溶液代替参考溶液来校正仪器的灵敏度。4.利用荧光衍生试剂提高分析方法的灵敏度和选择性。第二节是关于定量分析方法的特点，第三节是关于色谱分析，第一节是关于高灵敏度(10-12 -10-15g/ml)、高选择性、高效率、高速度和广泛应

8、用。第二节：定量分析方法的特点；第三节：色谱分析(1)高效液相色谱系统的适用性(1)理论塔板数(2)分辨率(3)重复性(4)拖尾因子含量的测定方法(1)内标法(2)外标法；第三节：药物分析方法的验证，旨在证明所建立和采用的方法适合相应的检测要求。含量准确度精密度、特异性、检测限、定量限、线性、线性范围和持久性，第3节药物分析方法的验证，1。准确度是指用该方法测得的结果接近真实值或参考值的程度，用回收率表示。在第三部分，药物分析方法的验证，第二，精密度是指平行测量的测量值(实验值)彼此接近的程度。在第三部分，药物分析方法的验证，以及在第三部分，特异性意味着所采用的方法能够在存在其他成分的情况下准

9、确地确定受试物质的特征。第三节：药物分析方法的验证；第4节：检测限(LOD)是指样品中可检测到的被测物质的最低浓度或含量。第三部分是药物分析方法的验证，第五部分是定量限(LOQ)，是指样品中可定量测定的被测物质的最小量。在第三部分，药物分析方法的验证，在第六部分，线性意味着在一定范围内，样品浓度与响应值成正比。第三部分是药物分析方法的验证，第七部分为了实现安全、合理、有效的临床用药，人们越来越要求了解和提供更多的体内药物信息，即研究药物及其制剂在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程、作用机制和药效，从而促进药物动力学、生物药剂学和临床药理学等新的前沿学科的发展和建立。第四节体内药物分析简介，定义：

10、体内药物分析是通过分析手段了解体内药物的数量和质量的变化，获取各种药代动力学参数、代谢途径等信息。第4节介绍体内药物分析，任务：1)分离和测定各种体液、组织、器官和排泄物中的药物和代谢物。2)研究和开发新的临床常规测定方法。3)开展分析质量管理，提高测定技术和效率，以获得快速、准确、可靠的测定结果。4)开展方法学研究，及时为相关学科的研究提供合理优化的分析条件和方法，并对各种方法的敏感性、排他性和准确性进行评估。5)参与对相关学科研究中获得的分析结果的澄清，使获得的测量数据更有助于解释问题。第四节生物样品分析方法的基本要求。首先，体内药物到达的样本类型，如各种体液、器官和组织、排泄物等。是体内

11、药物分析的对象。血液是最常用的生物样本。第四节生物样品分析方法的基本要求。样品类型(1)血液(1)抗凝血剂(肝素、柠檬酸、草酸盐、乙二胺四乙酸等)。)加入到全血血浆中，离心后取上清液。(2)血清和全血不加抗凝剂，在血液中纤维蛋白原的影响下，由于血液凝固而沉淀出澄清的黄色液体，离心后取上清液。(3)向全血中加入抗凝剂，并充分混合以防止血液凝固。第四节生物样品分析方法的基本要求，1。样本类型(2)尿液样本中的尿液药物测定主要用于药物剂量恢复、药物肾清除、药物代谢和生物利用度研究，也可用于快速和慢速乙酰化代谢的测定等。尿样浓度与血样浓度相关性差。第四节生物样品分析方法的基本要求。样品类型(3)唾液中

12、的药物浓度通常与血液浓度有关，唾液中的药物浓度可以用来反映血浆浓度。唾液通常在漱口后15分钟收集，离心后取上清液。第四节是生物样品分析方法的基本要求。第二，储存的血浆和样本血清必须在采血后立即分离。否则，血液凝固后的冷冻保存会由于冷冻过程中的细胞溶解而阻碍血浆或血清的分离，并由于溶血而影响药物浓度的变化。尿样应立即测定，否则应添加防腐剂或低温冷藏。第四节是生物样品分析方法的基本要求，第三节是生物样品分析的预处理技术。微量药物存在于大量的生物介质中。如果直接测定，内源性物质可能会产生干扰，并且药物浓度过低，无法满足仪器的灵敏度要求。因此，必须对生物样品中的药物进行分离、纯化和浓缩，必要时应对待测

13、成分进行化学修饰，为最终测定创造有利条件。第四节生物样品分析方法的基本要求，第三节生物样品分析的预处理技术(1)蛋白质去除(2)结合物的水解(3)有机破坏(4)分离、纯化和浓缩(5)化学衍生化方法，第四节生物样品分析方法的基本要求，(1)蛋白质去除的目的：1)释放与蛋白质结合的药物2)减少后续溶剂萃取过程中的乳化现象；3)保护仪器的性能；第四节生物样品分析方法的基本要求；(1)蛋白质去除方法；1)加入可与水混溶的有机溶剂可以改变蛋白质分子内部和分子之间的氢键，从而导致蛋清物质凝结，然后释放结合的药物。第四节是生物样品分析方法的基本要求。2)加入中性盐会改变溶液的离子强度，使蛋白质脱水后沉淀。离

14、心后，可获得含有药物及其代谢物的上清液。第四节：生物样品分析方法的基本要求；3)如果酸碱度低于蛋白质的等电点，加入强酸会使蛋白质分子的阳离子形成不溶性盐并沉淀。第四节：生物样品分析方法的基本要求；4)加入含有锌盐和铜盐的沉淀剂当酸碱度高于蛋白质的等电点时，蛋白质分子中带负电荷的羧基与金属离子形成不溶性盐并沉淀。第四节生物样品分析方法的基本要求)酶水解中最常用的蛋白水解酶：枯草杆菌蛋白酶能分解蛋白质并释放药物。第4节，生物样品分析方法的基本要求，(2)结合物的水解尿液中的药物大多是结合的。一些含-羟基、-COOH、-NH3、-SH的药物可与内源性葡萄糖酸或硫酸形成葡萄糖苷或硫酸结合物。1)酸水解

15、，2)酶水解，第四节，生物样品分析方法的基本要求，以及(3)有机破坏，尿液中的药物大多是共轭的。一些含-羟基、-COOH、-NH3、-SH的药物可与内源性葡萄糖酸或硫酸形成葡萄糖苷或硫酸结合物。1)酸水解；2)酶水解；4)生物样品分析方法的基本要求；4)分离、纯化和浓缩；1)生物样品的分离和纯化；1)液-液萃取(LLE)；2)液固萃取；4)生物样品分析方法(1)液-液萃取(LLE)涉及亲脂性药物和强极性内源性水溶性物质，有机溶剂可以去除大部分干扰物质。注意：1)所用的溶剂对测试组分具有高溶解度，与水不混溶，无毒，化学稳定，不易乳化。常用：乙醚、甲基叔丁基醚、氯仿、乙酸乙酯等。2)有机相：水相=

16、1: 1 (2: 1) 3)水相最佳酸碱度的选择与药物的pKa有关。第4节：生物样品分析方法的基本要求，(2)液-固萃取(LSE)的优点：(1)引入的杂质少，(2)无乳化现象，(3)萃取效率高(室温下操作的缺点：成本高，重现性稍差)分类：亲水性，疏水性，(4)生物样品分析方法的基本要求，(5)待测组分中生物样品的浓度在萃取过程中，待测微量组分往往分布在较大体积的萃取溶剂中，不能直接供应和测定。第四节生物样品分析方法的基本要求，(5)化学衍生法，(1)将样品中的药物转化为可分离的性质，(2)提高检测灵敏度，(3)增强药物稳定性，(4)提高旋光异构体的分离能力，(5)生物样品分析方法的基本要求，(1)生物样品分析方法的验证，(2)标准曲线和线性范围，(3)精密度和准确度，(4)灵敏度，(